肌注狂犬病病毒糖蛋白cDNA小鼠产生抗糖蛋白抗体   总被引：2，自引：0，他引：2  

扈荣良  杜坚  涂长春  章金钢  侯世宽  殷震 《中国兽医学报》1994,(2)

肌注狂犬病病毒糖蛋白ｃＤＮＡ小鼠产生抗糖蛋白抗体扈荣良，杜坚，涂长春，章金钢，侯世宽，殷震（农牧大学军事兽医研究所病毒室，长春１３００６２）早在１９７９年，Ｉｓｒａｅｌ等将感染性多瘤病毒基因组注入小鼠腹腔中，发现病毒基因组可在体内复制出感染性病毒颗粒...  相似文献   

利用三次手术冲卵方法提高供体兔胚胎数量的试验     

扈荣良  殷震 《兽医大学学报》1993,13(1):98-99,88

  相似文献   

猪繁殖与呼吸综合征病毒核蛋白单克隆抗体的制备和初步鉴定     

米立娟  吕宗吉  张守峰  刘晔  王永志  扈荣良 《吉林农业大学学报》2012,(6):661-666

克隆了猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)CC-11株的N基因全序列,将其克隆至原核表达载体pET28a,转化E.coliRosetta株后经0.5 mmol/L IPTG诱导,获得了高水平表达。对表达的N蛋白进行纯化,以50μgN蛋白免疫BALB/c小鼠,3次免疫后,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)进行融合,通过间接ELISA筛选,获得9B12、7C2、7C6共3株稳定分泌抗PRRSV-N蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,亚型鉴定结果分别为IgG2b、IgG1、IgG1亚型。通过Western blot分析和间接免疫荧光测定表明,3株单抗对PRRSV CC-11株、CH-1R和JXA1-R细胞毒以及4份临床疑似病料均发生特异性反应。  相似文献   

犬2型腺病毒E3区缺失性表达载体的构建及外源基因表达   总被引：2，自引：0，他引：2  

邱薇  扈荣良  夏咸柱  范泉水  黄耕  张守峰 《中国兽医学报》2003,23(1):11-14

为构建可用于同源重组或体外重组的犬腺病毒（canime adenovirus,CAV)E3区缺失性表达载体，在克隆的E3区两末端设计并合成了2对突变引物，在引物中分别引入1个BgⅠⅡ酶切位点，以PBE3质粒为模板，经2次点突变后，得到含有2个BgⅠⅡ位点的重组质粒PBE3^M。该质粒经BgⅠⅡ酶切后自连得到E3缺失的质粒PBE3△。在PBE3△质粒的BgⅠⅡ位点加入接头后，产生含多个酶切位点的质粒PBE3L，经相应的酶切鉴定，证明突变，缺失和接头连接正确后，利用PBE3L分别构建了带有和不带有外源性启动子的绿色荧光蛋白基因的重组表达质粒，并分别进行转染以检测其表达。结果显示，PBE3LCGFP质粒在转染DK细胞后，于36h即可观察到荧光，72-96h无明显差别，传3代后仍可见表达荧光的细胞；而PBE3LGFP质粒转染DK细胞后经检测无表达。结果表明，构建的E3区缺失性载体不能利用E3区自身的启动子进行目的的基因的表达，外源性启动子的加入是必要的。  相似文献   

牛BLG／tPA和牛as1酪蛋白／tPA基因在家兔乳腺中的暂时表达   总被引：5，自引：2，他引：3  

乔贵林  赵君  赖良学  金鼎  李银聚  扈荣良  殷震 《中国兽医学报》2001,21(6):576-578

为鉴定和筛选用于制备tPA转基因动物乳腺生物反应器的高效表达载体，试验分别以1.1kb牛b-乳球蛋白（BLG）基因，1．0kb牛asl酪蛋白基因5'端侧翼调控序列与1．7kb经过改造的人组织纤溶酶原激活剂（tPA)cDNA融合，构建了pBLG-PA2和pasl-PA22个乳腺定位表达载体。载体经酶切鉴定正确后，用脂质体包裹，并用毛细玻璃管经乳头管导入妊娠中后期的家兔乳腺，进行暂时表达。分别于家兔分娩后1－15d采奶，采用琼脂糖平板溶圈法测定乳汁中tPA的含量和活性。结果2个载体均获得表达，且pBLG-PA2表达水平高于pasl-PA2。pBLG-PA2和pasl-PA2在家兔乳汁中的含量分别为200－850μg/Lt 50-250μg/L。  相似文献   

