猫传染性腹膜炎病毒N蛋白在昆虫细胞-杆状病毒系统中的表达与鉴定     

李双星  刘业兵  柳方远  吉婧  杜吉革  李倩琳  朱真  李启红  陈小云  印春生 《中国畜牧兽医》2021,(1)

本研究旨在利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统表达猫传染性腹膜炎病毒(Feline infectious peritonitis virus,FIPV)N蛋白,并制备抗该蛋白的多克隆抗体,用于FIPV临床抗原/抗体诊断及N蛋白功能研究。参考GenBank中FIPV的N基因序列,选择FIPV毒株N基因(登录号:KC461235.1),并对该N基因进行密码子优化、基因合成,酶切后将N基因连接至pFastBac1载体,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,经氨苄西林抗性筛选阳性克隆,提取质粒经酶切及测序鉴定正确后,转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,经蓝白斑筛选及PCR鉴定后,最终成功构建重组杆状病毒质粒Bacmid-N,转染Sf9细胞包装杆状病毒,于28℃温箱培养4 d后收集感染Sf9细胞上清,并通过镍离子亲和层析纯化获得重组N蛋白。经SDS-PAGE及Western blotting鉴定结果表明,本研究成功利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统表达出大小约为51 ku的FIPV重组N蛋白。将该蛋白与弗氏佐剂按一定比例混合后,免疫6周龄BALB/c小鼠。用间接ELISA方法检测小鼠血清抗体效价可达1∶102400;利用Western blotting和间接免疫荧光试验对N蛋白多克隆抗体进行检测分析,结果表明,真核表达的重组蛋白免疫原性良好,多克隆抗体具有良好的反应原性,可特异识别FIPV感染细胞。本研究为FIPV抗原/抗体诊断试剂盒的研发奠定了基础。  相似文献   

禽流感灭活疫苗(H5N2,N28株)和重组禽流感灭活疫苗(H5N1,Re-1株)免疫鸡和鸭后抗体消长规律的比较研究   总被引：7，自引：0，他引：7  

雷彩侠  李俊平  李启红  曲鸿飞  夏业才 《中国兽药杂志》2006,40(2):9-13

禽流感灭活疫苗（H5N2，N28株）和重组禽流感灭活疫苗（H5N1，Re-1株）各3批，以重组禽流感灭活疫苗（H5N1，Re．1株）推荐的免疫程序和剂量分组免疫5周龄SPF鸡和5周龄非免疫鸭。免疫后定期采集血样，测定血清HI抗体效价，分别计算各免疫组鸡和鸭HI抗体效价的几何平均数，绘制各批疫苗免疫鸡和鸭后HI效价消长曲线，并分别对两种疫苗免疫鸡和鸭后各时期的HI抗体效价进行t检验。结果为：①免疫后1周，各免疫组均未测到HI抗体；②鸡免疫后4～5周，HI抗体效价达到峰值1：2^6.0～1：2^7.0，随后2周下降相对较快，平均每周下降0．3—0．7个滴度，之后HI抗体效价缓慢下降，直到试验结束，平均每周下降0．04～0．17个滴度；③鸭首次免疫后第3周各免疫组HI抗体效价达到1：2^4.0～1：2^5.3，加强免疫（首次免疫后第3周）后，HI抗体效价迅速升高。加强免疫后第3周（首次免疫后第6周）HI抗体效价达到最高值1：2^10.6-1：2^11.7，且在峰值水平维持3周，之后1周下降相对较快，平均下降1．2～2．7个滴度，然后缓慢下降，到首免后24周平均每周下降0．28～0．39个滴度，24周除049H5N2批疫苗免疫组外，其他各批免疫鸡HI抗体效价均小于1：2^4.0；④免疫后3周内，两种疫苗刺激鸡产生的HI抗体效价均高于相应批次疫苗免疫鸭产生的HI抗体效价，免疫后第2周相差1．9—2．3个滴度，免疫后第3周相差1．6～2．0个滴度；⑤两种疫苗免疫鸡和鸭后，各时期HI抗体效价t检验差异均不显著（P〉0．05）。以上结果表明，两种疫苗免疫SPF鸡和非免疫鸭后，HI抗体效价消长规律一致，两种疫苗免疫后各个时期的HI抗体效价在统计学上差异均不显著（P〉0．05）。  相似文献   

不同pH计和试纸对马立克氏病冻干疫苗稀释液pH值的测定结果     

李慧姣  孙荣改  李启红  陆友龙 《中国兽药杂志》2000,(1)

本试验采用不同pH计和不同的精密试纸对国内外不同企业生产的马立克氏病冻干疫苗稀释液进行了pH值的测定,并进行了稀释疫苗后对疫苗的稳定性试验,目的是使马立克氏病冻干疫苗的稀释液检验方法标准化。1　材料和方法1.1　马立克氏病冻干疫苗和稀释液　由国内外某企业和本所...  相似文献   

灭毒净对鸡新城疫病毒和传染性法氏囊病病毒的杀灭试验     

张存帅  李启红  李慧姣  李孝欣  缪从容 《中国兽药杂志》2001,35(2):60-61

采用鸡胚接种法对灭毒净杀灭鸡新城疫病毒和传染性法氏囊病病毒的效能进行了试验，结果100倍稀释的灭毒净分别与含10^3.0ELD50/0.1ml的IBDVB87毒液和含10^5.0ELD50/0.1ml的NDVI系毒液等量混合，室温作用30min可以完全将病毒杀灭。  相似文献   

