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51.
52.
通过GenBank中对小反刍兽疫病毒N蛋白基因、亨德拉病毒及尼帕病毒H蛋白基因、西尼罗河热病毒PrM蛋白基因和非洲猪瘟病毒P72基因这5种外来病病毒的主要基因的分析比较,选择相应基因的保守序列进行人工合成,并对每段基因设计2对引物,扩增片段大小均在350-550bp之间。通过对条件的反复优化,建立了1种能够同时检测到这5种病原的并联PCR/RT-PCR方法。结果显示,该方法最低可检测到10-5 mg/L的病毒的DNA/cDNA,而且特异性强、重复性好。在45份猪样品及56份蝙蝠样品的检测中,只有阳性对照出现了目的条带,而其他均未出现目的条带。这说明本研究建立的5种主要外来病病毒并联PCR/RT-PCR的检测方法具有灵敏度高、特异性好的特点,可用于ASFV、PPRV、HeV、NiV和WNV的预防、检测及扑灭。 相似文献
53.
本研究对我国部分城市或地区犬狂犬病的免疫覆盖率进行了连续3年以上的调查,结果显示,所调查的发达城市犬狂犬病免疫覆盖率总体水平有所提高,如深圳和北京已达到或接近70%的有效覆盖率;南方较发达城市的免疫覆盖率为20%~30%,但距离狂犬病免疫覆盖标准(≥70%)相差甚远;农村地区和狂犬病流行的北方城市,狂犬病免疫覆盖率仍很低,甚至不足5%。以上结果反映出,在未实行强制免疫的情况下,我国狂犬病的免疫覆盖率和经济发展水平呈正相关,欠发达城市和农村地区的犬仍未接受有效免疫,无法阻断狂犬病在动物之间传播,不利于我国狂犬病的控制。 相似文献
54.
为构建猪瘟重组伪狂犬疫苗,以Tn5转座子为介导,采用体外转座的方法将猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)E2基因和增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluoresce protein,EGFP)的表达盒随机插入伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)基因组中,随后将转座产物转染BHK-21细胞,获得表达E2蛋白和EGFP的病毒库,并对E2蛋白和EGFP在细胞上的表达效果进行PCR鉴定和间接免疫荧光分析。试验结果表明,运用体外转座的方法可以将外源基因插入PRV基因组中,并且外源基因可以在细胞中表达。本研究为重组病毒的研究提供了新思路,并为新型重组猪瘟疫苗的研制进一步奠定了基础。 相似文献
55.
56.
对带有绵羊MT启动子-狂犬病病毒糖蛋白基因的(MT-Rgp)的TgN(oMT-Rgp)2Lge、TgN(oMT-Rgp)4Lge和TgN(oMT-Rgp)6Lge3株转基因小鼠系(子代)进行了表达检测。ELISA结果表明,小鼠肝脏、肾脏中均有糖蛋白表达产物,以肝脏的表达量较高;对肝脏的免疫组化检测结果显示,糖蛋白分布在肝脏实质细胞,主要位于细胞膜上和胞浆内。对8只TgN(oMT-Rgp)2Lge子代鼠一次接种灭活的狂犬病病毒8202株,接种前和接种后3周的血清抗体水平变化在转基因鼠和非转基因鼠之间有明显区别,非转基因鼠抗狂犬病病毒抗体水平明显升高,而转基因鼠抗体水平基本保持不变。经统计学分析,转基因鼠的抗体水平变化相差不显著,表明转基因小鼠对该病毒形成了部分免疫耐受性。 相似文献
57.
