Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1基因在昆虫细胞中的表达   总被引：2，自引：0，他引：2  

胡来根  廖俊伟  尹秀凤  刘大伟  毛火云  张小飞 《江苏农业学报》2010,26(2)

根据Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV-I)基因组序列设计并合成一对特异性引物,通过RT-PCR方法扩增DHV-I(A66株)VP1基因。用限制性内切酶EcoRⅠ/HindⅢ消化VP1基因和转移载体pFastbacⅠ,在T4DNA连接酶作用下将二者连接构建转移质粒pFastbac-VP1。经PCR、双酶切及测序鉴定后将其转化至含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10bac中,蓝白斑筛选获得重组杆状病毒穿梭质粒rBacmid-VP1,在脂质体的介导下转染昆虫细胞Sf 9,获得重组杆状病毒rvBac-VP1。SDS-PAGE分析结果表明,VP1基因在昆虫细胞中获得表达,表达产物分子量约为2.7×104。Western-blot检测结果表明,表达产物能与抗DHV-I阳性血清发生反应,具有良好的反应原性。  相似文献   

传染性法氏囊病病毒强毒株HB／11的分离与鉴定     

黄显明  张小飞  丁美娟  尹秀凤  许秀梅  王伟  靳宇田 《中国动物传染病学报》2012,20(5):8-11

2011年8月,从河南省疑似传染性法氏囊病鸡群采集病料,通过鸡胚接种、琼脂扩散试验和RT-PCR等方法,证实分离的病毒为传染性法氏囊病病毒（Infectiousbursaldiseasevirus,IBDV）,命名为HB／11株。序列分析表明,HB／11株VP2基因的核苷酸序列与GenBank中发表的部分国内外IBDV超强毒株VP2基因序列相似性在99％左右;HB／11株VP2高变区基因含有七肽基序为SWSASGS,在222、253、256、279、284、294和299位上的氨基酸残基分别是A、Q、I、D、A、I和S,具有IBDV强毒的分子特征。动物回归试验表明,30日龄鸡群接种该毒株后引起鸡群发病率为100％,死亡率为70％,剖检可见鸡传染性法氏囊病典型病变。因此该病毒为IBDV强毒株。  相似文献   

副猪嗜血杆菌的分离与鉴定   总被引：33，自引：3，他引：33  

尹秀凤  姜平  邓雨修  汤景元 《畜牧与兽医》2004,36(7):6-8

在通过对上海一发病猪群临床流行病学研究和病理学观察的基础上 ,从发病仔猪肺脏、气管和脾脏检出并分离到 1株革兰氏阴性细小杆菌 ,兼性厌氧。生化试验为 :接触酶阳性 ,氧化酶阴性 ,鸟氨酸脱羧酶、吲哚和脲酶阴性 ;生长需要NAD ,发酵果糖、半乳糖、葡萄糖和蔗糖 ;不分解D 甘露醇、D 山梨醇和海藻糖。用副猪嗜血杆菌的 1 6S小亚单位rRNA和tbpA基因的特异性PCR引物 ,通过PCR技术分别从该分离菌株扩增出 82 2bp及 1 9kb的特异基因片段 ,表明该分离菌株为副猪嗜血杆菌  相似文献   

我国部分地区副猪嗜血杆菌病的流行病学调查   总被引：3，自引：1，他引：3  

尹秀凤  王艳  姜平 《畜牧与兽医》2007,39(6):11-13

采用细菌分离鉴定、结合PCR方法,对江苏、上海、安徽、广西、浙江、江西、山东、河南、湖北等省市2003年11月～2005年4月送检的159个患病猪场仔猪肺脏进行了副猪嗜血杆菌检测,结果阳性猪场为76个,阳性率48%,临床症状主要为呼吸困难和体温升高;病理变化主要有肺炎病变和淋巴结肿大或出血。通过数据统计分析,发现该病已在我国不同地区广泛流行,且多发于秋、冬季节。该研究为副猪嗜血杆菌的流行病学研究奠定了基础,也为该病的临床预防提供了理论依据。  相似文献   

副猪嗜血杆菌人工感染猪的病理学观察   总被引：7，自引：0，他引：7  

尹秀凤  张书霞  王艳  姜平  汤景元 《中国兽医学报》2007,27(1):91-94

用副猪嗜血杆菌分离株感染断奶仔猪,发病仔猪临床表现为体温中度升高、精神不振、被毛粗乱、站立不稳、厌食、呼吸困难。尸体剖检,可见胸腹腔纤维素渗出严重,有大量的渗出液、肺出血及脑充血等;病理组织学表现为,肺脏、心脏、脾脏等脏器含有大量的中性粒细胞的纤维蛋白性多发性浆膜炎、脑膜炎及支气管肺炎。结果表明,此分离株为一高致病潜力的菌株。  相似文献   

猪圆环病毒2型ORF2基因在Sf9细胞中表达及免疫原性研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

