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【目的】验证姜黄素是否能够通过转录因子E2相关因子2（Nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2）信号通路减轻H2O2诱导的奶牛乳腺上皮细胞的氧化应激,为防治围产期奶牛代谢紊乱导致的氧化损伤提供理论依据。【方法】培养奶牛乳腺上皮细胞（MAC-T）,用500 μmol·L-1H2O2处理MAC-T细胞24 h后加入不同浓度的姜黄素（0、5、15或30 μmol·L-1）处理3 h;MAC-T细胞转染Nrf2 siRNA 48 h后,用500 μmol·L -1 H2O2处理奶牛乳腺上皮细胞系MAC-T细胞24 h后加入不同浓度的姜黄素（0、5、15或30 μmol·L-1）处理3 h。采用实时定量PCR（Quantitative real-time PCR,qPCR）、蛋白免疫印迹（Western blot,WB）和试剂盒等方法,检测Nrf2的蛋白表达量及下游靶基因NAD（P）H醌氧化还原酶1（NAD(P)H quinone oxidoreductase 1,NQO1）和血红素加氧酶1（Heme oxygenase 1,HO-1）的mRNA及蛋白表达量和超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase,SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（Glutathione peroxidase,GSH-Px）、过氧化氢酶（Catalase,CAT）和丙二醛（Malondialdehyde,MDA）等氧化应激相关指标的活性及含量。【结果】（1）H2O2处理组MAC-T细胞中MDA含量显著高于对照组（P<0.01）,而CAT、SOD和GSH-Px的活性显著低于对照组（P<0.01）。15 μmol·L-1姜黄素+H2O2共同处理组和30 μmol·L-1姜黄素+H2O2共同处理组MAC-T细胞中MDA的含量显著低于H2O2处理组（P<0.01）,而CAT、SOD和GSH-Px的活性显著高于H2O2处理组（P<0.05,P<0.01）。（2）H2O2处理组总Nrf2蛋白水平显著低于对照组（P<0.01）,H2O2处理组Nrf2下游基因HO-1和NQO1的mRNA及蛋白表达量也显著低于对照组（P<0.01）。姜黄素处理组总Nrf2蛋白表达水平显著高于对照组（P<0.01）,姜黄素处理组HO-1和NQO1的mRNA及蛋白表达量也显著高于对照组（P<0.01）。姜黄素+H2O2处理组总Nrf2蛋白表达水平显著高于H2O2处理组（P<0.01）,姜黄素+H2O2处理组HO-1和NQO1的mRNA及蛋白表达量也显著高于H2O2处理组（P<0.01）。（3）si-Nrf2组与对照组相比,Nrf2的mRNA表达水平显著降低（P<0.01）。si-Control+H2O2+姜黄素组与si-Control+H2O2组相比,MDA的含量显著降低（P<0.01）,而CAT、SOD和GSH-Px的活性显著升高（P<0.01）。si-Nrf2+H2O2+姜黄素处理组与si-Control+H2O2+姜黄素组相比,MDA的含量显著升高（P<0.01）,而CAT、SOD和GSH-Px活性显著降低（P<0.01）。【结论】姜黄素可以通过增加Nrf2的表达,诱导下游抗氧化分子的转录从而缓解H2O2诱导奶牛乳腺上皮细胞的氧化应激。本研究为防治围产期奶牛代谢紊乱导致的奶牛乳腺上皮细胞氧化损伤提供理论依据。 相似文献
