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差速离心和蔗糖密度梯度离心纯化鸭病毒性肠炎病毒(DEV)免疫兔制备兔抗DEV高免血清后,用DEAE-Sephadex A-50柱层析纯化的兔抗DEVIgG建立了间接免疫荧光染色法(IFA)检测石蜡切片中DEV的方法。IFA的最佳条件为:石蜡切片用10mmol/L pH6.0的柠檬酸缓冲液为微波修复液微波修复10min,胰酶修复20min;10%小牛血清室温封闭30min;加入1∶25的兔抗DEVIgG于4℃孵育过夜;再加入FITC标记的羊抗兔IgG于37℃孵育45min。以建立的IFA对DEV人工皮下感染死亡鸭的各组织器官进行检测,在死亡鸭的脾脏、胸腺、法氏囊、肝脏、食道、十二指肠、直肠及肺脏中检测到DEV抗原。研究表明,IFA检测石蜡切片中的DEV具有直观、特异性强的优点,是对DEV进行检测和抗原定位的良好方法。 相似文献
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聚合酶链反应(PCR)检测鸭瘟病毒方法的建立和应用 总被引：7，自引：0，他引：7
鸭瘟(Duck Plague，DP)是由鸭瘟病毒(DPV)引起的鸭、鹅等水禽的一种急性败血性传染病，发病率和死亡率都甚高，是危害养鸭业的最为严重的传染病之一。Baudet(1923)首次在荷兰报道鸭瘟，现该病呈世界性分布。目前实验室检测DPV的方法包括病毒分离鉴定、血清中和试验、反向被动血凝试验、琼脂凝胶沉淀试验、荧光抗体试验、微量固相放射免疫测定法、酶联免疫吸附试验(ELIsA)、核酸探针等”，这些方法用于感染DPV死亡鸭组织中病原的检测存在这样或那样的不足， 相似文献
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为研究鸭病毒性肠炎病毒(DEV)CH强毒株在感染鸭体内的分布和形态学发生规律，应用透射电镜和超薄切片技术对人工感染DEV的成年鸭各组织器官进行观察。结果表明：感染后12h在脾脏和法氏囊首先观察到少量的DEV出现，24h后在脾、胸腺和法氏囊以及死亡鸭的肝、肠和胰中均观察到具有典型的疱疹病毒粒子及其核衣壳形态的DEV。DEV病毒核衣壳有空心型、致密核心型、双环型和内壁附有颗粒型4种形态，存在胞核和胞浆两种装配方式。病毒成熟有两种方式：一为细胞核内核衣壳在核内获得皮层，通过核内膜获得囊膜成为成熟病毒；二为核内核衣壳通过内外核膜进入胞浆，核内和胞浆内的核衣壳在细胞浆中获得皮层，然后在各种质膜上获得囊膜，最后成熟病毒通过细胞破裂或其他方式释放到细胞外。伴随着病毒的复制、装配和成熟，细胞中出现多种核内和胞浆包涵体、核内致密颗粒、核内微管和中空短管、胞浆电子致密小体等结构。 相似文献
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2005年2月,湖北省某种鸡场40周龄产蛋鸡开始时出现呼吸道症状,3～5 d后产蛋下降10%,解剖发现肠道出血,疑似新城疫感染,用5倍量ND弱毒疫苗饮水免疫,2周后鸡群出现死亡,部分鸡出现神经症状,取病鸡脑组织做病原分离,接种10龄鸡胚,72～96 h后收获鸡胚尿囊液,测定血凝效价(HA)达1∶256以上,经对鸡胚平均致死时间(MDT)、脑内致病指数(ICPI)和静脉接种致病指数(IVPI)等生物学特性试验表明,鸡脑组织分离的病毒为一株新城疫弱毒. 相似文献
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生物素标记寡核苷酸探针原位检测石蜡切片鸭瘟病毒核酸 总被引：1，自引：0，他引：1
据GenBank中有关鸭瘟病毒(DPV)的1个765 bp的EcoRⅠ片段序列,用Oligo软件设计长度为37 bp的寡核苷酸并用生物素标记制备探针,经blast分析和斑点杂交检测探针的特异性后,建立从石蜡切片中检测出DPV核酸的原位杂交方法并对人工感染死亡鸭的各组织器官进行检测,结果显示:(1)寡核苷酸探针能特异性检测到DPV强毒CHv株DNA,对鸭病毒性肝炎病毒QL79株RNA、血清1型鸭疲里默氏杆菌DNA、鸭源多杀性巴氏杆菌DNA、鸭沙门菌DNA和大肠杆菌DNA的检测结果为阴性.(2)以寡核苷酸探针建立的从石蜡切片中检测出DPV核酸的原位杂交方法的最佳反应条件为:组织切片先用0.2 mol/L HCl 37℃处理20 min,然后用100 mg/L的蛋白酶K 37℃消化15 min左右;杂交时探针工作浓度为350 μg/L;Avidin-AP的工作稀释度为1:100.(3)以所建立的原位杂交法检测DPV-CHv强毒人工感染死亡鸭的各组织器官,结果肝脏、肠道、法氏囊、脾脏、食道、肺脏和肾脏呈阳性反应,DPV的DNA分布于特定细胞的细胞浆和细胞核.结果表明,原位杂交检测石蜡切片中DPV的方法具有直观、特异性强的优点,是对DPV进行检测和病原定位的良好方法,可用于DPV的侵染过程和致病机理研究及回顾性诊断检测. 相似文献
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