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31.
半巢式-RT-Realtime PCR检测李痘病毒 总被引：1，自引：0，他引：1
李痘病毒(Plum pox virus,PPV)是我国重要的植物检疫性有害生物。本研究根据PPV中CP基因(coat protein gene)的保守序列,设计了3条PCR引物和1条TaqMan探针,建立了半巢式-RT-RealtimePCR检测PPV的方法。该方法有机地结合了巢式PCR和实时荧光PCR技术;3条引物形成的2套PCR体系相互验证,有效提高了结果的准确性;荧光探针有效提高了检测的灵敏度。实验结果表明,本方法准确、灵敏、简便、快速,检出低限可达37fg/μL植物总RNA。 相似文献
32.
PCR和Dig—cRNA探针检测番茄环斑病毒 总被引：12，自引：0，他引：12
利用根据ToRSV加拿大悬钩子株系核酸序列设计、合成的寡核苷酸引物进行PCR扩增试验,能成功地扩增ToRSV悬钩子株系的目标片段,但不能扩增苹果、樱桃株系的目标片段。 而ToRSV苹果株系的克隆pS_(64),经EcoRI酶切,再分别用~(32)P—UTP、Dig—11—UTP和SP_6RNA多聚酶转录出~(32)P标记、Dig标记的cRNA探针后,不仅能有效地检测出ToRSV的苹果株系,而且能有效地检测樱桃株系和悬钩子株系。~(32)P与Dig—标记的探针灵敏度基本相同,而Dig标记的探针无放射性,可以长期保存,多次使用,灵敏、准确、安全、经济,是值得推广应用的检疫新方法。 相似文献
33.
34.
35.
应用等位基因特异性PCR(allele-specific PCR,AS-PCR)技术,建立了大豆猝死综合症(sudden death syndrome of soybean,SDS)病原菌北美种Fusarium virguliforme与其近似种Fusarium phaseoli(菜豆根腐病菌)的鉴别方法。针对翻译延长因子(EF-1α)基因上的3个SNP(单核苷酸多态性)位点,参照引物设计原则和等位基因特异引物(allele-specific primer,ASP)的要求设计了1对引物Fsg-α-1/2,能特异地扩增F.virguliforme,产生327 bp的电泳条带。另外,根据ITS区序列设计了1对通用引物Fu1/2,能扩增F.virguliforme和F.phaseoli,产生452 bp的电泳条带。本实验在传统的AS-PCR基础上进行改进,引入Fu1/2作为阳性质控引物,将ASP的特异性与双重PCR的严谨性相结合,建立了简便可靠的SDS病原菌鉴定方法。 相似文献
36.
河北省西瓜病毒病普查及毒原检测 总被引：4，自引：1，他引：3
据报道 ,侵染葫芦科作物的病毒共计 38种 ,9个暂定种和 1种类病毒 ,国内葫芦科作物病毒的种类为9种 ,为害河北等地葫芦科作物的病毒有 7种。侵染西瓜的病毒约 15种 ,其中重要的毒原有ＷＭＶ - 2、ＣＭＶ、ＴＮＶ、ＳｑＭＶ、ＭＭＶ和ＭＶＮＶ。侵染我省西瓜的病毒种类及发病率尚不清楚 ,我们对省内各西瓜主产区西瓜病毒病发生情况进行了普查 ,对毒原种类进行了检测 ,为防治西瓜病毒病提供理论依据。1 材料和方法1 1 西瓜病毒病病叶的采集方法1999～ 2 0 0 0年在石家庄、新乐、唐山、沧州、衡水、廊坊等地于露地西瓜生长中后期用新塑料袋采… 相似文献
37.
黄瓜花叶病毒甜菜分离物的分离鉴定 总被引：2，自引：0，他引：2
从新疆石河子地区春季采种甜菜和夏播母根用甜菜上分离到3个病毒分离物,代号为石-B-2、石-B-5和石-B-D,自然感染甜菜引起叶片黄色花叶、扭曲、皱缩和植株严重矮化。病毒粒体球状、直径28~30 nm、均含有分子量约为2 9k D外壳蛋白、3种相同的较大片段的双链RNA (即3400 bp的RNA1、3100 bp的RNA2、2300 bp的RNA3)和片段大小约400 bp的小RNA,石-B-2和石-B-D具有1100 bp的RNA4,在ELISA和琼脂双扩散试验中,3个分离物均与CMV-83抗血清有特异反应,初步认为这3个球状病毒分离物属于CMV,但它们具有狭窄的寄主范围,不感染心叶烟、蔓陀罗、番茄,在寄主反应、双链RNA4和卫星RNA的大小上明显不同于国内外报道的CMV株系或分离物,同时说明侵染甜菜的CMV可能存在着株系分化。 相似文献
39.
基因突变和单核苷酸多态性分析是确定生物性状与某种遗传变异的关系、探讨生物物种内基因的差异、了解生物种间亲缘和进化的关键技术，对生物群体遗传学、生物分类学研究都有着重要的理论意义和实用价值。对近20年来基因突变和单核苷酸多态性检测技术及应用的研究进展进行了全面概述，特别对20世纪90年代发展起来的几种最新技术进行了详细介绍，并展望了这些技术在农业上的应用前景。 相似文献
40.
对桔小实蝇Bactrocera dorsalisHendel在中国的适生性进行了研究,结果表明,该虫的世代发育起点温度和有效积温分别为10.675 7℃、501.724 0日度.根据桔小实蝇的致死温度、有效积温和生物气候相似距,构建了桔小实蝇适生性分析计算机模型.用中国670个气象站30年的气候资料运行该模型,将桔小实蝇在中国的定殖风险区划分为高度危险区、危险区、轻度危险区和安全区,分布北界为(30±2)°N,适生区面积占全国的31.64%,1年发生3~11代,以4~8代为主. 相似文献