猪葡萄球菌EXHC、SHETA基因的克隆、序列分析及蛋白结构预测     

张乐宜  李艳  蔡汝健  蒋智勇  刘燕玲  宋长绪 《中国畜牧兽医》2014,41(10):17-22

为分析猪葡萄球菌脱落毒素EXHC和SHETA基因结构并预测其所编码蛋白的结构和功能,本试验根据GenBank已报道的猪葡萄球菌脱落毒素EXHC和SHETA基因序列分别设计了1对特异性引物,从猪葡萄球菌GDZC株中扩增获得EXHC和SHETA基因片段,大小分别为1007和971 bp。序列分析结果表明,EXHC基因与猪葡萄球菌丹麦分离株(GenBank登录号:AF515455)及猪源松鼠葡萄球菌河北分离株(GenBank登录号:JF755400)的核苷酸序列、氨基酸序列同源性均为100.0%,而与其他葡萄球菌脱落毒素基因的核苷酸、氨基酸序列同源性分别为3.3%~53.9%和7.9%~44.2%。SHETA基因与日本分离株(GenBank登录号:AB036768)的核苷酸序列同源性为96.2%,氨基酸序列同源性为98.4%,在保守区共有31个碱基发生突变。利用DNAStar软件对EXHC和SHETA蛋白结构进行分析,结果显示EXHC基因编码的蛋白为亲水性蛋白,SHETA基因编码蛋白为疏水性蛋白,抗原性较差。本研究从猪葡萄球菌GDZC株中成功扩增获得EXHC和SHETA基因片段并对其编码的蛋白结构进行了预测,证实了中国分离的猪葡萄球菌同时携带有EXHC和SHETA 2种毒素基因,为进一步研究猪葡萄球菌的致病机理及毒素之间的相互作用提供了理论依据。  相似文献   

猪繁殖与呼吸综合征病毒流行株Jiangxi-3的全基因组序列分析   总被引：2，自引：0，他引：2  

王旭荣  张彩勤  赵炳武  张春红  杨增岐  宋长绪 《上海交通大学学报(农业科学版)》2009,27(2)

通过RT-PCR分段扩增PRRSV流行株Jiangxi-3的基因组,参照VR2332序列,根据各片段之间相重叠的区域,将扩增片段的序列依次拼接获得Jiangxi-3完整的全基因组,并通过DNAStar软件对其进行分析.结果表明:Jiangxi-3的Nsp2推导氨基酸发生30个氨基酸的不连续缺失,与HB-1(sh)/2002相比,Nsp2推导的第480位氨基酸由D突变为E,缺失的位置为第481位氨基酸和532～560位氨基酸;Jiangxi-3与2006年Tian Kegong等从江西"高热病"病死猪体内分离的毒株JXA1的各个结构蛋白阅读框的氨基酸同源性为98.0%～100%;Jiangxi-3与HB-1(sh)/2002、VR2332、RespPRRS MLV的Nsp2推导的氨基酸同源性分别为94.7%、77.8%、77.7%,由遗传系统发育树可知与2006年以前分离的毒株相比,Jiangxi-3与HB-1(sh)/2002的亲缘关系较近.说明Jiangxi-3和JXA1极可能由同一毒株HB-1(sh)/2002演化而来.  相似文献   

