常用家蚕病原原接种与纯化技术     

谭佩婵  徐兴耀  孙京臣 《广东蚕业》2001,(2)

蚕病的病原研究和利用越来越深入,就需要能快速、大量地繁殖出较高纯度的病原的方法,供教学和实验使用,现根据本实验室多年来的经验,简单介绍一下常用家蚕病原菌的简易接种和纯化方法,供参考使用。一、家蚕病毒病病毒的收集与纯化家蚕病毒病主要是核型多角体病和质型多角体病两种。 1、家蚕核型多角体病毒(Bm—NPV)  相似文献   

家蚕品种对微粒子病抗性测定     

徐兴耀  谭佩婵  孙京臣  农朝志  余爱群  文哲光 《广东蚕业》1998,(2)

采用广东生产上使用的932,7532;9·芙、7·湘等12个原种或双交原种,分别在二龄和三龄起蚕接种含Nosem bombycis孢子10~3—10~7ml浓度液6—8hr,常规饲养10天,饥饿2天后退头蚁蚕显微镜检验,机率值分析法估算LC50,比较品种间抗性差异,结果表明:目前生产上使用的品种对微料子病均是敏感的,即抗性较弱。在调查的12个品种中抗微孢子虫可分为二个档次,二龄期试验区抗性强的芙·9 LC50=4.364×10~5比抗性弱的湘晖LC50=1.073×10~4相差约40倍左右;三龄试验区差异更显著:芙·9 LC50=1.7761×10~6比湘晖LC50=2.333×10~4相差约100倍。抗性随龄期增长而增强,双交原种抗微粒子病比纯系原种强,且与亲本抗性有关。  相似文献   

模拟感染家蚕微粒子病的蚕卵、蚕蛾PCR检测的初步研究   总被引：4，自引：2，他引：2  

刘吉平  曹阳  Smith J E  徐兴耀 《蚕业科学》2004,30(4):367-370

在比较研究不同浓度家蚕微孢子虫 (Nosemabombycis,N .b)孢子与模拟染毒N .b孢子蚕卵、蚕蛾的模板DNA制备方法的基础上 ,选用MP1/MP2和V1F/ 5 30R两对引物进行PCR扩增检测。结果为 :碱性条件预处理N .b孢子后再抽提的DNA ,其得率略高于常规方法抽提的DNA ,但两者的模板质量相同 ;MP1/MP2和V1F/ 5 30R两对引物均可有效地检出N .b孢子DNA ,前者的检测灵敏度为 1μL 3× 10 6mL-1以上浓度的N .b孢子DNA ,后者为 1μL 3× 10 5mL-1以上浓度 ;对不同浓度N .b孢子DNA与蚕蛾DNA混合后进行PCR检测 ,V1F/ 5 30R引物的检测灵敏度为1μL 3× 10 6mL-1N .b孢子DNA。  相似文献   

对从剑纹夜蛾亚科的一种昆虫分离到的微孢子虫的研究     

万国富  卢铿明  徐兴耀  刘吉平  饶文聪  陈汉明  林忠芬 《广东蚕业》1995,(4)

本文研究了从广州石牌省蚕种繁殖试验所桑园中收集到的剑纹夜蛾亚科的一种昆虫分离到的微孢子虫(暂命名N.a)。通过它对家蚕的病原性、超微结构、微孢子的形态大小、在蚕体内的发育周期、血清学关系等研究,结果表明:N.a微孢子虫与近年来困扰省蚕种所蚕种生产的MG_1微孢子虫可能是同一种微孢子虫,揭示了MG_1微孢子虫是来自野外昆虫。切断野外昆虫微孢子虫的传播是防治家蚕微粒子病的有效措施。  相似文献   

家蚕质多角体病毒RDRP基因的克隆、表达及定位     

孙京臣  戴伟君  谭玉蓉  杨艺峰  张勤奋  徐兴耀  张景强 《农业生物技术学报》2005,13(2):202-206

应用分段RT-PCR的方法从家蚕质多角体病毒(Bombyx mori cytoplasmic polyhedmsis virus,BmCPV）中国株的dsRNA中成功地克隆了RDRP基因(RNA-dependent RNA polymerase),基因序列全长3691bD,并登录GenBank,序列号为AY496445。利用质粒载体pET-28b成功地构建了表达质粒pET28b-RDRP,并用IPTG诱导的方法在大肠杆菌(Escherichia coil)BL21（DE3)中获得表达,分子量约为138kD。以重组蛋白的兔抗为一抗,15mm山羊抗兔IgG-胶体金为二抗,进行免疫标记,电镜定位,结果显示在病蚕中肠的柱状细胞的游离病毒粒子和多角体内的病毒粒子上均能结合胶体金颗粒,标记率为35％左右,证明BmCPV病毒的RDRP复合物确实位于病毒衣壳上。  相似文献   