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为了阐明日粮添加过瘤胃维生素D对围产期奶牛低钙血症的调控机制,在某集约化奶牛场选取40头奶牛,随机分为4组,对照组(C)饲喂基础日粮,试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组分别于产前10d至分娩后10d在日粮中每天添加1.5、3.0、6.0g/头过瘤胃维生素D。对4组试验奶牛围产期(分别于产前10、7、3、0d和产后3、7、10d)血清维生素D3(1,25-(OH)2D3)、钙、羟脯氨酸、甲状旁腺素和降钙素水平进行检测。结果表明,围产期奶牛血钙水平分娩时达最低,产后逐渐上升,且产前7d至产后10d对照组奶牛血钙浓度显著低于试验Ⅰ组(P<0.05);分娩当天试验Ⅰ组奶牛血浆中1,25-(OH)2D3、羟脯氨酸和降钙素水平显著高于对照组(P<0.05),甲状旁腺素水平显著低于对照组(P<0.05)。提示,日粮中每天添加1.5g/头过瘤胃维生素D能调节甲状旁腺素和降钙素等激素的分泌,促进肠道对钙的吸收,动员骨钙,从而防止奶牛产后低钙血的发生,且围产期奶牛低血钙症与机体血钙稳态调节作用密切关联。 相似文献
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【目的】探讨亚临床低血钙症奶牛饲料采食量、泌乳量、粪尿排放量及粪污所产生污染气体排放特征的关系。【方法】黑龙江某集约化奶牛养殖场选取产后7—14 d年龄、体况、胎次相近的奶牛12头,根据血钙指标分为亚临床低血钙症组和健康组奶牛各6头,每头奶牛分别单独饲养,连续饲养4 d。每天采血检测血液中Ca、BHBA、NEFA、CLU、P、Mg指标含量;记录每头牛每天泌乳量、采食量、粪、尿排放量;通过简易动态箱法对试验奶牛粪尿进行混合,检测混合物产生的NH_3、CO_2、CH_4气体排放量并进行分析。【结果】亚临床低血钙症组奶牛血清Ca、P、Mg浓度极显著低于健康组奶牛(P0.01),CLU显著低于健康组(P0.05),BHBA浓度显著高于健康组(P0.05),NEFA浓度极显著高于健康组奶牛(P0.01);亚临床低血钙症组奶牛产奶量和4%能量校正乳(ECM)极显著高于健康组(P0.01),排粪量显著高于健康组(P0.05);干物质消化率和尿量的差异虽然不显著但都有升高趋势。亚临床低血钙组奶牛采食1 kg干物质的产奶量极显著升高(P0.01),采食1 kg干物质的排粪量显著升高(P0.05);健康组和亚临床低血钙症组奶牛CH4的排放曲线无明显差异,两组的产气趋势基本相同,于试验的52 h左右出现峰值,之后下降;总体上看CO_2的排放没有明显变化趋势,无明显规律,健康组和亚临床低血钙症组分别在48和36 h处出现排放高峰,亚临床低血钙症组出现峰值的时间要早于健康组,之后下降随即无规律起伏。亚临床低血钙症组的CO_2累计排放量随时间的推移低于健康组;健康组奶牛NH_3排放浓度在24h处出现高峰,随后降低,45 h再次出现峰值,之后排放浓度逐渐降低。亚临床低血钙症组奶牛NH_3排放浓度在21 h处出现峰值,之后排放浓度降低,两组试验的折线趋势基本一致,都是出现峰值后浓度降低但都是有起伏的波动。亚临床低血钙症组NH_3的累计排放量低于健康组。【结论】亚临床低血钙症奶牛患病期间由于采食摄取营养物质不能满足泌乳需求而处于能量及钙负平衡状态。同时肠道消化吸收率增加,用于满足泌乳对能量的需求;在相同质量的粪尿混合物检测情况下亚临床低血钙症不会影响CH_4的排放量,但亚临床低血钙奶牛粪尿中NH3和CO_2排放量低于健康牛,然而降低的温室气体排放是否与肠道消化吸收率的增加促进了饲料能量的吸收有关利用仍需进一步研究。 相似文献
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本研究旨在了解围产期低血钙奶牛与正常奶牛的血浆Serine peptidase inhibitor(SERPIN)与血钙之间的关系。在分娩当天、产前14～7d和产后7～14d根据血钙浓度将实验牛分为正常对照组(2.20～3.5mmol/L,C)和低血钙组(<2.20mmol/L,T),每组3头。利用Westernblotting检测试验牛血浆SERPIN丰度。结果显示:SPI蛋白在奶牛发生低血钙时,表达上调。结论:本试验首次证明了血浆SERPIN与血钙浓度呈负关联,血钙可能通过SERPIN途径调节机体的凝血过程和免疫功能。 相似文献