猪流行性腹泻病毒nsp1、nsp5和N蛋白的重组腺病毒载体的构建及免疫原性比较     

杨霞  王爽云  于林洋  徐舸  郑继豪  王志朋  张歆明  刘燕玲  张乐宜  徐铮  宋长绪 《黑龙江畜牧兽医》2024,(3):73-78

为研究猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)nsp1、nsp5和N蛋白的免疫原性,试验以复制缺陷型人腺病毒5型(AdMax系统)为载体,利用PEDV-GDgh毒株(登录号为MG983755),通过PCR方法扩增出GDgh毒株nsp1、nsp5、N基因,并将其连接到腺病毒穿梭载体上,构建重组穿梭质粒。将3个重组穿梭质粒和腺病毒骨架载体共转染至HEK-293A细胞中获得第1代重组腺病毒,分别命名为rAd-nsp1、rAd-nsp5、rAd-N。用第1代3株重组腺病毒接种HEK-293A细胞,连续传代,通过RT-PCR和Western-blot方法鉴定第3代重组腺病毒,并采用Reed-Muench法计算病毒半数组织培养感染剂量(TCID₅₀)。以3株重组腺病毒的第3代病毒液免疫小鼠,收集血清并检测特异性IgG抗体水平。结果表明：试验成功构建出带有nsp1、nsp5、N基因的重组穿梭质粒;分别用重组腺病毒rAd-nsp1、rAd-nsp5、rAd-N感染正常HEK-293A细胞,可产生典型的细胞病变并观察到荧光信号;...  相似文献   

5种免疫增强剂对猪PBMC增殖反应的影响     

谢明权  宋长绪  黄忠 《中国兽医学报》2000,20(5)

采用胸腺素、黄芪多糖、人胎盘组织液、人重组白细胞介素 2 ( r IL-2 )及左旋咪唑 ,以不同浓度刺激体外培养不同时间的猪外周血单个核细胞 ( PBMC) ,结果证明这几种佐剂均对猪 PBMC有明显刺激作用 ,且与浓度有依赖关系 ,浓度过高时对其有抑制作用 ,适宜的浓度为 1 0 4倍稀释度。时间因素的影响较小 ,但培养 36h加入各种佐剂后 PBMC增殖反应未见增强。 PBMC代表机体总的细胞免疫水平 ,通过佐剂对体外培养的PBMC增殖反应水平影响的测定 ,为动物用免疫佐剂和免疫增强剂的筛选提供了一种有效方法。  相似文献   

猪宿主蛋白G3BP1对猪圆环病毒2型在PK15细胞上复制的影响     

刘献辉  张歆明  申翰钦  班艳芳  刘艳玲  张乐宜  宋长绪 《畜牧与兽医》2021,(4):101-106

猪宿主蛋白G3BP1在宿主抵抗病毒感染过程中起着重要作用,然而还未有相关报道G3BP1与猪圆环病毒2型(PCV2)感染过程中的联系。本文构建了G3BP1真核表达载体和干扰RNA,实现在PK15细胞上G3BP1的过表达及敲低。结果发现,PCV2感染细胞24 h后病毒复制出现显著差异,感染48 h相比于感染24 h病毒复制差异更显著,表明G3BP1能显著促进PCV2复制。过表达或敲低G3BP1后,用干扰素刺激DNA(ISD)刺激12 h,G3BP1能促进ISD诱导IFN-βmRNA的表达;感染PCV212 h后,G3BP1也能正调控IFN-βmRNA的转录。本文揭示了宿主蛋白G3BP1显著促进PCV2的复制,很可能是通过上调IFN-β表达引起的。  相似文献   

4种因素对NK细胞杀伤活性的影响   总被引：1，自引：0，他引：1  

丛丽媛  宋长绪  陈德坤  张春红 《动物医学进展》2006,27(5):84-86

为了探讨效应细胞与靶细胞的比例(效靶比)、孵育时间、显色时间以及小牛血清浓度对NK细胞杀伤活性的影响,采用乳酸脱氢酶释放法来测定不同因素对NK细胞杀伤活性的影响,结果表明,最佳效靶比和孵育时间分别为50∶1和2 h。在最优效靶比及孵育时间的基础上,显色0.5 h,小牛血清浓度为50 mL/L时NK细胞活性最高,证明4种因素对NK细胞杀伤活性均有不同程序的影响。  相似文献   

猪场如何实现有效消毒     

宋长绪 《北方牧业》2019,(10)

<正>生产、消毒好不好和生产流程的设计有很大的关系。一个公司的生产流程设计相当重要,所以大家特别重视流程。通过这次非洲猪瘟以后,猪场的设计理念应该有很大的更新和改进。比方说很多猪场原来是办公区和养猪饲养员的生活区不分开的,办公人员和饲养员共用一个饭堂甚至共用一个宿舍区。现在很多猪场,把办公人员往猪场外面搬,饭堂也要分开。  相似文献   

