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101.
发酵乳酸杆菌F6对鸡小肠上皮细胞β-防御素-9基因表达的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
采用实时荧光定量PCR(fluorescence quantitative PCR,FQ-PCR)检测益生性发酵乳酸杆菌F6刺激鸡小肠上皮细胞后抗菌肽β-防御素-9(AvBD9)基因表达变化,为从益生菌与上皮细胞抗菌肽表达关系的新角度解析益生菌发挥益生作用的新途径和机制提供一定的基础及依据。利用不同剂量(2×105,2×106,2×107 CFU)的发酵乳酸杆菌F6分别刺激原代培养的鸡小肠上皮细胞4h,提取刺激后的细胞总RNA,反转录为cDNA,FQ-PCR检测抗菌肽AvBD9基因表达变化。结果表明,未受刺激的正常对照组也检测到AvBD9mRNA的表达,发酵乳酸杆菌F6能上调AvBD9基因表达。刺激组中AvBD9mRNA的表达在不同剂量组之间存在差异。2×105 CFU/mL组AvBD9mRNA的表达量极显著高于未受细菌刺激的对照组和2×106 CFU/mL组(P〈0.01),显著高于2×107 CFU/mL组(P〈0.05)。2×106 CFU/mL组和2×107 CFU/mL组AvBD9mRNA的表达量显著高于未受细菌刺激的对照组(P〈0.05),但2×106 CFU/mL组和2×107 CFU/mL组之间无显著差异(P〉0.05)。发酵乳杆菌F6与鸡小肠上皮细胞相互作用过程中可提高抗菌肽AvBD9mRNA的表达,且存在剂量依赖性。 相似文献
102.
从副结核分支杆菌K-10菌株基因组中扩增出516 bp的MAP1588C基因片段,插入原核表达载体pET-28b(+),转化至大肠杆菌BL21(DE3),在0.5 mmol/L的IPTG诱导下进行表达;利用融合蛋白的组氨酸标签进行亲和层析纯化重组蛋白;通过抗6 His标签抗体的Western blot验证了纯化蛋白产物;另外,副结核阳性牛血清可检测到该蛋白条带。结果表明,表达的重组蛋白MAP1588C的蛋白分子量为21 kDa,具有良好抗原性,有望将此抗原用于建立副结核的ELISA诊断方法。 相似文献
103.
为研究6月龄去势对延边黄牛生长性能及血液激素的影响,试验选用20头6月龄体重、体况相近的延边黄牛,随机分成2组,每组10头,试验组黄牛6月龄去势,对照组不去势,试验期12个月。试验期间在试验牛6、8、10、12、14、16及18月龄的当月12号称重并测量体尺,每次称重前一天早上空腹经颈静脉采血,检测血清睾酮和生长激素的含量。结果显示,试验期间试验组黄牛去势后体重均低于对照组,其中8月龄时差异显著(P < 0.05);试验组延边黄牛体高、胸围、体斜长均低于对照组,但差异均不显著(P > 0.05),6~8月龄时,试验组去势黄牛体高的增长显著低于对照组(P < 0.05),12~14月龄时,试验组显著高于对照组(P < 0.05),其他月龄间两组差异不显著(P > 0.05)。试验组黄牛去势后血清睾酮水平极显著或显著低于对照组(P < 0.01;P < 0.05),试验组黄牛血液生长激素水平低于对照组,其中8月龄时差异显著(P < 0.05)。综上所述,6月龄去势能够降低延边黄牛体重的增长,但对体尺影响不大,且能降低延边黄牛血清睾酮及生长激素水平。 相似文献
104.
牛结核体外免疫诊断技术 总被引:4,自引:0,他引:4
牛分支杆菌感染的主要特征是引起细胞内免疫反应。现在针对牛结核的诊断试验是以T细胞反应机制为基础的。低敏感性的结核血清学试验是不值得提倡的,血清学试验最好作为细胞学试验的补充而不是替代。最近,发现了牛结核r干扰素试验是一种快速的(24小时)惟一使用全血的体外试验,该方法在澳大利亚地区应用发现,该方法要比传统的结核菌素法诊断牛结核更敏感。假阳性反应的难题归因于所使用的抗原制品间的交叉反应特性,设动物对牛PPD和禽PPD的r干扰素反应作对照可解决假阳性的问题。虽然牛结核特异性蛋白已确认并被分类,这些特异性蛋白可能在血清学或细胞学诊断试验中使用,但是它们可能因牛对结核分支杆菌感染的免疫反应的遗传多样性而受到限制。 相似文献
105.
