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【目的】构建秦川牛ADIG基因的重组腺病毒载体,包装并扩繁病毒,为下一步研究该基因在脂肪细胞分化过程中的分子作用机制和相关信号通路奠定基础。【方法】根据NCBI收录的家牛ADIG基因(NM_001113720.1)mRNA序列设计引物,以秦川牛组织样提取的总RNA反转录而成的cDNA为模板,通过RT-PCR和PCR扩增获得目的基因,将其连接到pMD19-T Simple载体并测序。质粒提取纯化后通过BglⅡ与SalⅠ双酶切,然后胶回收酶切产物,将其连接到穿梭载体pAdTrack/CMV上,构建重组穿梭质粒pAdTrack/CMV-ADIG。将pAdTrack/CMV-ADIG质粒用PmeⅠ酶切线性化,转化含有腺病毒骨架载体pAdEasy-1的大肠杆菌BJ5183感受态细胞中进行同源重组,构建重组腺病毒质粒pAD-ADIG,并用PacⅠ酶切鉴定,提取质粒后转化大肠杆菌Top10进行扩繁。用PacⅠ酶切线性化pAD-ADIG载体并回收质粒大片段,转染293A细胞进行病毒包装,然后完成病毒扩繁和病毒滴度的测定。【结果】PCR扩增获得了399bp ADIG基因CDS区;成功构建了重组穿梭质粒pAdTrack/CMVADIG和重组腺病毒质粒pAD-ADIG。经检测,ADIG重组腺病毒包装成功,扩繁后得到了高滴度的腺病毒(1×108PFU/mL)。【结论】成功构建了秦川牛ADIG基因的重组腺病毒表达载体pAD-ADIG,完成了病毒包装和扩繁。 相似文献
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EPSPS基因的克隆及油用亚麻表达载体的构建 总被引:2,自引:2,他引:0
以抗草甘膦油菜基因组DNA为模板,PCR扩增抗草甘膦油菜的5-烯醇式丙酮酸莽草酸-3-磷酸合成酶(EPSPS)基因,构建植物表达载体pBI121-EPSPS,并导入农杆菌进行检测.结果表明:扩增获得EPSPS基因全长1 377bp,共编码459个氨基酸.测序结果表明,其与美国Monsanto公司获得的专利(US5633435)中已知的CDS序列完全一致,表明成功构建了EPSPS植物表达载体,并将其导入农杆菌菌株LBA4404中. 相似文献
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柳河县位于吉林省东南部,地处半山区丘陵地带,粮食作物生产在全县农业经济生产中占主导地位,种粮收入是农民收入的主要来源。党的十一届三中全会以来,柳河县的广大农民思想解放了,市场经济意识增强了,生产的积极性提高了,对农业生产技术要求更高了,农村发生了翻天覆地的变化,农业技术推广工作也取得了巨大进步,但和当前农业发展需要相比仍然存在着较大的差距, 相似文献
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动物营养学中的乳源性生长因子的研究进展 总被引:1,自引:0,他引:1
未知生长因子(Unknown Growth Factors,UGF)是指某些饲料中存在的成分尚未查明但饲喂后不同畜禽及对其不同生长阶段有积极作用的物质(陆克文等,1999;马玉敏等,2000)。这些物质的作用主要包括促进动物生长、增加抗病力、提高饲料的转化率、产蛋率、孵化率和成活率等等(马玉敏等,2000)。因这类物质的成分结构、理化性质及其促生长机理尚未清楚,有待进一步深入研究和认识,所以营养学家们称其为未知因子或未鉴定生长因子。 自20世纪20年代未知生长因子被命名后,随着科学技术的发展,研究发现,并非所有的常规饲料都含有生长因子,因为某些常规日粮基本上可以由纯养分日粮代替,而鱼粉、发酵产物和动物乳则不然。为此,根据当代科技水平通常将未知生长因子分为三类:(1)发酵产物生长因子——酒糟、抗生素发酵液及其残渣中的未知生长因子;(2)草类和乳源性生长因子——鲜草、苜蓿草粉、动物乳中的未知生长因子;(3)鱼粉生长因子——鱼粉、鱼汁中的未知生长因子。这些生长因子受到了人们极大关注,特别是乳源性生长因子和鱼粉生长因子(马玉敏等,2000)。 相似文献
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