1株基因Ⅶ型新城疫病毒的生物学特性研究及全基因组序列分析     

孙化露  毕云英  于泽坤  李思菲  刘阳  李明义  崔现兰 《中国畜牧兽医》2018,45(10):2840-2848

为研究当前流行的新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）基因型、致病性及其与传统新城疫病毒疫苗株（La Sota等）的核苷酸差异,试验从某发病鸡场病死鸡体内分离到1株疑似NDV毒株,经红细胞凝集试验（HA）和红细胞凝集抑制试验（HI）初步确定为鸡源NDV。参照GenBank公布的NDV F基因部分片段（登录号：JF950510.1）设计1对引物,通过RT-PCR技术扩增分离株的F基因并克隆、测序,测序结果与NCBI中NDV F基因序列进行比对,构建系统进化树并分析其基因型;通过测定鸡胚平均致死时间（MDT）、1日龄鸡脑内致病指数（ICPI）和6周龄鸡静脉致病指数（IVPI）判断病毒致病性;参照GenBank公布的NDV全基因组序列（登录号：JF950510.1）设计9对引物对分离株进行全基因组序列测定,并分析其基因组结构。结果表明,RT-PCR扩增得到F基因长约500 bp,基于F基因构建的系统进化树显示分离株为基因Ⅶ型NDV;MDT、ICPI和IVPI分别为52.8 h、1.675和2.46,表明分离株属于强毒株。全基因组序列分析显示,分离株全基因组全长15 192 bp,与传统La Sota株基因组相比,序列多出6个碱基,核苷酸序列同源性82.8%。本研究成功分离到1株基因Ⅶ型NDV强毒株,且与传统疫苗毒株La Sota的核苷酸序列同源性差异较大。  相似文献   

禽流感(H5、H9亚型)二价油乳剂灭活疫苗试验研究   总被引：3，自引：0，他引：3  

赵雪丽  李明义  范根成 《上海畜牧兽医通讯》2005,(2):22-24

禽流感(AI)是由A型流感病毒引起的一种禽急性、接触性、烈性传染病。病毒广泛存在于野生禽、鸟类和人工饲养的禽类中,国际兽医局(OIE)将其列为动物的A类传染病。1878年,该病首次在意大利暴发流行,当时称之为“鸡瘟”。禽流感引起的损失主要有：高致病力毒株致鸡大量死亡,非高致病力毒株引起产蛋量下降,免疫功能障碍而继发细菌或病毒的感染。1994年,我国广东首次报道了H9N2亚型禽流感的分离,自此之后中国大陆的禽流感日益受到世人的关注。  相似文献   

山东和河北部分地区四种猪病的血清学调查     

李晓林  王相芹  刘杉杉  刘阳  李明义 《中国动物检疫》2015,32(9):4-6

[目的]了解山东和河北部分地区猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征、猪伪狂犬、猪圆环病毒病的发病情况。[方法]用间接ELISA方法对144个规模化养猪场的2 008份猪血清进行抗体水平检测。[结果]两省猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征、伪狂犬中和（gB基因）、伪狂犬病毒野毒感染（gE基因）、圆环病毒病的抗体平均阳性率分别为：89%~92%、87%、92%~95%、33%~40%和76%。各阶段猪群的猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征、猪伪狂犬中和（gB基因）抗体阳性率普遍较高,都在80%以上;伪狂犬野毒（gE基因）抗体阳性率在14%~90%之间,其中流产母猪的抗体阳性率最高,为90%;1~4周的仔猪圆环抗体阳性率为76%（152/199）,4~10周的保育猪的抗体阳性率最低,为67%（327/489）。[结论]这四种猪病的抗体阳性率较高,免疫猪基本能得到保护,但在个别猪场仍有发病,可能与免疫失败、新流行毒株的出现、继发感染等因素有关。提示各大猪场要针对实际情况,制定出严格的综合性防控措施。  相似文献   

鸡肾型传染性支气管炎病毒SF弱毒株的鉴定     

杨祥福  朱岩丽  李明义 《山东畜牧兽医》2009,30(9):1-3

针对IBV地方分离株SF株弱化毒进行鉴定,经特异性试验证实,SF株致弱毒能完全被本毒制备的血清所中和;血清交叉中和试验证明,SF株毒与Ark99株有高度的交叉保护;采用E1、E5代弱化毒接种SPF10日龄鸡胚,测定毒价EID50分别为10-6.88/0.1ml,10-6.68/0.1ml;同居感染试验未观察到健康鸡组织器官病变;连传SPF易感雏鸡5代无毒力返强;攻毒保护试验证实3000个EID50以上的免疫量使免疫雏鸡能耐受强毒攻击,达到完全保护;理化试验表明,该毒株对热、碱的耐受性较差,对乙醚、氯仿有机溶剂较为敏感,对酸有一定的耐受性;试验数据说明,SF株IBV已被成功弱化,抗原性好,毒力稳定、对雏鸡安全,不会产生毒力返强,并能产生较强的免疫力,是一株理想的弱毒苗株.  相似文献   

荧光定量RT-PCR检测鸡α干扰素mRNA方法的建立   总被引：2，自引：0，他引：2  

雷小文  岳华  李明义  汤承 《河南农业大学学报》2009,43(3)