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泌乳早期发情和乏情奶牛机体代谢和生殖机能的变化 总被引：1，自引：0，他引：1
在某一集约化牛场,随机选取奶牛30头,在奶牛产后发情期(50～90 d)内根据奶牛是否发情将奶牛分为发情组和乏情组。通过对试验奶牛血液生化指标(Glu、BHBA、NEFA)、内分泌指标(FSH、LH、LP、E2、P4)等进行调查和检测。结果显示:当奶牛发情时,机体血浆Glu、FSH、LH、E2和LP浓度高,血浆NEFA、P4浓度低,但乏情时正好相反。当奶牛发情时,血浆leptin与LH、E2呈显著正相关,与P4呈显著负相关,但乏情奶牛未呈现相关性。这些结果提示奶牛乏情与机体能量代谢状况和Ins、Gn、E2、P4、Lp分泌少有关。能量平衡能促进奶牛产后发情,与机体高水平血糖、Lp、FSH、LH、E2和低水平P4、NEFA有关。LP是奶牛泌乳早期发情的一个重要调控因子,在奶牛产后能量平衡、生产性能和繁殖性能之间起到一个平衡纽带的作用。 相似文献
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基于1H NMR技术的乳热奶牛血清代谢组学分析 总被引：1，自引：1，他引：0
【目的】应用1H谱核磁共振（1H NMR）技术筛选乳热奶牛血清内差异表现的小分子代谢物,从小分子水平和物质、能量代谢的角度探究奶牛发生乳热时其体内的代谢变化。【方法】选取年龄、胎次、体况和泌乳量相近的分娩当天的荷斯坦高产奶牛共32头,根据其血清中钙离子浓度及其有无临床症状分为两组。其中,24头奶牛为健康对照组（Group1, 血钙浓度 > 2.5 mmol·L-1,无其他任何症状）和8头乳热组（Group2, 血钙浓度 < 1.4 mmol·L-1,伴有明显乳热临床症状）。32头奶牛分别于清晨饲喂和榨乳前从颈静脉采集血液10 mL,置于离心管中,4℃下以1 500 × g 离心20 min,将离心得到的血清装入1.5 mL的EP管中,置于-80℃下待测。待样品解冻后,分别从每个EP管中抽取400 μL血清,加入200 μL缓冲盐溶液,充分混合、离心后,提取550 μL上清液置于5 mm核磁管中,在500 MHz的核磁共振波谱仪下采集信号。然后利用Topspin和MestReNova等软件将采集到的信号进行傅里叶转换,同时进行调零、校正基线和相位等预处理,去除水峰和尿素峰信号,将一维图谱进行积分分段,并将图谱信息转换为TXT格式文件,以便于后续数据分析,然后使用Chenomx软件进行化合物指认。最后应用SIMCA-P软件对得到的图谱数据进行多元统计分析,包括主成分分析（PCA）和正交修正-偏最小二乘法-判别分析（OSC-PLS-DA）, 同时结合SPSS软件对核磁数据进行单因素方差分析得到的P值以及Loading图,最终筛选出表现差异的小分子代谢物。【结果】本试验成功得到了乳热组和健康对照组奶牛的血清代谢图谱及差异表达代谢物的Loading图;PCA结果显示每组样品均在95%置信区间内,无需剔除,主成分贡献率较低,其中PC1=26.2%,PC2=16.7%,组间差异变量不能被选择;OSC-PLS- DA结果显示经过5次正交信号修正,与分组无关的变量被去除,组间差异达到最大化;与健康对照组相比,共筛选出9种血清差异表达代谢物,其中4种表达上调,分别为 β-羟基丁酸、丙酮、丙酮酸和赖氨酸,5种表达下调,分别为葡萄糖、丙氨酸、丙三醇（甘油）、磷酸肌酸和氨基丁酸;9种差异代谢产物多为糖和氨基酸,相互之间形成了一个能量转化网络图,通过多种代谢途径参与了机体能量代谢过程,其中较为特殊的差异代谢产物,如磷酸肌酸可直接为机体提供能量,其表现降低可能与病牛肌无力和瘫痪有关。此外,本试验中乳热组奶牛氨基丁酸降低,临床表现为精神沉郁、甚至昏迷,这与人类抑郁症患者的氨基丁酸表现相吻合,有关氨基丁酸下降与奶牛乳热精神的关系有待研究者进一步证实。【结论】1H NMR技术能够被应用于筛选奶牛血清表现差异的小分子代谢物,代谢物差异显著;本试验中乳热奶牛血清差异代谢产物表现出能量负平衡及脂肪动员的病理学特征,提示乳热与能量代谢障碍有关。 相似文献
