多重PCR技术同时检测牛传染性鼻气管炎和赤羽病方法的建立和应用     

孔繁德  陈圣军  徐淑菲  张吉红  唐泰山 《经济动物学报》2013,17(2)

为满足同时对IBRV和AKAV进行快速诊断的需要,根据牛疱疹病毒1型(BHV 1)gB基因序列和赤羽病病毒(AKAV)的S基因序列,设计了2对针对这2种病毒的特异引物,并建立了多重PCR方法,分别对其最佳反应条件、特异性及敏感性进行了测定,结果表明:该方法能同时扩增得到2条与试验设计相符的311 bp(I BRV)和392 bp(AKAV)特异性条带;IBRV的灵敏度为0.13 pg/25μL,AKAV的灵敏度为1.04 pg/25μL。本试验方法的建立对于加强进出口牛IBRV和AKAV的检验检疫具有十分重要的意义。  相似文献   

沙门氏菌快速检测试纸条的研制与应用     

陈琼  孔繁德  张长弓  彭海滨  徐淑菲 《福建畜牧兽医》2006,28(5):6-8

应用提纯的兔抗沙门氏菌IgG-2包被硝酸纤维素膜检测线,羊抗兔IgG包被对照线,然后用胶体金标记纯化的兔抗沙门氏菌IgG-1建立了检测沙门氏菌的快速检测试纸条。该法通过胶体金标记兔抗沙门氏菌抗体直接显色,阳性者检测线出现红色线,整个试验过程仅需10~15min即可判断结果。与大肠杆菌、枸橼酸杆菌、变形杆菌、阴沟肠杆菌等常见肠道菌不发生交叉反应。与沙门氏菌的最低检测量为2.3×105cfu/ml。试纸条4℃或37℃存放9个月,检测结果稳定。  相似文献   

沙门氏菌通用PCR快速检测试剂盒的研制与应用   总被引：2，自引：0，他引：2  

孔繁德  陈琼  徐淑菲  彭海滨 《福建畜牧兽医》2007,(Z1)

根据沙门氏菌fimY基因建立了用于检测沙门氏菌的通用PCR方法。对收集的A-F群标准菌株和临床分离的60株沙门氏菌分离株和11种非沙门氏菌进行PCR检测,采用2.0%琼脂糖电泳进行检测,结果所有沙门氏菌均扩增出526bp的特异性条带,而非沙门氏菌均未扩增出任何条带。通过电泳判定结果,该法可检出扩增体系中93cfu的沙门氏菌,还可检出含3cfu的样品用BP预增菌或MM增菌后的菌液。说明该方法敏感性高、特异性强。采用直接菌体加入法、热裂解、反复冻融、CTAB碱裂解法和柱式试剂盒提取法分别提取核酸模板,结果CTAB法效果最好,但操作烦琐,而直接菌体加入法和热裂解法可以达到和柱式试剂盒同样的效果,且操作简便快速、经济、效果好,值得推广应用。  相似文献   

荧光定量RT-PCR检测犬瘟热方法的建立和应用     

陈琼  邵四海  孔繁德  徐淑菲  温海 《经济动物学报》2008,12(1):24-27

根据Gen Bank发表的犬瘟热病毒(CDV)的F基因序列,经过分析在F片段的保守区域内设计引物,建立了SYBR Green I荧光RT-PCR检测CDV的方法,并通过对厦门市宠物医院收集的临床发病和疑似发病的犬病料(包括眼分泌物、鼻拭子、唾液、血液、尿液等)的检测,结果表明:本研究建立的快速检测CDV的SYBRGreen I荧光RT-PCR方法具有特异性强、灵敏度高、操作简便等优点,值得推广应用。  相似文献   

赤羽病病原学研究进展(续)     

徐淑菲  孔繁德 《福建畜牧兽医》2006,28(1):26-26

4 发病机理 Cundlach．AC．(1990)对 AKAV 的发病机理进行了研究,提出 AKAV 的细胞受体在中枢神经系统。妊娠母畜感染 AKAV 后随血流增殖,并持续存在于胎盘子叶的滋养层细胞,胎儿中枢神经系统和骨骼  相似文献   

牛传染性鼻气管炎的危害和防检对策     

周斌华  孔繁德  徐淑菲  王景明 《中国动物检疫》2007,24(5):37-38

牛传染性鼻气管炎(Infectious Bovine Rhinotracheitis,IBR),是由牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)感染家养牛和野生牛引起的一种病毒性  相似文献   

进境鱼粉中沙门氏菌的分离与鉴定   总被引：5，自引：0，他引：5  

孔繁德  石椿丽  龚艳清  陈信忠  徐淑菲  谢明星 《福建畜牧兽医》2005,27(1):5-6

近两年来，在厦门口岸进口鱼粉的检测中，多次检出沙门氏菌。本文通过血清学鉴定，确定该菌为甲型副伤寒沙门氏菌和鸭沙门氏菌。动物回归试验说明其致病性很强，药敏试验发现菌必治、先锋霉素V、环丙沙星和氟哌酸对该菌高度敏感．  相似文献   

耐热型产肠毒素大肠杆菌检测方法的建立及应用     

吴玉娟  ;孔繁德  ;徐淑菲  ;王仍瑞 《厦门水产学院学报》2014,(5):344-349

为建立检测产肠毒素大肠杆菌（ETEC）耐热型肠毒素STa和STb的纳米金PCR方法,根据ETEC耐热型肠毒素STa和STb的基因序列,用Primer 5.0软件设计了2对特异性引物,优化得到最佳反应条件,并进行灵敏度和特异性的测试.实验结果表明：本文所建立的体系均能扩增到目的条带,灵敏度为47.5 cfu/mL,且特异性良好;所建立的纳米金PCR方法在人工染菌实验中也获得了较高的灵敏度和特异性.  相似文献