BmCPV病毒增殖的组织病理研究     

孙京臣谭佩婵  陈冬妮徐兴耀 《广东蚕业》2004,38(4):23-28

本研究采用石蜡切片技术,取健康的三龄起蚕经口接种BmCPV后不同时间段取中肠后部固定、制片,光学显微镜下观察家蚕中肠圆筒形细胞组织变化,作者认为随病毒的入侵复制增殖,病蚕圆筒形细胞出现的病理变化是与病毒复制增殖、多角体形成相关的,细胞内出现浅染小空白点时正是病毒发生基质与病毒粒子大量产生阶段;细胞松弛、先端膨大变形、出现多空泡时正是多角体逐步增多时期。’结合电子显微镜的研究结果,光镜下观察的组织病变进一步说明病毒的复制和多角体的形成都是由细胞顶端部位开始,逐渐向基底部推进,最后新的多角体充满整个细胞,使细胞溃烂破裂,大量多角体和病毒粒子落到肠腔。  相似文献   

由家蚕蛹─BmNPV系统建立环境诱变剂检测分析模型的初步研究     

曹阳  徐兴耀  黄自然  钟仰进  谭佩婵 《蚕业科学》1997,(4)

报道了9─氨基吖啶（9－AA）、甲基磺酸乙酯（EMS）和丝裂毒素C（MMC）3种强诱变剂在新设计的家蚕蛹─BmNPV系统致突变检测分析模型中得到的初步结果。9－AA和EMS以非中毒剂量分别与BmNPV混合注射于蚕蛹体腔后，2种诱变剂处理组蚕蛹发病时间比只注射病毒对照组延迟2～3d，随剂量增高，发病死亡率下降，蚕蛹生存率上升，存在明显的剂量效应。镜检3种诱变剂处理组蛹的血淋巴，发现部分病蛹中出现5％～20％的异常形态多角体，说明蛹体内部分BmNPV的基因可能被诱变损伤。试验结果符合模型分析第一阶段的预期结果。  相似文献   

家蚕遗传毒理学研究的评价与突破   总被引：3，自引：0，他引：3  

曹阳  黄自然  徐兴耀  李文楚 《广东蚕业》1996,(2)

1.导言近年来,由于人类生活环境接触的化学物和污染物日益增多,人们越来越关心这些化学物和污染物对人体的危害。特别是化学物潜在的遗传毒性,因能产生“致癌、致畸、致突变”(简称“三致”)的严重后果,尤其受到人们的重视。许多国家  相似文献   

家蚕微孢子虫孢子DNA的提取、克隆及部分DNA序列分析   总被引：3，自引：0，他引：3  

章新愉  卢铿明  庄楚雄  胡维民  徐兴耀  黄自然  陈火胜 《蚕业科学》1995,21(2):1-95

报道家蚕微孢子虫（Ｎｏｓｅｍａｂｏｍｂｙｃｉｓ简称Ｎ．ｂ）孢子ＤＮＡ的提取、克隆及部分ＤＮＡ序列测定的结果。采用ＳＤＳ－蛋白酶Ｋ将孢子破碎，用苯酚一氯仿法提取孢子的ＤＮＡ。将Ｎ．ｂ孢子ＤＮＡ与ｐＴＺ１８Ｒ质粒重组，转化于大肠杆菌ＤＨ５，获得４个阳性克隆株：ｐＴＺ１８ＲＮ．ｂ１，插入片段为１ｋｂ；ｐＴＺ１８ＲＮ．ｂ２，为１．２ｋｂ；ｐＴＺ１８ＲＮ．ｂ３为１．８ｋｂ及ｐＴＺ１８ＲＮ．ｂ４为１．９ｋｂ，经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交，证实插入的ＤＮＡ片段为家蚕Ｎ．ｂ孢子所特有。与ＭＧ１（Ｎｏｓｅｍａｓｐ．），蓖麻蚕微孢子虫、蓝萤叶甲微孢子虫及蚕卵的ＤＮＡ均无同源性。用双脱氧链终止法测定４个克隆株插入片段的部分ＤＮＡ的序列，经检索尚未发现同源性的基因序列。讨论了ＰＣＲ技术诊断家蚕微孢子虫孢子与近缘种的问题。  相似文献   

提高担茧制种量技术的研究——一九八九年廉江基点试验总结     

农朝志  陈锦汉  毛铿祖  徐兴耀  卢铿明  余轼伍 《广东蚕业》1990,(3)

蚕种是蚕茧生产的主要生产资料之一,其品质的优劣,关系到蚕造的丰歉,茧丝的质量及其经济效益。因此,蚕种繁育工作是关系到能否持续、稳定、协调发展我省蚕桑生产的重要一环。广大科技工作者和各级领导部门,在选育优良蚕品种,改善繁育设施条件,提高管理水平,采用先进繁育技术等方面都做了大量工作,取得了良好成绩,对发展我省蚕茧生产发挥了积极作用。但近几年来,由于种种原因,原蚕饲养不够稳定,单张原种收茧量低,而且蛹期发生死蛹多,  相似文献