利用CRISPR/Cas9技术对鸡AMHR2基因进行精确编辑     

黄思嘉  祝梦琦  李鹏程  张智英  魏泽辉 《家畜生态学报》2020,41(6):12-18

为了在鸡基因组上对AMHR2基因进行精确编辑,该研究利用crispr.mit.edu:807网站设计并通过PCR退火拟合获得成对的AMHR2基因靶位点,将靶位点分别整合进pX330-U6-Chimeric_dBsa I-CBh-hSpCas9载体骨架,构建靶向AMHR2基因的成对CRISPR/Cas9敲除载体。将包含成对靶位点的DNA序列整合进pB-CMV-DsRed-CAG-Chimeric.200 bp repeat.Puro-T2A-GFP载体骨架,构建与敲除载体对应的双荧光报告载体。载体测序鉴定正确后分别共转染HEK293T细胞与鸡DF-1细胞,通过细胞荧光粗略判断CRISPR/Cas9系统是否工作。随后,利用Puromycin对基因编辑阳性的DF-1细胞进行药物筛选富集,提取细胞基因组进行TA克隆,进一步检测CRISPR/Cas9系统的工作效率。结果表明靶向鸡AMHR2基因的CRISPR/Cas9敲除系统构建成功,且成对靶位点敲除系统的工作效率高于单一靶位点敲除系统,CRISPR/Cas9敲除系统在DF-1细胞基因组上对AMHR2基因的敲除效率约为60.0%,并在鸡DF-1细胞基因组上实现了AMHR2基因的精确编辑。  相似文献   

人工锌指蛋白随机库的构建及其在锌指核酸酶筛选中的应用     

李战伟  王昕  任刚  王令  杨涵江  张智英 《西北农业学报》2012,21(1):1-10

利用开源式(Oligomerized pool engineering,OPEN)方法筛选具有较高特异性和亲和性的锌指蛋白(Zinc finger protein,ZFP).以已知三锌指蛋白为框架,使单个锌指关键位点氨基酸编码序列产生随机突变,构建3个人工锌指蛋白随机库,建立和完善应用人工锌指蛋白随机库筛选特异性锌指蛋白的技术平台.以人DYRK1A基因为例,测试和验证该技术平台的可行性和效率,分别获得对DYRK1A基因靶序列中左侧和右侧位点具有较高亲和性的50个三锌指蛋白;然后将得到的锌指蛋白与非限制性核酸内切酶FokⅠ连接,构建DYRK1A锌指核酸酶(Zinc finger nucleases,ZFN),应用酵母验证系统测试DYRK1A锌指核酸酶的活性,结果表明,90％的组装锌指核酸酶能够在靶位点进行切割.  相似文献   

靶向绵羊MSTN基因的锌指核酸酶腺病毒表达载体的构建及活性验证     

张存芳  王令  任刚  张婷婷  王瑞  严国勇  张智英 《畜牧兽医学报》2012,43(8):1192-1199

旨在构建并包装打靶绵羊MSTN基因的位点特异性锌指核酸酶腺病毒表达载体,以借助腺病毒的高转染效率和非整合性以及锌指核酸酶的高效性和特异性实现对绵羊MSTN基因的敲除。本研究利用PCR扩增T2A序列和锌指核酸酶异源二聚体序列,测序鉴定后依次克隆至pAdTrack-CMV,得到pAdTrack-ZFNL-T2A-ZFNR穿梭载体,将之与腺病毒骨架载体pAdEasy-1共转染至BJ5183菌株进行同源重组,以构建pAdEasy-ZFNL-T2A-ZFNR表达载体。然后用上述表达载体转染HEK293细胞进行重组腺病毒的包装,将PCR鉴定阳性的病毒进行扩增并测定病毒滴度。侵染绵羊胎儿成纤维细胞检测重组腺病毒对靶细胞的侵染能力,并用Western blot方法检测绵羊胎儿成纤维细胞中ZFN的表达,进而在细胞水平验证ZFN的活性。结果,包装得到的锌指核酸酶重组腺病毒能够高效侵染绵羊胎儿成纤维细胞并表达ZFN,腺病毒介导的ZFN可识别并切割绵羊MSTN基因。本研究成功获得靶向识别并切割绵羊MSTN基因的锌指核酸酶重组腺病毒。  相似文献   