昭通市昭阳区苦荞产业发展探讨     

张明先  李德全  李启红 《现代农业科技》2013,(6):321-322

通过对昭通市昭阳区苦荞生产、加工现状的分析,指出产业发展前景、优势以及存在的问题,提出进一步发展苦荞产业的思路和对策,以为大力推进苦荞麦产业发展提供借鉴。  相似文献   

昭通市昭阳区玉米套种秋马铃薯栽培技术     

李启红  马惠 《现代农业科技》2012,(20):48

介绍昭通市昭阳区马铃薯玉米套种高效立体复种栽培模式的主要技术措施,包括确定适宜品种、精选种薯、种薯处理、播种、密植、施肥、田间管理和病虫害防治,以促进农业产业结构调整、发展多熟种植、增加农民收入。  相似文献   

氮肥不同基追比例对水稻产量和氮素吸收利用的影响   总被引：1，自引：0，他引：1  

李启红  贺双明  刘琼峰  李明德 《湖南农业科学》2012,(13):56-58,61

以水稻"盛湘1号"为供试材料,在基础地力和施氮量相同的条件下,采用大田试验研究了氮肥不同基追比例对早稻产量和氮肥利用率的影响。结果表明:足够的分蘖肥能够通过促进植株分蘖数增多来提高早稻产量,平衡施用基-蘖-穗-籽肥则可通过增加有效穗数和籽粒数来保证水稻的高产;提高分蘖肥比例和穗肥比例以及平衡施用基-蘖-穗-籽肥均可以提高氮肥农艺利用率、氮肥生理利用率、土壤氮素依存率,但对氮肥偏生产力的影响不显著,与氮肥表观利用率呈现出负相关;氮肥不同基追分施比例处理间各时期植株体内氮素积累量差异显著,分蘖期、孕穗期和抽穗期是水稻吸收氮素养分的高峰期。  相似文献   

禽腺病毒琼扩抗原制备方法的研究     

张中秋  肖彧芳  李启红 《中国预防兽医学报》1988,(3)

用鸡腺病毒Ⅰ型 Ote 株于尿囊腔接种9日龄鸡胚,直接采用感染鸡胚尿囊液原液制备琼扩反应抗原.用该抗原对人工感染腺病毒鸡群抗体的检测取得了满意的结果.对14个鸡场的15群鸡进行了调查.其中6群为腺病毒抗体阳性,阳性率为9～40%。  相似文献   

实验动物设施常用消毒剂的中和剂验证试验     

张莹辉  姚文生  康凯  陈小云  李启红  杜吉革  朱真  薛麒  赵俊杰  孙鑫鹏  印春生 《黑龙江畜牧兽医》2019,(21)

为了筛选出针对动物实验设施的几种常用消毒剂的中和剂,试验依据2002年版《消毒技术规范》中的中和剂中和效果验证方法,每组消毒剂设置相应的中和剂,设置6个试验组进行验证试验。结果表明:75%乙醇溶液可以选择含1%吐温80的PBS溶液作为中和剂,84消毒液可以选择含4%硫代硫酸钠的PBS溶液作为中和剂,苯扎溴铵溶液可以选择含1%吐温80、0. 5%卵磷脂的PBS溶液作为中和剂,戊二醛溶液可以选择含1%甘氨酸、0. 5%吐温80的PBS溶液作为中和剂。使用0. 5%或2%硫代硫酸钠溶液作为过氧乙酸和过氧化氢消毒液的中和剂时未能完全达到中和试验结果的要求。  相似文献   

重组产气荚膜梭菌ε毒素三点突变体的融合表达及其免疫活性分析     

杜吉革  张秀坤  朱真  薛麒  李启红  印春生  彭小兵  王磊  姚文生  康凯  陈小云 《中国兽药杂志》2018,52(7):27-33

为获得并评价重组产气荚膜梭菌ε毒素(ETX)三点突变体蛋白的毒力及免疫活性,对已知的D型产气荚膜梭菌ETX编码基因进行优化设计,同时引入包括第30和196位酪氨酸突变为丙氨酸,及第106位组氨酸突变为脯氨酸共3个氨基酸突变,并在该基因5'端添加Th细胞表位(T)和鞭毛蛋白(flagellin)N末端编码序列,经人工合成获得基因片段GTFNETXm3。随后,将该基因片段克隆至原核表达载体p ET30a-(+),转染BL21(DE3)菌诱导表达、纯化,从而获得重组蛋白,进而利用Western blot方法检测重组蛋白与D型产气荚膜梭菌抗血清的反应性,并检测其对犬肾细胞系(MDCK细胞)及小鼠的毒力。最后,将重组蛋白与Montanide ISA 201佐剂混合乳化制备疫苗,免疫4只健康家兔,根据《中华人民共和国兽药典》(2015年版)规定的方法检测一免及二免后兔血清的中和抗体效价。结果显示,重组蛋白主要以包涵体的形式存在,且能与D型产气荚膜梭菌毒素抗血清反应;100μg/m L的重组蛋白未显示细胞毒性;6.25 mg/kg剂量的重组蛋白对小鼠无致死性;每毫升的一免抗血清可中和80~120个最小致死量(MLD)、二免抗血清可中和750~1100个MLD的D型产气荚膜梭菌毒素;用1个MLD的D型产气荚膜梭菌毒素攻毒后,对照组家兔4/4死亡,免疫组家兔4/4保护。试验表明,产气荚膜梭菌ETX三点突变体的毒力基本消失,且保留了良好的免疫原性,是D型产气荚膜梭菌病基因工程亚单位疫苗的理想候选抗原蛋白。  相似文献