猪瘟DNA疫苗临床免疫实验研究     

舒秀伟 李素孙金福  查云峰扈荣良郭焕成  涂长春 《农业生物技术学报》2006,14(6)

  相似文献   

非洲猪瘟病毒pS273R蛋白水解酶单克隆抗体制备   总被引：1，自引：0，他引：1  

张萌  刘英楠  谢振华  敖清莹  吕璐  于婉琪  金文杰  秦爱建  扈荣良  陈鸿军 《畜牧兽医学报》2021,52(3):839-844

本研究旨在制备非洲猪瘟病毒（ASFV） S273R蛋白的特异性单克隆抗体。本研究以原核表达的非洲猪瘟病毒重组S273R蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合获得杂交瘤细胞。结果显示：基于纯化的S273R蛋白建立的间接ELISA方法对杂交瘤细胞进行筛选和亚克隆,获得了4株可稳定分泌抗ASFV S273R蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并通过免疫印迹（Western blot）和免疫荧光试验（immunofluorescence assay,IFA）测定了其免疫特性。4株单克隆抗体亚类均为IgG1型,轻链均为κ链。本研究获得的非洲猪瘟病毒S373R蛋白单克隆抗体可为进一步研究ASFV pS273R的生物学功能及基因缺失毒株的鉴别诊断和疫苗开发提供技术储备。  相似文献   

猪腹泻综合征症状鉴别诊断     

徐慧娟  扈荣良  刘全  袁子国 《吉林畜牧兽医》2007,28(3):21-23

猪腹泻一直是困扰养猪业发展的重大难题。为了做到有的放矢地预防和治疗,建立正确的诊断是最关键的前提。由于导致猪腹泻病的因素较多,许多养猪场的管理者只追求饲料中抗生素的预防效果,而对真正的发病原因并不进行全面地分析,  相似文献   

狂犬病病毒口服疫苗株SRV9基因组全长cDNA的克隆及特性分析   总被引：7，自引：1，他引：6  

王铁东  张守峰  扈荣良  郭建顺 《中国兽医学报》2005,25(4):368-370

为了解狂犬病病毒口服疫苗株SRV9的基因序列与生物学特性的关系，明确其作为疫苗株的分子基础，通过反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)，获得了贯穿全基因组的3个重叠的cDNA片段。将获得的cDNA片段分别克隆至pMD-18T载体上并进行序列测定，对测序结果进行拼接得到全长cDNA序列(GenBank登录号：AF499686)。SRV9株与亲本株SAD B19全序列比较分析显示，二者同源性为99．8％，SRV9的变异主要发生在糖蛋白的编码区域，共有5个碱基发生改变．在转录酶蛋白编码区出现2个碱基的改变，其他蛋白编码基因均未出现突变；氨基酸比较分析显示，在转录酶蛋白氨基酸序列发生2个改变；糖蛋白成熟肽的第34位、292位、333位和338位氨基酸分别发生了Gly→Glu。Ala→Thr，Arg→Ser，Ile→Val的改变，其中第34位氨基酸位于第1抗原区，第333位和338位氨基酸位于第1抗原区。这些抗原位点的突变可能是引起病毒蚀斑特性改变、毒力降低和免疫原性及安全性提高的重要原因。  相似文献   

狂犬病快速诊断方法的建立和应用   总被引：4，自引：2，他引：2  

曹亮  扈荣良  张守峰 《中国预防兽医学报》2006,28(3):344-346

根据狂犬病病毒核蛋白基因保守区序列设计1对引物，建立了用于狂犬病病毒特异性核酸检测的RT-PCR技术。该技术可从狂犬病病毒CVS株、8202株和SRV9株的含毒细胞培养物及鼠脑组织中。扩增出443bp的核酸片段，检出核酸的敏感性约为3Pg。对30份不同种动物脑组织的检测结果与小鼠脑内接种试验（MIT）的测定结果完全吻合，但前者可在3h内直接对组织匀浆进行诊断，具有快速、简便和敏感的优点。  相似文献