猪瘟兔化弱毒疫苗株TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用   总被引：1，自引：0，他引：1  

刘大伟  张小飞  胡来根  李郁  尹秀凤  毛火云 《中国预防兽医学报》2010,32(6)

为建立一种快速鉴定猪瘟兔化弱毒疫苗株(HCLV)的方法,本研究根据GenBank中登录的HCLV株基因组序列,在Erns基因序列区内设计一对引物和一条TaqMan探针,建立了检测HCLV的荧光定量RT-PCR(FQRT-PCR)方法。该方法检测的灵敏度可达3.84拷贝/μL;而对猪细小病毒、猪伪狂犬病毒、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒、牛病毒性腹泻病毒基因组扩增结果均为阴性。实验组批内变异系数为1.05%～1.84%,批间变异系数为3.70%～5.43%。通过对32批HCLV半成品抗原和9批成品疫苗,分别用经典的兔检法测定兔体感染量(RID)和新建立的FQRT-PCR方法进行检测比较,两者有较好的相关性。结果表明,该方法具有快速、敏感、特异性强、稳定性好等优点,对HCLV生产配制及成品检验具有指导作用。  相似文献   

鸡毒支原体防疫不容忽视     

周劳岐  张小飞  薛家兵  尹秀凤  朱燕峰  杨莉莉 《动物保健》2010,(12):23-23

支原体是介于细菌和病毒之间的一种病原微生物,其特点是多形性,无细胞壁,革兰氏染色阴性,对环境抵抗力较差,对热比较敏感,但在低温条件下可长期存活。鸡毒支原体（MG）可引起鸡慢性呼吸道疾病,俗称“鸡慢呼”,在我国商品代养鸡场污染率100％,鸡群感染率可达50％～80％,是对养禽业危害最为严重的疾病之一。  相似文献   

鸭圆环病毒套式PCR检测方法的建立     

蔡锐  张小飞  潘玲  胡来根  毛火云  尹秀凤  黄显明 《中国畜牧兽医》2010,37(7):149-152

根据GenBank发布的鸭圆环病毒(duck circovirus,DuCV)序列(AY228555),运用Primer Premier 5.0设计2对引物,建立了适合DuCV快速检测的套式PCR方法,采用该方法对从安徽省望江县采集的发病鸭肝脏、胸腺、法氏囊、肾脏和脾脏等内脏病料进行DuCV检测。结果显示,套式PCR对所有内脏病料均能扩增出340 bp的条带,而正常鸭胚、健康鸭肝脏、鸭瘟病毒、禽流感病毒(H9亚型)、新城疫病毒、传染性法氏囊病病毒、网状内皮组织增生病毒、鸡传染性贫血病毒、鸭源大肠杆菌和鸭疫里氏杆菌的扩增结果均为阴性;该方法第1次扩增的敏感性是1 ng,第2次扩增的敏感性是1 fg,第2次比第1次扩增的敏感性高106倍;表明本试验所建立的套式PCR方法可用于鸭圆环病毒(DuCV)感染的临床诊断和流行病学调查。  相似文献   

鸡传染性贫血病毒与禽网状内皮增生症病毒二重PCR检测方法的建立   总被引：3，自引：3，他引：0  

吴萍萍  张小飞  潘玲  胡来根  尹秀凤  毛火云 《中国畜牧兽医》2010,37(4):182-184

当前养鸡业中鸡传染性贫血病毒、禽网状内皮增生症病毒混合感染的发生率日益增高,为提高CIAV、REV检测效率,根据GenBank上登录的CIAV全基因序列和REV的LTR序列分别设计了2对引物,建立了REV、CIAV二重PCR检测方法,另外还比较了2种不同的DNA提取方法。结果显示,该方法扩增目的条带清晰、敏感性高、特异性好。应用建立的方法对临床7份病料样品检测,检出5份CIAV、REV阳性,表明建立的二重PCR方法能有效用于CIAV、REV混合感染的临床诊断。  相似文献   

鸭场常年防疫要点     

刘艳花  尹秀凤  韩佐先  赵光啟 《当代畜禽养殖业》1999,(12)

养鸭防疫,几乎人人皆知,可如何防疫?却知道的不一定全面,下边介绍一下鸭场防疫要点。 一、提供全价饲料,增强抗病能力 根据鸭子生长和生产的需要,尽量提供全价饲料,以满足其营养物质的需求,特别要维生素和微量元素的喂给,以增强其抗病能力,但绝对不能喂腐败变质饲料。 二、创造适宜的生活、生产条件 鸭舍的布局和结构要科学合理,  相似文献   

