利用 GST pull-down 联合质谱技术鉴定H7N9 禽流感病毒 PA-X 的互作蛋白     

徐国双  姜童潇  郭艺迪  段铭  张茂林  关振宏 《广东农业科学》2022,49(1):121-127

[目的]为探究H7N9亚型禽流感病毒(AIV)PA-X蛋白的功能,采用GST pull-down联合质谱技术筛选与鉴定与PA-X相互作用的宿主蛋白.[方法]构建PA-X的重组表达载体pGEX-4T-PA-X,转化大肠杆菌BL21(DE3)中表达重组蛋白,并利用GST亲合树脂进行纯化得到GST-PA-X融合蛋白.利用GST pull-down技术,将GST-PA-X和GST对照蛋白分别与A549细胞裂解液总蛋白进行体外孵育,得到的蛋白复合物经SDS-PAGE分离后进行质谱检测分析.[结果]经GST pull-down筛选与质谱分析鉴定后得到39个高可信度的可能与PA-X互作的候选蛋白质.通过GO注释和KEGG等通路富集分析发现,这些蛋白主要参与RNA的代谢及加工、mRNA翻译及运输、多肽生物合成及基因表达的转录后调节等生物学过程.对其中评分最高的蛋白Hsp70-2与PA-X的相互作用作进一步验证,免疫荧光试验结果表明Hsp70-2与PA-X可以在细胞浆中共定位.[结论]利用GST pull-down联合质谱技术筛选到39种与PA-X互作的候选蛋白,且经免疫荧光试验证明候选蛋白Hsp70-2与PA-X存在共定位,为深入探讨PA-X在AIV生命周期中的作用机制奠定基础.  相似文献   

耐盐碱早熟水稻品种优质高效水直播栽培技术规程     

侯红燕  董晓亮  周红  张茂林  金丁坤  魏立兴 《农学学报》2022,12(11):1-4

旨在获得生育期在120天左右的耐盐碱早熟水稻品种的优质、高产栽培技术，进行优质高效水直播栽培技术研究。以早熟粳稻水稻品种‘吉宏6号’为试验材料，利用3‰~6‰中度盐碱地大田耕平地、灌排水、浸种播种、病虫草害防治、施肥最佳模式进行交叉试验。经过3年的试验研究，得出耐盐碱早熟水稻品种优质高效水直播技术规程。该规程规定了滨海盐碱地水稻优质高效水直播栽培技术，规定了生育期120天的优质水稻种质质量及浸种技术、春季深翻耕平地技术要求，规定了播种期、出苗期、分蘖期、长穗期、结实期对灌排水、地下害虫防治、草害防治、病害防治、施肥管理的技术规程，规定了蜡熟末期、晚熟初期的适时收获标准，规定了水稻脱粒、运输及仓储要求。该技术规程，无需泡田，节约用水量达50%；晚播将灌浆期控制在9月中旬，有效地防止鸟害；适时收获，能显著提高水稻的食味品质。  相似文献   

考虑吸附滞后的页岩气藏流动物质平衡方程     

张茂林  张娴  杨龙  张艺钟 《长江大学学报》2022,19(4):49-59

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