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建立了检测猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)IgA抗体的间接ELISA方法,旨在为PEDV感染检测与免疫效果评价提供技术手段。以重组PEDV结构蛋白(S1蛋白)作为包被抗原,采用方阵滴定法确定抗原包被浓度、封闭液、稀释液以及待测血清和酶标抗体的最佳工作浓度,建立了PEDV IgA抗体检测间接ELISA方法。进而检测方法的特异性、批内与批间重复性,评价建立方法与国外试剂盒的符合率,分析ELISA检测血清特异性IgA抗体水平与中和抗体的相关性。结果显示,ELISA方法的最佳抗原包被浓度为1 mg/L,封闭液和抗体稀释液为含5%犊牛血清的PBS,待检血清和酶标抗体的工作浓度分别为1∶40与1∶1 500倍稀释。结果表明,该ELISA能够特异地检测PEDV抗体,与猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、伪狂犬病毒、猪圆环病毒2型等病毒的抗血清无交叉反应,批内和批间重复性试验的变异系数低于10%,与现有试剂盒的总符合率为94.8%,血清特异性IgA抗体水平与中和抗体呈正相关(r=0.69,P<0.001)。 相似文献
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从猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)弱毒活疫苗免疫猪脾制备转移因子(TF),检测其免疫活性,为开发新型免疫增强剂和有效防制PRRS提供科学依据。用PRRSV弱毒活疫苗免疫健康育成猪,无菌采集脾,通过透析法从脾提取TF。应用磺基水杨酸法、茚三酮反应和硝酸-钼酸铵试验等方法检测TF的主要成分,经高效液相色谱法测定TF中氨基酸种类及其含量;通过鸡红细胞吞噬试验和MTT法,检测TF对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能和外周血淋巴细胞增殖活性的调节作用。进而将9头4周龄健康仔猪随机分为A、B和C组,每组3头。A组每头猪左、右侧耳后分别肌内注射1头份PRRSV疫苗和1mL TF;B组每头猪注射1头份PRRSV疫苗与1mL TF的混合液;C组每头猪注射1头份PRRSV疫苗与1mL生理盐水混合液。免疫后20d,通过MTT法检测每组猪外周血淋巴细胞(PBLC)的增殖活性。制备的TF内无蛋白质成分,含有核酸和18种氨基酸,每毫升TF含核酸21.5μg、总氨基酸3.479mg。TF能显著增强小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬能力和PBLC增殖活性。当TF与PRRSV疫苗分开或混合注射给4周龄仔猪后,能够显著提高仔猪PBLC的增殖能力。从PRRS弱毒活疫苗免疫猪的脾制备了TF,其能显著提高巨噬细胞的吞噬功能和外周血淋巴细胞的增殖活性。 相似文献
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本研究从病原学角度证实了大肠杆菌病(血清型O_2、O_(111)在河北省保定市某鸡场的存在。某大型种鸡饲养场的产蛋种鸡发生一种传染病,经流行病学调查、临床观察、病理剖检、病原分离及鉴定,确诊为大肠杆菌病。经凝集试验鉴定分离菌为O_2和O_(111)血清型大肠杆菌,致病性试验能复制出典型病例,将分离菌灭活后加入油佐剂制备的灭活疫苗,具有良好的免疫原性。 相似文献