猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒一步法双重荧光RT-PCR检测方法的建立及应用     

于新友  李天芝 《中国动物检疫》2018,35(4):88-91

为建立猪瘟病毒(CSV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)现场快速鉴别检测方法,参照GenBank中CSV和PRRSV特异性基因序列,设计特异引物和TaqMan探针,通过优化反应条件,建立了检测CSV和PRRSV的一步法荧光RT-PCR方法,并验证了该方法的特异性、敏感性、重复性。结果显示,该方法检测CSV和PRRSV的灵敏度分别可达0.25和1.99 TCID_(50)/100μL,对猪细小病毒(PPV)、猪乙型脑炎病毒(JEV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)的检测结果均为阴性。本试验建立的TaqMan一步法荧光定量RT-PCR检测方法,可对CSV和PRRSV进行快速诊断,适合现场检测。  相似文献   

鸭圆环病毒检测方法研究进展     

于新友  张颖  李天芝 《中国动物检疫》2018,35(6):79-82

鸭圆环病毒病是由鸭圆环病毒感染引起的一种免疫抑制性疾病。本文综述了鸭圆环病毒血清学和病原学检测方法的研究进展,主要包括间接免疫荧光试验、酶联免疫吸附试验、核酸探针技术、普通PCR、限制性片段长度多态性聚合酶链反应、套式PCR、多重PCR、荧光定量PCR和环介导等温扩增技术等,并对各种方法的优缺点进行了汇总分析,以期为该病的诊断与防控工作提供参考。  相似文献   

枯草芽孢杆菌的生物学功能及其在养猪生产中的应用研究进展     

于新友  李天芝  沈志强 《猪业科学》2016,(4):44-45

枯草芽孢杆菌具有调节肠道微生态平衡、促进畜禽对营养物质的消化吸收和增强免疫等作用,目前已在畜禽生产中广泛应用,文章就枯草芽孢杆菌的生物学功能以及在养猪生产中的应用研究作一综述。  相似文献   

猪流感的流行现状及分子生物学诊断方法研究进展   总被引：1，自引：0，他引：1  

于新友  李天芝 《猪业科学》2016,(12):88-91

猪流感是由猪流感病毒引起的一种急性、高度接触性猪呼吸道传染病,给养猪业造成很大的危害,猪流感病毒也可感染人类,威胁人类的生命健康。文内通过综述我国猪流感的流行现状及分子生物学诊断方法的研究进展情况,以期对猪流感的诊断和防控工作提供参考。  相似文献   

非洲猪瘟病毒和猪圆环病毒2型双重SYBR Green Ⅰ荧光PCR检测方法的建立     

于新友  李天芝  王金良  姚春阳  沈志强 《中国兽医学报》2022,(5):862-866

为建立同时检测非洲猪瘟病毒(ASFV)和猪圆环病毒2型(PCV2)核酸的荧光PCR方法,试验根据GenBank中ASFV的p72基因和PCV2的ORF1基因序列,分别设计特异性引物,通过对加样体系和扩增程序的优化,建立了检测ASFV和PCV2的双重SYBR GreenⅠ荧光PCR方法,并对该方法的特异性、敏感性、重复性进行评价,最后对收集的临床样品进行检测。结果表明,最终确立的20μL反应体系中各引物最佳添加量为：F1 0.7μL、R1 1.0μL、F2 0.8μL和R2 1.5μL;优化后的扩增反应程序为：95℃预变性3 min; 94℃变性5 s, 54℃退火20 s (此处收集荧光),40个循环。该方法具有很好的特异性,不与其他常见猪病原体发生交叉反应。检测ASFV和PCV2的灵敏度分别可达5.6 copies/μL和3.2 copies/μL,T_m值的批内和批间变异系数均不高于1.0%,对14份临床样品的检测结果与参比方法一致。本研究所建立ASFV和PCV的双重SYBR GreenⅠ荧光PCR方法敏感性高,特异性好,可用于临床2种疾病的快速检测。  相似文献   

