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应用SELDI-TOF-MS技术对患脂肪肝奶牛血浆差异蛋白的分离鉴定及生物学分析 总被引:1,自引:1,他引:0
【目的】脂肪肝是围产期奶牛主要代谢性疾病之一,50%产后奶牛受其影响。产后奶牛生产力降低、繁殖性能低下、免疫功能减弱、肝功能衰竭和过早死亡都与脂肪肝有关。表面增强激光解析/电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)是一种对生物样本蛋白质研究的新型高敏感性蛋白质组学方法,文章旨在探讨脂肪肝奶牛血浆蛋白质组学特征。【方法】于黑龙江某集约化养牛场选择产后7-28d,1-2胎次荷斯坦奶牛40头。清晨空腹尾静脉采血10mL,应用肝素抗凝(150U)迅速离心(3 000 r/min,5 min)分离血浆,置于-80℃冰箱冷冻保存。依据血浆甘油三酯(TG>0.20 mmol·L-1), 血浆β-羟丁酸(BHBA>1.2mmol·L-1)浓度和临床症状,将其分为试验组(T)20头和健康对照组(C)20头。应用SELDI-TOF-MS技术测得血浆蛋白质谱,利用Ciphergen Protein Chip Software (Version 3.1.1)对在试验组和对照组所有样品中得到的峰图进行分析,得到原始数据。将两组之间的数据峰值做wilcoxon sum rank test统计检验,用计算出的P值判断峰在两组中是否有显著差异。以0.01作为P值的阈值,筛选出P值小于0.01的差异峰。在得到的差异峰中,将差异峰的m/z值与Swissport蛋白数据库中多肽的理论荷质比 (mass to charge ratio,m/z)进行比较,找到最相似的蛋白作为差异峰可能检测蛋白的预测结果。【结果】与对照组相比,试验组奶牛血浆蛋白质谱存在39个差异峰,在得到的39个差异峰中,将差异峰的m/z值与Swissport蛋白数据库中多肽的理论荷质比值进行比较,最终获得26个可预测的差异峰,预测蛋白11种。结果显示,相对于C组,11种预测蛋白在T组中均表达下调。通过生物信息学(Network,GO,Pathway)分析,应用Cytoscape软件对获得的11种蛋白进行牛类基因网络搜索,得到Networks分析结果图。在数据库中搜索到了试验结果中的淀粉样肽前体蛋白(amyloid precursor protein, APP)和纤维蛋白原α链(fibrinogen alpha chain, FGA)两种差异蛋白,并得到其相关的Networks分析结果。应用Cytoscape软件中BinGO插件对11种蛋白进行GO分析,并得到GO分析结果。对这些蛋白质经软件搜库得到已经注释的差异蛋白有9种,分别为FGA、血清淀粉样蛋白A (serum amyloid A protein, SAA)、血浆蛋白酶c1抑制剂(plasma protease c1 inhibitor, SERPING1 or C1INH)、血清载脂蛋白-CⅢ(apolipoprotein c-Ⅲ,ApoCⅢ)、海帕西啶(hepcidin, HAMP)、骨桥蛋白(osteopontin, OPN or SPP1)、 甲状腺素运转蛋白(transthyretin, TTR)、胱蛋白酶抑制剂C (cystatin-c, CysC or CST)、神经分泌血管生长因子蛋白(neurosecretory protein, VGF)。应用KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)pathway数据库搜索。搜索结果显示只有6种蛋白质可在数据库中搜到,分别是FGA、SERPING1、APO-CⅢ、APP、CysC、SPP1。并得到其相关的Pathway分析结果。这些蛋白可能是与奶牛脂肪肝发病机制相关的物质。【结论】应用SELDI-TOF-MS技术有效的分离了健康牛与患病牛之间的血浆差异表达蛋白,均在肝脏代谢或脂肪肝疾病发生发展过程中起重要的调节作用,对探究奶牛脂肪肝发病机理及其对机体生物学功能的影响具有重要的理论价值。差异蛋白对奶牛脂肪肝的发病机理的影响尚待进一步研究。 相似文献
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试验旨在探究围产期亚临床酮病与泌乳早期奶牛繁殖性能、卵泡发育之间的关系,并检测试验牛血液生化指标的变化。试验在黑龙江某大型集约化牛场开展,根据产后血酮水平确定亚临床酮病组(SCK)和健康组(C)奶牛共60头,根据试验牛产后50 d内发情状况,将SCK组再分为发情组(SCKE,16头)和乏情组(SCKA,14头),C组也同样分为发情组(CE,25头)和乏情组(CA,5头)。所有试验牛在产后50 d通过直肠检查和B超检查了解子宫复旧及卵泡发育状况,记录繁殖性能数据,并进行血液生化指标分析。结果表明:与健康组发情奶牛相比,亚临床酮病发情奶牛产后首次发情日期推迟约10 d(P<0.05);产后50 d卵泡直径差异极显著(差值约4 mm)(P<0.01)。亚临床酮病乏情奶牛子宫复旧延迟发生率显著高于健康组发情奶牛(P<0.05);亚临床酮病奶牛血浆中胰岛素样生长因子-1(IGF-1)含量显著低于健康奶牛(P<0.05),而泌乳量极显著提高(P<0.01)。与发情奶牛相比,乏情奶牛血浆中甘油三酯(TG)含量显著升高(P<0.05);葡萄糖(Glu)、胰岛素(Ins)、雌二醇(E2)、孕酮(P4)含量显著或极显著降低(P<0.05;P<0.01)。综合以上试验结果,奶牛患亚临床酮病而导致能量代谢指标异常是引起奶牛乏情、产后卵泡发育受阻和繁殖障碍的主要因素,进而导致奶牛繁殖力下降。 相似文献