猪胸膜肺炎放线杆菌ApxⅣA基因特异片段的克隆和表达 总被引:3,自引:1,他引:3
以猪胸膜肺炎放线杆菌的血清7型国内分离株25-4株基因组DNA为模板,PCR方法扩增apxIVA特异片段,PCR产物经纯化后与载体PMD18-T进行连接、转化,经酶切及序列分析鉴定后,亚克隆到原核表达载体pGEX-6P-1中,构建成重组表达质粒pGEX-apxIVA,转入到大肠杆菌BL21中,以IPTG进行诱导,进行SDS-PAGE电泳.结果表明,25-4株apxIVA gene与基因库中标准7型apxIVA gene同源性达97%,所表达的融合蛋白相对分子量为44kD,与实际预测相符.apxIVA毒素特异片段的成功表达为猪胸膜肺炎放线杆菌病的诊断打下基础. 相似文献
106.
为了深入地了解胸膜肺炎放线杆菌(APP)分泌的ApxⅡ毒素的分子结构及序列特征,本实验以一株APP7型现地分离株L25-4株为实验材料,对其分泌的ApxⅡ毒素的结构基因apxⅡA及其上游启动子区进行了PCR扩增和测序。结果表明APP7型L25-4株apxⅡA基因与其它血清型apxⅡA基因核苷酸序列同源性达99.5%以上,氨基酸序列同源性达98.5%以上。在ApxⅡA蛋白的N末端有3个大的疏水结构域,分布在240422位氨基酸之间。在ApxⅡA蛋白的C末端有富含甘氨酸(Gly)和天门冬氨酸(Asp)的九肽(nonapeptides)重复序列Leu/I1e/Phe-Xaa-Gly—Gly-Xaa-Gly-Asm/Ssp-Asp-Xaa,串连重复9次。这些结构域的起始氨基酸的位置分别为374、503、630、735、753、762、771、780和802。推定的赖氨酸酰基化作用位点为557位氨基酸,与E.coil的H1yA相比,在688位氨基酸处少了一个赖氨酸酰基化作用位点。apxⅡA基因启动子-10区序列为AATAAT,-35区序列为TTAAT,-10区与-35区间隔序列为11个碱基。 相似文献
107.
猪传染性胸膜肺炎(Porcine infectious pleuropneumonia)是由胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)引起的猪的一种呼吸道疾病。本实验以APP血清7型的一株现地分离株L25-4株为研究对象,对其分泌的ApxⅡ毒素的结构基因apxⅡA进行了全基因克隆和测序,并利用原核表达载体pGEX-6P-1在E.coli中进行了原核表达。表达产物以包涵体形式存在,包涵体蛋白经过洗涤后作为抗原用于Western-blotting免疫印迹实验,结果表明重组的ApxⅡA蛋白具有良好的免疫原性。 相似文献
108.
牛分枝杆菌mpb64-ag85b-esat6融合基因的分子克隆及表达 总被引:2,自引:0,他引:2
以牛分枝杆菌valleeⅢ株基因组DNA为模板,PCR扩增mpb64、ag85b和esat6 3个目的基因片段,采用重叠延伸剪接技术(SOE)和基因重组技术获得融合基因mpb64-ag85b,将mpb64-ag85b和esat6串联到同一原核表达载体pET32a(+)中获得重组质粒pET64-85b-e6。将其转化到大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)中,以IPTG(终浓度1 mmol/L)进行诱导,SDS-PAGE电泳分析表达情况,以Ni^2+亲和层析柱纯化表达的融合蛋白和Western blot分析融合蛋白的免疫活性。结果表明:表达的融合蛋白大约为76 Ku,与预测大小相符,以Ni^2+亲和层析柱纯化的融合蛋白能与牛结核病阳性血清发生反应。 相似文献
109.
110.
牛结核病疫苗研究现状 总被引:1,自引:0,他引:1
牛结核病是一种严重的人畜共患病,其传染流行严重地影响到畜牧业的持续健康发展,不仅造成奶牛乳房炎、结核性胸膜炎等疾病,还会引起奶牛产乳率和乳质下降,更严重威胁着人类的身心健康。据统计,人结核病有10%以上是由 相似文献