PCV-2分离新方法的建立及广东株全基因序列的分析     

赵炳武  于海霞  郝永清  蒋智勇  宋长绪 《动物医学进展》2008,29(4):12-17

利用体外环化的猪圆环病毒2型(PCV-2)全基因的感染性,建立一种分离PCV-2的方法。根据GenBank中PCV-2的基因序列,设计合成1对扩增PCV-2全基因组的特异性引物。通过PCR方法从广东发病猪病料扩增到PCV-2全基因组片段,将该片段克隆入pMD18-T载体,筛选获得阳性重组质粒pM-DT-YF并测序。将所测序列与GenBank中发表的PCV毒株序列进行同源性比较。将质粒pMDT-YF大量扩增,经SacⅡ酶切质粒得到PCV-2全基因组,通过T4连接酶体外环化后,脂质体介导转染PK-15细胞,盲传8代。用间接免疫荧光抗体试验(IFA)可检测到特异性荧光。将转染细胞稀释后接96孔细胞培养板,培养3 d。用荧光定量法检测各孔的PCV-2拷贝数,选择拷贝数最大的细胞扩大培养,经IFA法测定病毒滴度显著增加。结果表明,利用具有感染性的体外环化的全基因组的克隆转染PK-15细胞,并通过选择压力可获得较高滴度的具有感染性的PCV-2。  相似文献   

华南地区猪圆环病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒检测分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

梁鹏帅  蔡汝健  刘燕玲  孙瑞琴  张龙现  宋长绪 《动物医学进展》2012,33(4):15-21

为了解华南地区猪圆环病毒及猪繁殖与呼吸综合征病毒的最新流行情况,采集了华南地区11个规模猪场各饲养阶段猪血清807份,用套式PCR(nPCR)检测猪圆环病毒1型(PCV-1)和猪圆环病毒2型(PCV-2);采集了若干猪场2010年1月至2011年8月期间有咳嗽、喘气、消瘦及疑似PDNS等临床症状的猪血清312份,以及无临床症状猪血清104份,以nPCR检测PCV-2,以一步法反转录PCR(RT-PCR)检测猪繁殖与呼吸综合征病毒。结果发现,所调查的11个规模猪场中只有5个检出PCV-1,所有猪场均检出PCV-2。PCV-2阳性率为30.61%,而PCV-1阳性率仅为4.21%;经产母猪和7周龄以上保育猪PCV阳性率最高;有临床症状的猪血清PCV-2阳性率为58.65%,PRRSV阳性率为37.82%,PCV-2阳性猪群中有39.89%的猪同时感染PRRSV;有症状猪群7月～9月的PCV-2感染率最高,而1月～3月最低;无临床症状猪血清PCV-2阳性率为27.9%,PRRSV阳性率为0.96%,PCV-2与PRRSV无混合感染。证明PCV尤其是PCV-2在华南地区仍广泛传播并流行,而且PCV-2与PRRSV混合感染致病情况较多。PCV-2的感染率与季节有一定的相关性,种猪带毒情况严重。  相似文献   

中和抗体在抗猪繁殖与呼吸综合征感染过程中的作用     

宋志军  宋长绪  杨增岐 《动物医学进展》2005,26(12):24-28

中和抗体在抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染过程中起重要作用,被动输入PRRSV的中和抗体可预防PRRSV感染妊娠母猪,并且对母猪和仔猪都可起到消除性免疫作用。然而在自然感染PRRSV的过程中,这种中和抗体产生较晚,为病毒在宿主体内大量复制并感染其他易感动物提供了充裕的时间。PRRSV的主要中和位点位于糖蛋白GP5,核心区域称作B位点,GP5的另一个显性表位称作A位点,是非中和位点。A位点与B位点的同时出现将会抑制机体对B位点的免疫反应。当PRRSV发生中和位点突变时,产生无位点A的PRRSV,这种类型的PRRSV可诱导中和抗体的产生。文章通过对PRRSV的免疫反应、中和抗体的作用以及中和位点等三方面的阐述,综述了中和抗体在抗PRRSV感染过程中的作用。  相似文献