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调查试验在黑龙江省某两个集约化牛场(A场、B场)进行,每场分别在产前10 d~分娩当天(0 d)、产后30~50 d、60~80 d各选取8头,产后10~20 d选取16头,共80头奶牛,测定血中维生素E(VE)、维生素C(VC)、维生素A(VA)、硒(Se)、锌(Zn)和铜(Cu)的含量。结果显示:A场VE、VC、VA、Se、Zn和Cu的缺乏率分别为50.0%、5.0%、20.0%、12.5%、27.5%、10.0%;B场的缺乏率分别为47.5%、0%、10.0%、12.5%、25.0%、10.0%。两场VE均在产后10~20 d缺乏率最高;A场在产后10~20 d时Zn和Cu的缺乏率达到最高,VA、Se和VC在产前10~0 d和产后10~20 d缺乏率最高;B场的Zn和Se在产后10~20 d和60~80 d缺乏率最高,Cu在产后30~50 d缺乏率最高,VA在产前10~0 d缺乏率最高。试验表明:两个牛场奶牛在围产期和泌乳早期存在不同程度的VE、VA、Se、Zn和Cu缺乏,产后10~20 d缺乏率最高。因此,牛场应在围产期和泌乳早期补充维生素和微量元素,避免造成经济损失。 相似文献
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研究包被γ-氨基丁酸(GABA)和包被γ-氨基丁酸(GABA)复合微量元素添加剂对生长期肉牛生长性能及血液生化指标的影响。选择12月龄体重在407.22kg±21.36kg的西门塔尔肉牛45头,随机分为3组(对照组,试验1组,试验2组),对照组饲喂基础日粮,试验组在饲喂基础日粮的基础上饲喂包被γ-氨基丁酸(GABA)和包被γ-氨基丁酸(GABA)复合矿物质微量元素。结果表明,平均日增重试验1组高于对照组,试验2组高于试验1组,极显著高于对照组(P<0.01)。碱性磷酸酶(ALP)的浓度试验组与对照组相比,总体呈上升趋势,在第20、30、40、50、60天时试验2组显著高于对照组(P<0.05)。血清中总蛋白(TP)的含量在第20天时试验1组极显著高于对照组(P<0.01),试验2组显著高于对照组(P<0.05);在第40天时试验1组显著高于对照组(P<0.05)。免疫球蛋白G(IgG)的浓度在第20、30天时,试验1组极显著高于对照组(P<0.01),试验2组显著高于对照组(P<0.05);在第40、50、60天时,试验1组显著高于对照组(P<0.05);试验2组显著高于对照组(P<0.05)。结果提示,添加包被γ-氨基丁酸(GABA)和包被γ-氨基丁酸(GABA)复合微量元素可以提高肉牛的体重,提高肉牛机体的免疫力,减少疾病的发生,且包被γ-氨基丁酸(GABA)复合微量元素的作用效果要优于γ-氨基丁酸(GABA)。 相似文献
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为确定围产期奶牛氧化应激的风险因素及其预警指标,在黑龙江省2个集约化牛场(A、B场)检测了120头围产期奶牛血中能量代谢、矿物质、氧化应激等指标,以能量负平衡为判定标准,将β-羟丁酸(BHBA)>1.2mmoI/L,游离脂肪酸(NEFA)>0.4mmoI/L,葡萄糖(GLU)<0.3mmoI/L的牛分为高水平氧化应激组,BHBA<1.2mmoI/L,NEFA<0.4mmoI/L,GLU>0.3mmoI/L的牛分为对照组,通过横截面研究方法结合统计学显著性分析,Spearman相关分析、二元Logistic回归模型及ROC分析确立分界值和诊断效果。结果显示:能量负平衡奶牛血中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、过氧化氢酶(CAT)、Se、总一氧化氮合成酶(T-NOS)、VE的水平降低,血中丙二醛(MDA)、Cu的水平升高,机体存在氧化应激。确定GSH-PX、CAT、Se、BHBA四项指标可作为氧化应激发生的预警指标,其预警值分别为:GSH-PX<619.28U/L,敏感度78.3%,特异度66.7%;CAT<7.87U/mL,敏感度73.9%,特异度91.7%;Se<0.51μg/L,敏感度79.2%,特异度58.9%,BHBA>0.72mmoI/L,敏感度100%,特异度83.3%。结论:产后能量负平衡、低Ca、Se和VE的缺乏是引起氧化应激的风险因素以及血中GSH-PX、CAT、Se、BHBA可作为氧化应激发生的预警指标。 相似文献
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