牛BLG/hEPO和大鼠WAP/hEPO基因在家兔乳腺中的表达 总被引:1,自引:1,他引:0
将人红细胞生成素 (h EPO)基因组 DNA(g DNA)与 1.1kb牛 β-乳球蛋白 (BL G)基因的 5′端上游调控序列融合 ,构建了 p CMV- BL G- EPO- b GH poly A(p CBEA)乳腺定位表达载体。该载体与已构建的大鼠乳清酸蛋白 (WAP)基因 5′端上游调控序列和 h EPO融合基因 p WAP- EPO- WAP3′U TR(p WE3′)和 p CMV- WAP- EPO- b GH poly A (p CWEA )经脂质体包裹后 ,通过显微外科方法 ,经乳腺导管注入妊娠中后期家兔乳腺内 ,进行短暂表达。于家兔分娩后 1~ 2 5 d采奶 ,EL ISA检测乳汁中 EPO含量 ,3个载体均获得表达。表达水平从高到低依次为 p CWEA、p CBEA、p WE3′;表达量为 0 .116~ 0 .75 3μg/ L ,且表达一直持续整个泌乳期 相似文献
58.
用PCR技术鉴定犬传染性肝炎病毒强、弱毒株的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
根据Genebank中发表的犬传染性肝炎病毒 (ICHV)标准强毒株Glaxo和人工驯化的弱毒疫苗株CLL的保守序列间大小不同 ,按照引物设计的原则 ,设计合成了一对通用引物。该对引物可由ICHV强毒株扩增出 569bp的片段 ,而弱毒株可扩增出 2 4 4bp的片段。对PCR产物分别进行电泳、酶切和测序 ,证明PCR产物片段大小、酶切位点和核苷酸序列与设计的产物完全一致。正常DK细胞上清和犬传染性喉气管炎病毒 (CAV 2 )强、弱毒株细胞培养物均不能被该引物扩增 ,说明具有良好的特异性。其检测到的病毒量分别为 1 5TCID50 、 31TCID50 、说明该技术具有很高的敏感性。可用于ICHV强、弱毒株的鉴定和ICH的诊断 相似文献
59.
2012与2013年冬季,本实验室从长春市某宠物诊所连续收到疑似伪狂犬病毒感染的2份犬脑组织病料,接种Vero细胞,分离到2株病毒,经电镜观察、动物回归试验及PCR扩增鉴定为伪狂犬病毒,命名为JLCC-2012和JLCC-2013株。PCR扩增病毒g C基因序列,经遗传进化分析显示,2株PRV g C基因同源性为100%,且与国内犬源分离株BJ/RD、BJ/YT同源性分别为99.93%、100%,与猪源病毒分离株同源性为94.33%~100%,与国外猪源病毒分离株同源性为93.58%~94.81%。结果表明本研究分离株为与最近报道的犬源毒株系相近的流行毒株。 相似文献
60.
犬瘟热病毒H蛋白的原核表达及免疫原性的初步鉴定 总被引:1,自引:1,他引:0
本研究旨在对犬瘟热病毒(CDV)疫苗株H基因进行克隆及原核表达,并对产物的免疫原性做初步鉴定。根据犬瘟热病毒参考株Ondetstepoort的H基因序列,去除信号肽序列并选取其主要抗原表位设计引物,用反转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增目的片段;产物克隆至表达载体pET28b并转化宿主菌RosettaTM,优化诱导表达条件,纯化目的蛋白,并进行SDS-PAGE鉴定、Western blotting分析及间接酶联免疫吸附试验(ELISA);并将纯化的H蛋白免疫小鼠,进行中和试验检测抗体效价。结果显示,PCR扩增得到1113 bp DNA片段;在37 ℃、1.0 mmol/L IPTG诱导条件下可获得较高水平的表达;经SDS-PAGE鉴定,表达的H蛋白分子质量为42.38 ku,与预期值相符;Western blotting显示,在42.38 ku出现特异性目的条带;ELISA结果显示,表达的H蛋白能被抗CDV抗体识别,但与正常血清未发生非特异性反应;中和试验结果表明,血清中和抗体效价约为2-3.3。结果提示,H蛋白获得了正确表达,对CDV抗血清具有特异反应性,可作为实时检测动物机体免疫状况检测的候选抗原,为进一步研制犬瘟热抗体检测ELISA试剂盒和新型疫苗奠定基础。 相似文献