表达犬瘟热H基因重组伪狂犬病毒的构建及生物学特性研究     

李业伟  孙程龙  韩乃君  王颖  扈荣良 《安徽农业科学》2011,39(24):14899-14901,14974

[目的]构建表达犬瘟热Onderstepoort株H蛋白的重组伪狂犬病毒,并研究其生物学特性。[方法]通过RT-PCR方法获得On-derstepoort株H基因,插入pcDNA3.1（＋）建立好完整的真核细胞表达盒并将此表达盒亚克隆到转移载体p8AA上。在此基础上再将报告基因LacZ的表达盒插入转移载体,命名为p8AAZH。将p8AAZH与伪狂犬病毒（PRV）Bartha-K61株基因组共转染至BHK-21细胞中进行基因重组包装出毒,待细胞病变后收集病毒液。通过蓝色蚀斑筛选、PCR、电镜观察以及Western blot,筛选纯化重组病毒并鉴定目的基因的表达。同时在BHK-21细胞上测定重组病毒的生长曲线。[结果]获得了表达H蛋白的重组伪狂犬病毒,重组病毒与亲本Bartha-K61株的生长曲线、病变特征相一致。[结论]成功构建了表达犬瘟热Onderstepoort株H蛋白的重组伪狂犬病毒,H基因的插入不影响重组病毒的增殖特性,为犬瘟热活病毒载体疫苗的研制与开发打下了基础。  相似文献   

PRRSV GP5与GP4蛋白重组腺病毒的构建及其免疫特性研究     

蔡锦顺  李珈莹  马永和  扈荣良  张嘉保 《安徽农业科学》2010,38(10):5155-5157,5193

[目的]实现PRRSV GP5与GP4蛋白在同一载体中表达各自编码的蛋白,发挥GP5蛋白在体液免疫中的优势和GP4蛋白在信号转导中的作用。[方法]利用RT-PCR扩增出GP5与GP4基因,克隆到pIRESneo载体的多克隆酶切位点及新霉素磷酸转移酶位点中,用XhoⅠ和NruⅠ双酶切含GP5和GP4基因的表达盒,将此表达盒克隆到犬2型腺病毒E3区缺失性载体pPolyⅡ-CAV-2-△E3中,以AsⅠc和PmeⅠ双酶切进行鉴定。[结果]将构建好的重组腺病毒免疫小鼠,可以诱导产生较强的体液免疫应答（ELISA抗体和中和抗体）。[结论]该重组腺病毒具有较好的免疫原性,可为研制有效的亚单位疫苗奠定基础。  相似文献   

Scu—PA／t—PA基因cDNA在小鼠体内的表达     

李银聚  扈荣良 《河南科技大学学报(农学版)》1999,19(4):6-8

将Ｓcu－ＰＡ/t－ＰＡ两种基因cＫＮＡ所构建的表达载体pＳＶ２－ＳcuＰＡ,pcＤＮＡ３－ＳcuＰＡ及pcＤＮＡ３－tＰＡ混合后注入小鼠骨骼肌,观察了基因混合注射在小鼠体内 的表达情况。体外凝血试验结果显示,质粒注射后第３天凝血时间开始延长,约两周后凝血时间延长幅度最大。第１８天体内诱导产生ＤＩＣ,体外凝血时间试验组仍较空白对照组延长一倍以上,抗凝效果明显。相等基因水平下,混合基因注射表达水平和单独基因注射没有  相似文献   

组织型纤溶酶原激活剂cDNA真核表达质粒的构建与鉴定     

李银聚  扈荣良 《河南农业大学学报》1998,32(4):335-338,344

将组织型纤溶酶原激活剂基因ｃＤＮＡ经多次亚克隆插入到真核表达载体ｐＳＶＬ的ＳＶ４０启动子和ｐｃＤＮＡ３的ＣＭＶ启动子下游,构建了重组表达质粒ｐＳＶＬ－ｔＰＡ和ｐｃＤＮＡ３－ｔＰＡ。经酶切和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交鉴定,ｔ－ＰＡ基因的插向正确,可用于哺乳动物细胞和个体表达系统中表达。  相似文献   