鸡传染性法氏囊病病毒抗血清的研制     

王占伟  邵国青  刘茂军  冯志新  王丽  高云飞  周开华  尹秀凤 《南方农业学报》2012,43(12):2079-2082

[目的]确保鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)抗血清高效力的同时又彻底解决安全性和免疫应激问题,旨在研制出一种高效、安全的鸡传染性法氏囊病(IBD)预防和治疗制品.[方法]以SPF鸡为免疫动物,按照《兽用生物制品试验研究指导技术原则》和《中华人民共和国兽药典》(2010年版)的要求研制IBDV抗血清,经脱毒处理后,对其半成品及成品进行检验.[结果]以IBDV NJ株免疫4周龄SPF鸡获得的抗血清,未脱毒处理前的血清效价≥1∶64,脱毒处理后的成品效价≥1∶32.半成品和成品的检验结果显示,经过脱毒处理后的IBDV抗血清制品呈橙黄色,无菌、无支原体、无外源病毒,对小白鼠、豚鼠和SPF鸡均安全,甲醛和硫柳汞残留量也未超过规定标准.[结论]研制的IBDV抗血清制品符合《中华人民共和国兽药典》的要求,完全可用于IBD的紧急预防和早期治疗,今后可作为一个正规产品上市以满足市场需要.  相似文献   

猪伪狂犬病病毒的分离鉴定及免疫原性初步研究     

尹秀凤  丁美娟  张海涛  秦进进  孙?  许秀梅  汪爱芬  张小飞  薛家宾 《中国畜牧兽医》2014,41(4):258-264

采集浙江某猪场疑似猪伪狂犬病发病仔猪的脑、脾脏等组织病料,经PCR检测为猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)野毒感染,用BHK-21细胞进行病毒的分离培养,结果显示该病毒能引起典型的细胞病变,第4代病毒液毒价达10^7.0 TCID_50/mL;PCR和动物回归试验结果表明该分离株为PRV,并将其命名为PRV ZJ株。将第4代病毒液制备成油乳剂灭活苗,免疫2 kg左右家兔,免疫后28 d采血并攻毒,测定其免疫原性,结果显示血清中和指数为13490,保护率为100%。本试验结果表明PRV ZJ株有很好的免疫原性,为进一步开展疫苗研究奠定基础。  相似文献   

兔球虫病免疫研究进展   总被引：1，自引：0，他引：1  

尹秀凤  薛家宾 《中国养兔杂志》2007,(6):28-30

兔球虫病是家兔最常见的一种寄生虫病,对养兔业的危害极大。各种品种的家兔对兔球虫都有易感性,断奶后至3月龄的幼兔感染最为严重,死亡率也高;成年兔多为带虫者,在幼兔球虫病的传播中起着重要的作用犤1犦。目前发现兔球虫有艾美耳属16种  相似文献   

鸡滑液囊支原体的分离和鉴定研究     

丁美娟  张小飞  尹秀凤  薛家宾  黄显明  刘青涛  周勇岐  杨莉莉  朱燕锋 《中国家禽》2011,33(24)

从河南某肉种鸡场疑似鸡滑液囊支原体感染的病鸡跗关节样品进行病原的分离与鉴定.分离菌经瑞氏染色,在油镜下呈球形或椭圆形.在固体培养基上表现为细小、光滑、致密的小菌落,菌落形态为“煎蛋状”.L型细菌鉴定发现菌体仍保持原有形态.菌体能够吸附红细胞,分解葡萄糖,但不能分解精氨酸和尿素,还可致SPF鸡胚死亡,说明该分离菌为支原体.进一步的血清学试验结果表明,该分离菌为鸡滑液囊支原体,而不是鸡毒支原体.根据已发表的鸡滑液囊支原体血凝素基因序列vlhA设计合成一对引物,经PCR扩增,该菌体能够扩增出鸡滑液囊支原体(773 bp)的特异性片段.人工感染试验结果显示,SPF鸡能够复制出自然病例.  相似文献   

番鸭源鸭肝炎病毒CH12株的分离与全基因组序列分析     

黄显明  张小飞  毛火云  尹秀凤  丁美娟  王伟  靳宇田 《中国动物传染病学报》2013,(4)

从浙江省某疑似鸭病毒性肝炎的发病番鸭群分离到1株鸭肝炎病毒（Duck hepatitis virus,DHV）CH12株,分离毒株经动物回归试验、ELD50测定、中和试验等确定为DHV-1（基因A型DHV）。通过RT-PCR方法对DHV CH12株的全基因组序列进行分段扩增并测序。结果表明,CH12株的全基因组长度为7690 bp（不包括PolyA）,包括626 bp的5′UTR,6747 bp的ORF和317 bp的3′UTR。CH12株各基因均与基因A型DHV毒株的序列相似性较高,与基因B型和基因C型DHV毒株的序列相似性较低。全基因组核苷酸、多聚蛋白、VP0、VP3、VP1、2C和3D基因的进化分析均显示,CH12株均与基因A型DHV在同一进化分支上,亲缘关系较近,属于基因A型DHV。  相似文献