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采用增殖的鸡传染性鼻气管炎病毒（ARTV）NL7784株，经PEG－20000浓缩液提纯抗原和纯化羊抗鸡IgG抗体，建立了检测ARTV抗体的间接酶联免疫吸附试验。该试验的最佳反应条件为：包被液为pH9.6的0.05mol/L碳酸盐缓冲液，抗原最佳稀释度为1：160，以含6％犊牛血清（CS）的磷酸盐缓冲液作为封闭液，稀释液用含10％CS、0.5% Tween-20的磷酸盐缓冲液，抗原与血清结合的最佳反应时间为30min；酶标抗体的最佳稀释倍数为1：1000，酶联反应的最佳时间为30min，底物的最佳反应时间为15min。本方法具有良好的特异性、稳定性、可重复性和较高的敏感性。 相似文献
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为确保疫苗生产的的安全性,对不同代次的ST细胞进行鉴定。从中国兽医药品监察所引进第40代的ST细胞,传至80代,每个代次各冻存3瓶于液氮中。细胞复苏后,对细胞的特征、纯净度、核型、致瘤性及对细胞的毒性进行了研究。结果表明,ST细胞系呈现梭状上皮细胞,生长状态良好,细胞的生长速度基本一致;细菌、霉菌、支原体、外源病毒的检测均为阴性;染色体数目为19对且核型相同;无致瘤性;对豚鼠和兔子无毒性;病毒在ST细胞系中稳定地繁殖,TCID50≥107.00,HI≥1∶32。建立ST细胞的种子细胞库,为开展猪细小病毒疫苗的生产提供安全保障,也为猪伪狂犬病疫苗及猪细小病毒弱毒苗的研究提供基础理论依据。 相似文献
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为优化ST悬浮细胞培养条件及其生产猪伪狂犬病病毒的工艺参数,对影响ST悬浮细胞生长的接种细胞初始密度、培养时间和摇瓶转速等工艺参数进行优化比较,对影响猪伪狂犬病病毒增殖的接种细胞初始密度、感染量和培养时间等条件进行优化。结果显示：接种细胞初始密度1.00×106 cells/mL、摇瓶转速140 r/min、悬浮培养48 h时,细胞数量扩增了4倍且细胞活力高;猪伪狂犬病病毒接种时初始细胞密度2.00×106 cells/mL、感染量MOI=1.0、培养60~72 h,毒价可达109.00 TCID50/mL。结果表明,优化后的培养工艺适用于摇瓶中ST悬浮细胞及猪伪狂犬病病毒的培养。本研究为获得高密度ST悬浮细胞和提高猪伪狂犬病病毒繁殖能力提供了试验依据。 相似文献
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现代免疫分析技术在食品卫生检验中的应用 总被引：6，自引：0，他引：6
酶联免疫吸附测定、放射免疫测定、放射测量法、生物发光与化学发光法、免疫传感器、荧光免疫测定、金黄色葡萄球菌A蛋白及核酸探针等免疫技术在食品检验中的应用 相似文献
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参照已发表的猪乙脑病毒(JEV)基因组序列,设计引物,扩增出E基因,克隆到pMD19-T载体中。序列分析表明:E基因与NCBI登录的JEV毒株E基因序列同源性达到96.6%—99.7%;遗传进化分析表明:该JEV属于GIII病毒。将E基因片段亚克隆到pET32a-E,IPTG诱导表达E蛋白。Western Blot检测表明:该重组蛋白能与JEV高免血清发生非特异性反应,证明该表达产物为JEV E蛋白。以重组E蛋白为包被抗原,建立检测猪JEV抗体的间接ELISA方法,检测160份猪血清样品,与猪JEV抗体检测试剂盒进行平行性对比,结果显示二者的吻合率为92.2%,表明建立的ELISA方法具有较好的特异性,有望为临床提供一种JEV血清抗体检测方法。 相似文献
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猪细小病毒是引起母猪繁殖障碍的主要病原之一,给养猪业造成的损失非常巨大,目前主要的预防措施是疫苗接种。在国外已有商品化的猪细小病毒病灭活疫苗和弱毒疫苗,国内现在只有商品化的灭活疫苗,弱毒疫苗尽管有很多研究报道,但迄今为止还没有商品化。猪细小病毒和其他病毒的联苗研究也有很多报道,但离商品化还有很多工作要做。 相似文献
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应用RT-PCR方法扩增出猪日本乙型脑炎病毒（JEV）的NS1基因,通过Sal Ⅰ＋EcoR Ⅰ双酶切后把该基因插入到经过同样双酶切的穿梭质粒pDC315中.重组穿梭载体经过双酶切和PCR鉴定后进行测序,序列测定正确.将获得的重组穿梭质粒与腺病毒骨架质粒共转染293细胞后获得重组腺病毒.PCR鉴定及间接ELISA检测的结果证明所构建的重组腺病毒成功地表达了JEV的NS1. 相似文献