组织型纤溶酶原激活剂cDNA在BHK21细胞中的表达     

李银聚  赖良学  扈荣良  岳军明  徐秀英  金宁一  殷震 《中国兽医学报》1999,19(3):241-244

将组织型纤溶酶原激活剂（ｔ－ＰＡ）基因ｃＤＮＡ经多次亚克隆插入到真核表达载体ｐＳＶＬ的ＳＶ４０启动子和ｐｃＤＮＡ３的ＣＭＶ启动子下游,构建了重组表达质粒ｐＳＶＬ－ｔＰＡ和ｐｃＤＮＡ３－ｔＰＡ。分别将这２种表达质粒以脂质体载体法转染ＢＨＫ２１细胞,ＥＬＩＳＡ检测结果表明,ｐＳＶＬ－ｔＰＡ和ｐｃＤＮＡ３－ｔＰＡ在哺乳动物细胞中能够表达,７２ｈ表达量分别是５２．８μｇ／Ｌ和７０．４μｇ／Ｌ。  相似文献   

非洲猪瘟实时荧光RPA诊断方法建立及应用     

张静远  缪发明  陈腾  李敏  扈荣良 《中国农业科学》2022,55(1):197-207

[目的]非洲猪瘟(African swine fever,ASF)自2018年首次暴发于我国沈阳后,迅速扩散至全国,对我国养猪业造成了沉重打击.研究针对其病原非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)建立一种快速核酸检测技术,为及时发现、准确处理ASF疫情提供一种快速诊断方法.[方法]...  相似文献   

狂犬病发病机理的研究进展     

李忠  扈荣良 《吉林畜牧兽医》2006,27(12):12-15

狂犬病是由狂犬病病毒引起的一种重要的人兽共患传染病,在人主要表现为急性、几乎不可逆转的脑脊髓炎,目前没有有效的治疗方法,病死率几乎100%。目前对狂犬病病毒感染和狂犬病发病机理的认识还很不透彻,但近年来的研究也取得了不少进展,主要涉及狂犬病病毒受体、神经细胞功能失调的原因和神经细胞凋亡机制、狂犬病病毒与机体免疫系统相互作用机制,狂暴型和麻痹型狂犬病的发病机制,这些都将为狂犬病的治疗研究起到推动作用。  相似文献   

伪狂犬病毒PK基因缺失转移载体的构建     

寇叙  龚倩  张守峰  刘晔  李清竹  扈荣良 《吉林农业大学学报》2006,28(5):574-576,590

以伪狂犬病毒TK/gI缺失疫苗株为亲本株,提取病毒基因组DNA,用限制性内切酶AscⅠ酶切基因组获得含完整PK基因的8.7 kb片段。将此片段克隆入pPolyⅡ载体的AscⅠ多克隆位点获得中间载体P8-AA。用限制性内切酶SacⅠ NdeⅠ缺失质粒P8-AA中PK基因的2 218 bp片段,在此缺失区插入已构建好的质粒pEGFP-CI-VP1中含绿色荧光蛋白基因和VP1基因的完整表达盒,构建出可用于同源重组的转移载体P8-EGFP-VP1。  相似文献   

转基因鸡研究进展     

扈荣良  殷震 《中国兽医科技》1994,24(2):17-19

  相似文献   

人Bcl-2乳腺定位表达转基因小鼠的建立   总被引：3，自引：1，他引：2  

赵君  任文陟  张守峰  刘彬  宇丽  扈荣良  殷震 《中国兽医学报》2002,22(5):430-432

以 p CAT、p WB和 p WC为原始质粒 ,构建 WAP启动子调控的 Bcl- 2乳腺组织特异性表达载体 p WBS。载体用Bgl +Sal +Pvu 酶切 ,回收 3.0 kb的基因片段 WAP- Bcl- 2 - SV40 Poly A,通过显微注射方法导入 C5 7BL / 6 J×DBA/ 2 JF1代小鼠受精卵的雄原核内。共注射 10 0 0枚卵 ,将存活的约 6 0 0枚卵分别移植至 2 9只假孕母鼠输卵管内 ,获得仔鼠 5 5只。PCR检测 ,阳性鼠 12只。Southern blot检测 ,阳性鼠 4只 ,其中公、母鼠各 2只 ,在饲养过程中 ,2只公鼠均意外死亡。Western blot证实 ,1只母鼠 Bcl- 2表达阳性 ,其 F1代的 40只小鼠中 ,有 18只呈 PCR阳性 ,其中母鼠8只 ,在 5个月的反复怀孕过程中 ,未观察到乳房有任何肿瘤或肿块的出现 ,证实 Bcl- 2单独在转基因鼠乳腺中表达不会引起转基因鼠乳腺癌的发生。  相似文献