影响枣树节水灌溉新技术应用范围的因素分析     

张旺林  张智英 《河北农业科技》2013,(23):10-10

本文对沧州市黄骅、献县、沧县等8个县市区300农户及枣园企业是否已经应用节水灌溉技术及应用意向进行了调查,调查结果显示目前节水灌溉技术应用率比较低。分析原因主要与农民文化水平、对新事物的接受能力、宣传力度、经营规模、灌溉费用、示范程度等密切相关。  相似文献   

水稻病虫草害防治探析     

张智英 《农村实用科技信息》2014,(9):21-21

本文详细介绍了充分利用物理防治和生物防治水稻病虫草害的经验,强调了一旦在水稻不同生育期病虫草害发生时进行化学防治。  相似文献   

酪氨酸磷酸酶基因ptpn11对乳腺肿瘤生长的影响     

田莹普  张智英 《动物医学进展》2015,(3):83-87

乳腺癌是威胁妇女健康和生命的头号恶性肿瘤,但其发生发展的机制及诊疗仍然没有长足的进展。蛋白酪氨酸磷酸酶11(PTPN11)是一个易于突变的基因,参与乳腺肿瘤的发生,但目前关于PTPN11调控乳腺癌的体内证据仍然缺乏。为了明确PTPN11在体内对乳腺癌发生发展的调控作用,利用大鼠乳腺肿瘤的动物模型,用PTPN11蛋白酶活性抑制剂Phps1处理,然后观察乳腺肿瘤发生的情况。结果发现Phps1处理后可延长DMBA诱导的大鼠乳腺肿瘤的潜伏期,延迟肿瘤的发生,并显著降低了DMBA诱发肿瘤的比率(P0.05),但对肿瘤生长的抑制作用不显著。证明了PTPN11参与调控体内乳腺肿瘤的发生,为理解和诊治乳腺癌提供了一个可能新的靶点。  相似文献   

泽兰实蝇人工繁殖技术   总被引：1，自引：0，他引：1  

魏艺  张智英 《生物防治通报》1989,5(1):41-42

  相似文献   

泽兰实蝇生物学特性的初步研究   总被引：21，自引：0，他引：21  

张智英  魏艺  何大愚 《中国生物防治》1988,(1)

野外观察和室内试验表明:紫茎泽兰的专食性天敌泽兰实蝇,在昆明地区周年可完成4～5个世代,卵、幼虫、蛹和成虫历期分别为3～5、25～30、20～25和7～11天。由于泽兰实蝇的寄生,使紫茎泽兰的生长繁殖显著受到抑制,开花数减少40～80％,种子萌发率减少25～30％。  相似文献   

动物科学专业创新型实践教学体系研究与实践   总被引：1，自引：0，他引：1       下载免费PDF全文

杨小军  张智英  姚军虎 《家畜生态学报》2015,36(2):91-94

论文介绍了以"就业求创业,创新求发展"的培养原则,尝试创新创业分类培养,形成在人才培养目标、培养规格、培养途径等方面的不同特点,探讨了侧重培养"产学研"紧密结合的人才的分类创新型实践教学培养体系构建。  相似文献   

核桃胚培养条件研究     

张智英  张旺林 《山东饲料》2015,(10)

以香玲核桃胚为试材,研究了不同基本培养基、蔗糖和琼脂浓度对离体胚萌发、生根和成苗的影响,筛选最佳培养条件.结果表明:最适宜的基本培养基为MS+3％蔗糖+(0.6～0.8)％,种胚培养4周后即可成苗,选生长健壮的生根苗(不需要炼苗)移栽到经高压灭菌的蛭石中,成活率可达91％以上.  相似文献