结核分枝杆菌PE26蛋白调节巨噬细胞免疫反应进而促进分枝杆菌胞内定殖     

陈凡若  党光辉  张嘉俊  鹿萍  崔宁  崔莹莹  崔子寅  刘思国 《中国预防兽医学报》2023,(5):502-509

结核分枝杆菌(MTB) PE/PPE家族蛋白介导MTB与宿主间的相互作用，调节宿主炎症反应，有助于其的存活和疾病发展。为研究PE/PPE家族中PE26蛋白的作用，本实验利用PCR扩增pe26基因片段，构建重组载体p AIN-PE26，转化耻垢分枝杆菌(Ms)构建重组菌p AIN-PE26/Ms，经western blot鉴定结果显示，p AIN-PE26/Ms正确表达重组PE26蛋白(rPE26)。利用差速离心分离p AIN-PE26/Ms亚细胞组分，经western blot鉴定结果显示，r PE26定位于p AIN-PE26/Ms细胞壁。通过p AIN-PE26/Ms的菌落形态观察和生长曲线测定，结果显示，p AIN-PE26/Ms菌体表面较p AIN/Ms对照组更粗糙，脊不规则且相对较高，褶皱不明显；p AIN-PE26/Ms生长速度较对照组极显著增加(P<0.001)。利用H37Ra感染巨噬细胞，通过q RT-PCR检测pe26转录水平，结果显示，H37Ra感染巨噬细胞后pe26转录水平极显著增加(P<0.001)。利用p AIN-PE26/Ms感染巨噬细胞，分别通...  相似文献   

胸膜肺炎放线杆菌MnmE基因突变株的构建及其生物学特性的研究     

赵济钰  王璐  孙婧  王春来  李刚  刘思国 《中国预防兽医学报》2023,(3):225-231

为了探究t RNA修饰酶Mnm E对胸膜肺炎放线杆菌(APP)生长特性及致病性的影响，本研究以血清7型APP S8株DNA为模板经PCR分别扩增其Mnm E基因的保守结构域及全长基因，分别构建重组质粒pmnm E及pls88-Mnm E，并经PCR鉴定正确后将重组质粒pmnm E通过接合转移方式导入受体菌S8中，利用氯霉素抗性筛选Mnm E基因缺失株(S8△Mnm E)，并经PCR和测序鉴定；将重组质粒pls88-Mnm E电转化至S8△Mnm E感受态细胞中，经卡那抗性筛选Mnm E全长基因回补株(cS8△Mnm E)，并经PCR和测序鉴定。将上述两株菌分别在无抗性培养基中传10代每代均经相应PCR鉴定其遗传稳定性。采用q RT-PCR检测Mnm E基因突变对其上下游基因转录水平的影响。结果显示，突变株S8△Mnm E和回补株cS8△Mnm E均正确构建，且遗传稳定性均较好；q RT-PCR结果显示，S8△Mnm E株Mnm E上下游基因的转录水平均与亲本株无明显差异。通过检测不同时间点的OD600nm值并绘制生长曲线分析上述两种菌与亲本株分别在20种不同氨基酸单独缺失培养基中的生长...  相似文献