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为了获得有效纯化抗体的方法,将杂交瘤细胞株(4C3)用细胞培养液扩大培养后制备腹水,所得腹水依次用50%和45%的饱和硫酸铵沉淀后再分别用亲和层析和反相层析进一步纯化抗体,并用SDS—PAGE和间接酶联免疫吸附试验分析其纯化抗体的纯度和活性。结果表明,亲和层析获得了较高纯度的抗体,并且抗体活性没有丧失,反相层析获得的抗体有较好的活性,但抗体中还有微量的杂蛋白。因此亲和层析是单抗纯化的较好途径,所获得的高纯度单抗将为O型口蹄疫病毒的基础研究和应用研究提供良好的物质基础。 相似文献
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O型口蹄疫病毒单克隆抗体的制备和鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
利用O型口蹄疫病毒(FMDV)免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与Sp2/0细胞进行融合,经间接ELISA方法筛选和7次亚克隆后获得2株能稳定分泌单克隆抗体(MeAb)的杂交瘤细胞株.经间接ELISA检测,2株杂交瘤细胞株(3E1、7E6)的腹水效价分别为1:25 600、1:102 400.间接免疫荧光试验和特异性试验表明2株McAb可与不同株的O型FMDV反应,而不与其他血清型的FMDV反应.Western blot和叠加试验表明2株单抗可识别0型FMDV结构蛋白VP1上的同一个抗原表位.此特异性McAb的获得将为O型FMDV疫苗的研制和诊断方法的建立奠定基础. 相似文献
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猪伪狂犬病是目前规模化生猪养殖生产中一种危害较为严重且难以防控的疫病,该病在临床生产中传染性强,死亡率高,且易形成隐性感染,很难将病原彻底清除,给生猪养殖业带来很大的经济损失.本文在猪伪狂犬病原相关生物学特性的基础上,根据猪伪狂犬病的临床症状及病理变化,对该病进行系统诊断及流行情况分析,并根据实际生产情况提出了针对性的... 相似文献
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宋帅 《湖南农业大学学报(自然科学版)》2011,37(3):290-294
副猪嗜血杆菌可引起猪的格氏病,其不同毒力菌株分子水平上的差异还不清楚.从广东省不同地区猪场送检病猪中分离到9株细菌(H1~H9),并对其16SrRNA基因进行鉴定和分析.经形态观察、生化特性鉴定和PCR鉴定,所分离的9株细菌为阳性副猪嗜血杆菌,具有卫星现象和不溶血特征.用hhdA基因引物从分离菌株中扩增到了特异性片段,... 相似文献
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副猪嗜血杆菌hhdB基因的鉴定和分析 总被引:2,自引:0,他引:2
为了明确副猪嗜血杆菌致病菌株的毒力相关因子,从广东省不同地区发病猪场送检病猪中分离到9株细菌(H1~H9),并对其hhdB基因进行了鉴定和分析。结果显示,所分离的9株细菌经形态观察、生化特性鉴定和PCR鉴定为副猪嗜血杆菌阳性,并具有卫星现象和不溶血特征。用hhdB基因引物从分离菌株中扩增到了特异性片段,序列分析表明,所获得的hhdB基因序列与GenBank中副猪嗜血杆菌SH0165的hhdB基因同源性为99%,分离菌株hh-dB基因之间序列同源性为97.5%~99.8%,推导的氨基酸序列与少数放线杆菌、杜克雷嗜血杆菌的溶血素激活蛋白具有一定的相似性。RT-PCR扩增到了hhdB基因的目的条带,表明该基因在分离菌株中得到了相应的表达。这将为副猪嗜血杆菌致病菌株毒力特征基因的鉴定以及副猪嗜血杆菌致病机理的研究奠定基础。 相似文献
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C型口蹄疫病毒型特异性抗原的表达与鉴定 总被引:2,自引:1,他引:2
[目的]为C型FMDV型特异性多克隆抗体、单克隆抗体的制备和FMDV定型提供理论依据。[方法]以含有C型口蹄疫病毒(FMDV)结构蛋白基因VP1的重组质粒pGEM—CP1为模板,设计特异性表达引物,扩增VP1及其c端编码区。对C型口蹄疫病毒VP1及其c端进行原核表达,并测定反应原性。利用纯化的C型VP1及其C端融合蛋白建立间接EHSA,分别对0、A、C、Asia1四型豚鼠阳性血清进行检测,确定C型VP1及其C端与其他3型FMDV抗体的型间交叉反应性。[结果]构建了pPR0-CVP1、pPR0-CVP1c重组原核表达质粒,实现了C型口蹄疫病毒VP1及其C端的高效表达,目的蛋白的分子量大小分别为33kD和20kD。Westernblot显示,VP1及其C端融合蛋白均可与对应血清型的豚鼠阳性血清反应。C型VP1及其C端与其他血清型的FMDV阳性血清均未发生交叉反应,且以VP1C端的型特异性最好。[结论]获得了C型FMDV特异性抗原。 相似文献
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【目的】针对猪繁殖与呼吸综合征(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome,PRRS)毒株存在多样性和疫苗免疫效果不佳的问题,探索PRRS疫苗对仔猪最佳免疫方案。【方法】分别在A、B、C 3个猪场开展试验,每个猪场采用4种不同的PRRS疫苗组合:第1种,14日龄同时免疫PRRS弱毒苗和灭活苗;第2种,4日龄免疫PRRS弱毒苗和35日龄免疫灭活苗;第3种,14日龄和35日龄免疫弱毒苗;第4种,14日龄免疫弱毒苗。通过免疫后的抗体滴度、病毒血症和生产参数评估PRRS疫苗免疫效果。【结果】不同免疫组合比较发现,A2、B3、C3抗体水平最高,S/P值分别为2.50、2.63和2.99;A2、B2、B3、C1血清中PRRSV核酸阳性率最低,分别为12.5%、0、0、6.3%;A1、B2、C1发病率最低,分别为10%、2%和8%。【结论】14日龄同时免疫PRRS弱毒苗和灭活苗,14日龄免疫PRRS弱毒苗和35日龄免疫灭活苗,两种免疫组合免疫效果最好。 相似文献