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为了探讨低温保存对绵羊精子质膜完整性的影响,研究采用低渗肿胀-伊红拒染(HOS-EY)法检测低温保存前后绵羊精子头膜和尾膜的完整性。试验设计了5个HOS-EY低渗染液浓度梯度组合(110,130,150,170,190 mOsm),按精子尾部肿胀与否和头部着色与否分为4种类型进行统计。结果表明:低温保存后,绵羊精子头膜、尾膜均完整的Ⅳ型精子发生率和头膜、尾膜均损伤的Ⅰ型精子发生率与鲜精相比分别极显著减少和增多(P<0.01),说明低温保存过程对精子质膜完整性有极显著影响;在低温保存过程中头膜损伤-尾膜完整的Ⅱ型精子发生率极显著增多(P<0.01),而头膜完整-尾膜损伤的Ⅲ型精子发生率显著减少(P<0.05),说明精子头膜或尾膜的损伤是独立发生的,且头膜比尾膜更易损伤。5种低渗液中,150 mOsm染液检测效果最好。 相似文献
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【目的】探究白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor, LIF)对牛卵母细胞和早期胚胎发育能力及多潜能基因表达的影响。【方法】将牛卵丘-卵母细胞复合体(cumulus oocyte complexes, COCs)分为4组,对照组:在卵母细胞体外成熟(in vitro maturation, IVM)和胚胎体外培养(in vitro culture, IVC)过程中均不添加LIF溶液;处理组1(T1组):IVM过程添加25 ng/mL LIF,IVC过程不添加LIF;处理组2(T2组):IVM过程不添加LIF,IVC过程添加25 ng/mL LIF;处理组3(T3组):IVM和IVC全过程均添加25 ng/mL LIF。用Fluo-3荧光指示剂检测卵母细胞胞内游离钙离子([Ca2+]i)浓度;挑选有第一极体排出的卵母细胞进行孤雌激活,统计各组卵母细胞卵裂率和囊胚率;利用实时荧光定量PCR检测囊胚中多潜能基因的相对表达量。【结果】与对照组相比,培养8 h后,T1组牛卵母细胞胞内[Ca2+]i浓度极显著下降(P<... 相似文献
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带精浆直接稀释法探讨猪精液低温(4℃)保存的可行性 总被引:1,自引:0,他引:1
为研制更为简易、高效的保存稀释液配方及操作程序,探讨4℃条件下稀释保存猪精液的可行性,本实验首次采用带精浆直接稀释法对猪精液的低温保存技术进行了研究.结果表明,在4℃条件下,用Ⅱ液(葡萄糖-卵黄-蔗糖)和Ⅳ液(葡萄糖-卵黄-乳糖)保存猪精液,精子的存活时间和活率分别为144 h、0.517和132 h、0.510,而Ⅰ液(葡萄糖-卵黄-蔗糖-柠檬酸钠)和Ⅲ液(葡萄糖-卵黄-乳糖-柠檬酸钠)精子活率保持0.5以上不到24 h.随着保存时间的延长,四种稀释液中保存的精子活率和顶体完整率均逐步下降,其中Ⅱ液和Ⅳ液均分别在48 h和24 h内下降较快,以后则呈缓慢下降趋势.综上所述,在低温条件下,采用Ⅱ液和Ⅳ液稀释保存猪精液,其精子活率能分别在144 h和132 h内保持0.5以上;所研制配方(Ⅱ液和Ⅳ液)组分简单、配制方便;采用带精浆直接稀释法低温保存猪精液可行,且操作程序简易. 相似文献
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【目的】研究内质网IP3受体(IP3R)抑制剂2-氨基乙基联苯基硼酸酯(2-APB)对玻璃化冷冻-解冻牛MⅡ期卵母细胞发育能力的影响。【方法】将体外成熟24 h的卵丘-卵母细胞复合体(COCs)用0.1%透明质酸酶消化去除卵丘颗粒细胞,获得的卵母细胞分为对照组和2-APB组,采用OPS法进行玻璃化冷冻,对照组直接进行玻璃化冷冻,2-APB组在玻璃化冷冻前先用10 μmol/L 2-APB预处理10 min。2 d后解冻卵母细胞,统计解冻后(0 h)及恢复培养2 h时卵母细胞的存活率,用FITC-PNA荧光探针检测恢复培养2 h时卵母细胞皮质颗粒(CG)的分布,用2',7'-DCHFDA和Cell Tracker Blue CMF2HC分别检测胞内活性氧(ROS)和谷胱甘肽(GSH)含量。将成熟培养24 h未冷冻卵母细胞(Fresh组),与解冻后恢复2 h的对照组和2-APB组卵母细胞同时进行孤雌激活,于培养的第2、7天分别统计孤雌胚胎的卵裂率和囊胚率。【结果】与对照组相比,2-APB组冷冻-解冻卵母细胞0和2 h的存活率均显著增加(P<0.05);2-APB组皮质颗粒皮质区分布比例显著提高(P<0.05),损伤型分布比例显著降低(P<0.05);2-APB组卵母细胞内GSH含量显著增加(P<0.05),ROS含量显著降低(P<0.05);2-APB组卵母细胞孤雌激活胚胎的卵裂率、囊胚率均显著增加(P<0.05),且与Fresh组无显著差异(P>0.05)。【结论】2-APB预处理可通过增加卵母细胞内GSH含量,降低卵母细胞皮质颗粒损伤型分布比例和胞内ROS含量,提高玻璃化冷冻保存牛MⅡ期卵母细胞质量及早期胚胎发育能力。 相似文献