兔多杀性巴氏杆菌和支气管败血波氏杆菌双重PCR检测方法的建立及应用     

于新友  李天芝  王金良  沈志强 《中国养兔杂志》2015,(2):15-18

根椐Gen Bank公布的兔多杀性巴氏杆菌16S r RNA和支气管败血波氏杆菌fim N基因序列,设计两对引物,在建立两种细菌单项PCR检测方法的基础上,优化双重PCR反应条件,建立了两种细菌的双重PCR检测方法,用这两对引物对同一样品中的兔多杀性巴氏杆菌、支气管败血波氏杆菌核酸为模板进行双重PCR扩增,结果可同时扩增兔多杀性巴氏杆菌和支气管败血波氏杆菌的258bp和449bp的特异性片段,而对其他4种兔病原菌的扩增结果均为阴性。敏感性测定结果表明,对兔多杀性巴氏杆菌和支气管败血波氏杆菌的最低核酸检出限分别均为1pg。通过对78份临床病料检测,将建立的双重PCR技术和单项PCR方法进行对比验证,结果显示,两者的总符合率为100%。表明建立的双重PCR检测方法,具有特异、快速、准确的特点,可用于对这兔多杀性巴氏杆菌和支气管败血波氏杆菌的同时检测和鉴别诊断。  相似文献   

副猪嗜血杆菌山东分离株的鉴定及药敏试验     

李天芝  于新友  王艳  苗立中  沈志强 《猪业科学》2015,(3):77-79

对山东某猪场送检的40日龄的病猪分离病原菌,对分离出的细菌进行形态学观察、生化试验、PCR鉴定、小鼠致病性试验和药敏试验。染色镜检、生化试验结果及PCR试验证实成功分离到1株副猪嗜血杆菌,致病性试验结果表明,该菌株对Balb/c小鼠具有一定的致病性,药敏试验结果表明,该菌株具有多重耐药性,该菌株的分离鉴定为自家灭活菌苗的制备提供了候选菌株。  相似文献   

猪圆环病毒分子生物学诊断技术及基因工程疫苗的研究进展   总被引：1，自引：1，他引：0  

李天芝  于新友  沈志强 《猪业科学》2015,(9):94-95

文章论述了猪圆环病毒分子生物学诊断方法,包括常规PCR方法、套式PCR方法、多重PCR方法、PCRRFLP方法、荧光定量PCR方法、环介导等温扩增技术等,并就其基因工程疫苗方面的研究进行了着重阐述。  相似文献   

猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪流行性腹泻病毒双重TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立     

于新友  李天芝  王玉茂  修晓娜 《黑龙江畜牧兽医》2019,(19)

为了建立快速、简便且能同时检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)和猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)的方法,试验根据GenBank中已登录的PRRSV ORF7基因序列和PEDV N基因序列,设计2对特异性引物和2条TaqMan探针,通过优化扩增条件建立检测PRRSV和PEDV的双重TaqMan实时荧光定量RT-PCR方法,同时还进行了特异性、敏感性、重复性试验以及临床样品检测。结果表明:最终确立的20μL扩增体系中各引物和探针的加样量分别为:PRRSV-F 0.8μL,PRRSV-R 0.6μL,PRRSV-P 0.5μL;PEDV-F 1.2μL,PEDV-R 1.0μL,PEDV-P 0.7μL。(优化后的最佳扩增程序为:50℃反转录6 min;95℃预变性1 min;95℃变性10 s,55℃退火10 s,72℃延伸10 s,共40个循环)。检测PRRSV和PEDV的敏感性可分别达到1.05 TCID_(50)/100μL和3.16 TCID_(50)/100μL,该方法特异性好,不与其他常见猪病病原体发生交叉反应,批内变异系数和批间变异系数均不高于2.0%。用该方法对234份临床样品进行检测,PRRSV阳性样品15份, PEDV阳性样品20份,检出率高于常规RT-PCR方法。说明试验建立的双重TaqMan实时荧光定量RT-PCR方法敏感性高,特异性好,可同时准确、快速检测PRRSV和PEDV。  相似文献   

非洲猪瘟病毒分子生物学检测方法研究进展     

李天芝  于新友 《猪业科学》2019,36(10):46-49

非洲猪瘟病毒感染猪后可引起猪高热、皮肤和内脏器官出血,死亡率可达100%。2018年8月我国报道首例非洲猪瘟病例,目前除台湾外全国各省份均有发病,给我国养猪业造成的损失惨重。分子生物学方法是确诊非洲猪瘟的最快速、有效和实用的方法,文章综述了6种常用检测方法,为非洲猪瘟的确诊和防控工作提供了参考,希望对养猪业有所帮助。  相似文献