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选取产后10～15d,年龄、胎次、产奶量相近,年产奶量大于6t的荷斯坦奶牛24头,随机分为4组,每组各6头.Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组分别在基础日粮中每头每天添加200,300和400g过瘤胃葡萄糖,Ⅳ组为对照组,饲喂基础日粮.过瘤胃葡萄糖分早、晚2次混于精料中,任其自由采食,饲喂期20d.通过对试验奶牛在饲喂前、饲喂后10d和20d的产奶量、乳汁成分的分析.结果显示,与对照组比较,Ⅰ组产奶量极显著升高(P<0.01);乳脂肪、乳蛋白、乳糖水平均不显著(P>0.05).表明过瘤胃葡萄糖能提高奶牛泌乳性能. 相似文献
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为阐明奶牛血浆瘦素、能量状况和生殖机能之间的关系,随机选取年龄、胎次、泌乳量相近的奶牛60头,分别在产后1、14、28、42、56和70 d时颈静脉采血,根据血糖浓度在6个时间点分为低血糖组(L)和对照组(CK).同时调查和检测奶牛的生产性能(体重、泌乳量和干物质摄入量)、繁殖性能(首次配种间隔、情期受胎率、发情率和配种指数)、血液生化指标(血糖、β-羟丁酸和游离脂肪酸)和内分泌指标(胰岛素、胰高血糖素、瘦素、雌二醇和孕酮).结果显示:奶牛泌乳早期存在不同程度的能量负平衡,产后14 d最高.能量负平衡(negative energy balance,NEB)能使奶牛产后干物质摄入量(DMI)、体重(BW)和泌乳量(MY)减少,首次配种间隔延长,情期受胎率和发情率降低,配种指数增高,血浆胰岛素(Ins)、胰高血糖素(Gn)、瘦素(leptin)、雌二醇(E2)和孕酮(P4)浓度降低,呈现低血糖(Glu)、高血浆游离脂肪酸(NEFA)和β-羟丁酸(BHBA)生化特性;能量负平衡时,奶牛血浆瘦素与血浆Glu、E2、P4之间呈显著正相关,与BW损失、血浆NEFA之间呈明显负相关;能量平衡时,奶牛血浆瘦素与DMI、Glu、Ins之间呈显著正相关,与Bw损失呈显著负相关,与血浆E2和P4之间相关不显著.这些结果提示,奶牛泌乳早期易发能量负平衡不仅与干物质摄入量、体重、泌乳量密切相关,而且与机体内分泌未完全协调发挥作用有关.能量负平衡明显降低泌乳早期奶牛的生产性能和繁殖性能.血浆瘦素与生产性能指标、血浆生化指标的相关性分析证实瘦素在奶牛能量平衡、生产性能和繁殖性能之间起到一个平衡纽带的作用. 相似文献
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选取患骨营养不良的荷斯坦牛群17头,日粮中将磷酸氢钙(127.5g/头.d)改换为石灰粉(200g/d.头)饲喂30d。在治疗前1d和治疗后30d测定试验奶牛血浆Ca、P、AKP含量。结果显示,患病牛群治疗前低血钙发病率(82.35%)显著高于治疗后(17.65%)(P0.01)。治疗后血浆Ca浓度显著高于治疗前(P0.01),血浆P浓度显著降低(P0.05),血浆Ca:P显著升高(P0.05),血浆AKP略升高(P0.05)。结论:日粮钙含量低所致的钙磷比失调是本次奶牛骨营养不良发生的主要原因。 相似文献
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为了解健康奶牛围产期钙代谢特点,本试验选取围产期健康奶牛20头,分别在产前7d、3d,分娩当天,产后3d、7d对试验奶牛血浆Ca、P、ALP、HYP浓度进行测定。按每个时间点血钙水平将试验奶牛分为血钙正常组(C)和低血钙组(L)。结果显示:奶牛在产前7d至产后7d低血钙发生率分别为45%、20%、80%、25%、15%。产前7d到产后7d,C组奶牛血浆Ca、ALP、HYP水平均显著高于L组(P0.05)。两组奶牛血浆P浓度围产期无显著差异(P0.05)。结论:奶牛围产期易发生低血钙,以分娩时发生率最高;围产期奶牛低血钙症的发生可能与骨钙动员能力低有关。 相似文献