根据鸡IFN-α基因序列设计引物,建立了定量检测鸡IFN-α基因表达水平的荧光定量RT-PCR(RRT-PCR)方法,并对新城疫病毒(NDV)感染的鸡法氏囊、胸腺中IFN-α mRNA表达水平进行了检测.结果表明,该方法对鸡IFN-α,mRNA的扩增效率为103.99%,线性范围为102～10-9,相关系数为0.996,最低能检出73拷贝/反应;熔解曲线分析RRT-PCR产物在(88.6±0.2)℃出现单特异峰;特异性评价结果显示,本方法只扩增鸡IFN-αmRNA,不与常见禽源病原微生物发生交叉反应.对NDV感染鸡的法氏囊、胸腺中IFN-α mRNA表达水平的定量检测结果表明,IFN-α mRNA在感染后36,48 h显著升高.本研究建立的检测鸡IFN-α mRNA表达水平的RRT-PCR方法具有敏感性高、稳定性好和特异性强的特点,为鸡IFN-α mRNA的精确定量提供了新方法.  相似文献   

H5N1亚型禽流感病毒和新城疫病毒感染鸡胚成纤维细胞IFN-β基因的动态表达     

高艳  杨松沛  雷小文  岳华  李明义  汤承 《中国畜牧兽医》2010,37(3)

根据鸡β-干扰素(ChIFN-β)基因保守序列设计引物建立了检测鸡IFN-βmRNA表达水平的荧光定量RT-PCR(RRT-PCR)方法,并对H5N1亚型禽流感病毒(AIV)和新城疫病毒强毒株(vNDV)感染后3、6、12、24、30 h的鸡胚成纤维细胞(CEF)中IFN-βmRNA表达水平进行了检测。结果显示,建立的RRT-PCR特异性好,对鸡IFN-βmRNA的扩增效率为94.18%,线性范围为10-8~10-3,相关系数为0.992,最低能检出48拷贝/反应。AIV在感染CEF后6、12 h显著抑制IFN-βmRNA的表达,24 h开始诱导IFN-βmRNA表达,30 h时IFN-βmRNA水平显著升高;vNDV在感染CEF后的24 h内显著抑制IFN-βmRNA的表达,30 h时则显著诱导IFN-βmRNA表达。本试验结果为进一步研究H5N1和NDV与机体的相互作用提供了有价值的信息。  相似文献   

枣酒加工制作工艺     

李明义 《农村百事通》2009,(24):22-22

枣是一种可作药用和营养价值极高的果品．品种繁多．如果按果形分类，可分为小枣、长枣、圆枣、扁圆枣和葫芦枣五种。其中，量多质优、应用价值较高的有20多个品种．具有独特的营养和药用价值。如沧州金丝小枣．含糖量76％～88％．含酸0．2％～1．6％．每100克含维生素C397毫克，比苹果、梨、葡萄、桃、柑橘、柠檬等水果的维生素C含量都高．  相似文献   

硅钙镁复合肥对烤、晒烟综合效应的研究     

金永赞  金光春  李虎林  郑东虎  李明义 《延边大学农学学报》1994,(2)

氮、磷、钾肥在适量的条件下，烤、晒烟分别施硅钙镁复合肥４００ｋｇ／ｈａ的效果最佳。烤、晒烟产量、产值分别提高１７．５％和１６．９％，净收入分别为９８０元／ｈａ、７１２．５０元／ｈａ。烤晒烟施硅钙镁复合肥能增加叶面积，提高抗病力，协调烟叶化学成分，提高烟叶品质。  相似文献   

H9亚型禽流感病毒HA基因的重组禽痘病毒构建     

吴美芹  杨宾宾  孙强强  单虎  李明义 《中国动物检疫》2009,26(3):31-34

本试验构建了H9亚型禽流感病毒HA基因禽痘病毒转移载体,经转染、蓝斑克隆、筛选和纯化,获得了遗传性状稳定的HA基因重组禽痘病毒。提取感染重组病毒的鸡胚成纤维细胞(CEF)的DNA进行PCR扩增,获得1.7kb的携带有外源目的基因片段。收集纯化的重组病毒CEF细胞,用H9亚型禽流感病毒多克隆血清作一抗,碱性磷酸酶标记的鸡IgG为二抗进行Western blot检测,结果表明重组痘病毒能在体外的CEF细胞表达HA糖蛋白。  相似文献   

猪链球菌2型MRP与FBPS部分片段串联基因的原核表达     

王宝松  单虎  曾巧英  李明义 《中国动物检疫》2009,26(4):37-39

根据猪链球菌2型(SS2)溶菌酶释放蛋白(MRP)和纤维蛋白原结合蛋白(FBPS)的基因序列,选取可能含有抗原决定簇的两片段,各设计合成一对引物,使之含有共同的酶切位点。通过T4DNA连接酶串联两片段,构建原核表达载体pET32a-mrp-fbps,重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3),经不同时间、不同温度,不同浓度IPTG诱导表达,经SDS-PAGE电泳,表达约为80kD的融合蛋白。Westernblot结果表明重组蛋白可被SS2阳性血清所识别。证实串联表达的融合蛋白具有良好的免疫原性,是重要的保护性抗原,本试验为进一步研究猪链球菌亚单位疫苗奠定了基础。  相似文献