朱鹏  张小飞  徐延伟  尹秀凤 《畜牧与兽医》2015,(2):85-88

利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达猪圆环病毒2型(PCV2)核衣壳(Cap)蛋白。将优化合成的PCV2 ORF2基因克隆到杆状病毒转移载体p Fast HTA中,并将鉴定正确的重组质粒p Fast HTA-Cap2转化至大肠杆菌感受态细胞,经蓝白斑筛选得到含有目的基因的重组杆状病毒质粒(r Bac-Cap2),转染至Sf9细胞,获得重组杆状病毒,对感染重组杆状病毒的细胞培养物进行重组蛋白的表达,进行SDS-PAGE和Western blot分析,并对表达的重组蛋白进行小鼠免疫试验及其病毒血清中和试验。SDS-PAGE分析表明,优化合成的PCV2 ORF2基因得到表达,蛋白分子质量大小为33 ku;Western blot证实重组蛋白能够识别抗PCV2阳性血清,表明重组蛋白具有反应原性;小鼠免疫试验结果显示,该蛋白能刺激机体产生特异性抗体,具有较好的免疫原性;病毒血清中和试验证实,抗PCV2 Cap血清抗体具有中和病毒的活性,中和效价为1∶42。该蛋白在杆状病毒系统中的成功表达,为PCV2感染的诊断及亚单位疫苗的研制奠定基础。  相似文献   

Ⅰ型鸭肝炎病毒vp3基因的截短表达及鉴定     

罗玄  张海涛  尹秀凤  黄显明  靳宇田  张小飞  潘玲 《中国动物传染病学报》2012,(3):17-21

根据I型鸭肝炎病毒(Duck hepatitis virus type 1,DHV-1)A66株vp3基因序列,设计了一对扩增vp3截短基因(-468bp)的特异性引物,将vp3截短基因与表达载体pET-32a(+)连接,构建了vp3截短基因的重组表达质粒pET-VP468。pET-VP468转入表达菌E.Coli Rosetta-gami(DE3)pLysS中,使用IPTG诱导表达融合蛋白Trx-VP468。Trx-VP468经过Ni-NTA亲和层析柱和DEAE-Sepharose阴离子柱纯化,SDS-PAGE电泳结果表明,pET-VP468在大肠杆菌中表达了一个相对分子量约为36kDa的蛋白,免疫印迹试验表明Trx-VP468得到了正确表达。该结果为VP3蛋白的免疫学功能研究奠定了基础。  相似文献   

鸭脾坏死症的病原学初步观察     

黄显明  张小飞  尹秀凤  王伟  靳雨田 《中国兽医杂志》2012,48(8):39-41

自2006年以来,山东、江苏、浙江、福建、安徽等养鸭比较密集的地区相继出现了一种新的传染性疾病,临床表现为软腿,生长发育不良,剖检以脾脏有白色坏死灶为主要病变特征,死亡率大约在20%左右,因而临床上大多称"鸭脾坏死症"。近两年,该病情越来越严重,造成雏鸭大批死亡,给养鸭业造成了巨大的经济损失。关于该病的病原,至今还没有  相似文献   

温和型禽流感的诊断和防治     

周勇岐  毛火云  尹秀凤 《动物保健》2010,(4):35-37

根据临床的致病性表现不同，临床上将禽流感分为了高致病性、温和性和无致病性三类。前者表现明显临床症状或高死亡率，后者不表现任何发病迹象，温和型禽流感则介于两者之间，而并非严格的学术分类类型。温和型禽流感常以低死亡率、轻度的呼吸道感染、产蛋率下降及抵抗力低下等为临床症候群。而发病严重程度与病毒毒力、动物敏感性、饲养条件和并发症等多种因素相关，所以，除部分高致病性的H5和H7亚型病毒外，  相似文献   

耐热保护剂提高鸡新城疫-传染性支气管炎二联活疫苗保存效果研究     

刘青涛  卢凤英  汪爱芬  尹秀凤  朱秀同  何平有  赵玉龙  朱晓玮  薛家宾  张小飞 《江苏农业科学》2021,49(13):152-157

为提高鸡新城疫-传染性支气管炎二联活疫苗的耐热性能,根据前期研究设计了3个耐热保护剂配方,比较不同配方对疫苗的抗原冻干损失、温度耐受性和保存期的影响.结果显示,保护剂TS11、TS37、TS51所制备疫苗的抗原冻干损失均在0.5 lg以下,相互之间差异不明显.但TS37所制备疫苗在37℃和45℃耐受后的抗原效价下降滴度明显低于TS11和TS51,这说明TS37具有更好的耐热保护效果.另外,25℃、2～8℃保存试验显示,配方TS37可使疫苗在室温下至少能保存1个月、冷藏条件下至少保存27个月而抗原含量和攻毒保护仍能达到质量标准要求.因此,本试验研制成功针对鸡新城疫-传染性支气管炎二联活疫苗的耐热保护剂TS37,该保护剂可使疫苗实现2～8℃下长期保存.  相似文献