捻转血矛线虫DNA疫苗的构建及山羊免疫保护性试验     

严若峰  徐立新  孙延鸣  赵光伟  李祥瑞 《中国农业科学》2007,40(12):2869-2875

 【目的】构建捻转血矛线虫DNA疫苗，并研究该疫苗对山羊的免疫保护效果。【方法】将捻转血矛线虫重要保护性抗原H11的编码基因分H11-1、H11-2和H11-3三部分，分别亚克隆到基因疫苗载体pcDNA4/His Max C中，用酶切反应、序列测定等方法鉴定重组疫苗。将纯化的DNA疫苗肌肉注射山羊后，用RT-PCR、Western blotting和ELISA方法检测疫苗在山羊体内的转录、翻译和诱导IgG的产生。第2次免疫后2W用10 000条捻转血矛线虫第3期幼虫攻击实验动物，检测山羊虫卵排出、虫卵孵化率、成虫数量等免疫保护性指标。【结果】获得了捻转血矛线虫H11 DNA疫苗，疫苗第1次免疫7d后在山羊肌肉组织中进行了转录，第2次免疫7 d后，DNA疫苗获得了翻译，并诱导机体产生了相应的抗体。与对照组比较，试验组山羊排出虫卵减少58.8%、虫卵孵化率减少75.3%、成虫减少68.2%。【结论】构建了捻转血矛线虫H11 DNA疫苗，该DNA疫苗对山羊具有较好的免疫保护效果。  相似文献   

兔肝球虫病的病理学研究   总被引：2，自引：0，他引：2  

李祥瑞  汪志楷 《河南农业大学学报》1992,26(1):52-55

  相似文献   

南京地区犬消化道寄生虫感染情况调查   总被引：1，自引：1，他引：0  

李学钊  严若峰  李祥瑞 《畜牧与兽医》2011,43(12)

用粪便学检查方法对南京地区289份犬粪便中寄生虫感染情况进行了调查。结果表明,该地区犬寄生虫感染率为33.91%,其中蠕虫感染率为19.03%,原虫感染率为14.88%。病原分别为犬弓首蛔虫、狮弓蛔虫、犬钩口线虫、粪类圆线虫、阔节裂头绦虫、犬复孔绦虫、犬等孢球虫和俄亥俄等孢球虫,其中优势寄生虫为犬弓首蛔虫、犬等孢球虫和犬复孔绦虫。  相似文献   

鸡球虫DNA疫苗研究进展   总被引：1，自引：0，他引：1  

李学钊  宋鸿雁  刘根新  李祥瑞 《畜牧与兽医》2011,43(8)

鸡球虫病是严重危害养禽业的一种寄生虫病。一直以来,鸡球虫病主要依靠药物来进行防制。但是,随着球虫抗药性问题的日益严重、抗球虫新药开发困难及人们对食品安全的关注,药物在球虫病控制中的作用越来越受到限制,因而人们期望用更好的手段来控制鸡球虫病。DNA疫苗是近年发展起来的一种新型疫苗,因其安全、稳定、高效和易于制备而得到广泛研究。随着鸡球虫保护性抗原基因的不断发现,以及对细胞因子等免疫佐剂在抗球虫感染中的作用不断深入探索,鸡球虫DNA疫苗的研究引起人们的广泛关注和极大兴趣。本文就鸡球虫DNA疫苗作用机理、抗原基因、载体、免疫佐剂、免疫途径、免疫剂量、免疫程序及DNA疫苗研究进展方面展开一系列论述。  相似文献   

动物药学新专业人才培养模式初探     

任建鸾  李祥瑞  邹思湘 《中国农业教育》2005,(5):55-56

随着我国经济和社会的发展,社会对动物医学人才的类型和知识结构提出了新的要求,对动物药学专门人才的需求与日俱增,现有动物医学专业很难满足新形势下社会对动物药学人才的需求.本文探讨了开设动物药学专业的必要性、可行性,并对动物药学专业人才知识结构和素质进行了分析.  相似文献   

捻转血矛线虫H11基因在巴斯德毕赤酵母中的表达   总被引：3，自引：0，他引：3  

严若峰  李祥瑞 《南京农业大学学报》2005,28(2):85-89

将捻转血矛线虫H11基因亚克隆到酵母表达载体pPICZαB后，用氯化锂法转化巴斯德毕赤酵母菌株X-33，通过含Zeocine^TM抗生素的YPD平板筛选出72个重组子。重组酵母用甲醇诱导后，经RT-PCR、SDS-PAGE和Western blot检测，结果表明捻转血矛线虫H11在巴斯德毕赤酵母中实现了表达。  相似文献   

捻转血矛线虫半胱氨酸蛋白酶对山羊PBMCs免疫功能的影响   总被引：1，自引：1，他引：0  

胡孟娟  周丽娜  牛延萍  徐立新  宋小凯  李祥瑞  严若峰 《畜牧兽医学报》2018,(4)

旨在探究捻转血矛线虫半胱氨酸蛋白酶(Hc58)对山羊外周血单个核细胞(PBMCs)免疫功能的影响。采集健康山羊血液,分离出PBMCs和单核细胞,分别以质量浓度为0、10、20、40μg·mL-1的重组蛋白Hc58与细胞体外共培养,采用硝酸还原酶法测定不同浓度Hc58对单核细胞分泌一氧化氮(NO)的影响;采用流式细胞术检测重组蛋白对单核细胞吞噬FITC-dextran能力的影响;采用荧光定量PCR检测PBMCs中IL-2、IL-4、IL-10、IL-17、IFN-γ和TGF-β的mRNA转录情况;采用迁移小室研究重组蛋白对PBMCs迁移的影响;采用流式细胞术检测不同浓度Hc58对PBMCs凋亡的影响。研究表明重组蛋白Hc58显著促进山羊单核细胞分泌NO;并且增强了山羊单核细胞的吞噬能力;Hc58显著上调IL-2、IL-4、IL-17、IFN-γ的表达量;Hc58显著提高山羊PBMCs凋亡比例,也使PBMCs迁移率增加。捻转血矛线虫半胱氨酸蛋白酶能通过多种途径影响宿主PBMCs发挥免疫作用。  相似文献   

白眉野草螟幼虫期过冷却点和冰点的测定     

张云慧  彭赫  张智  李祥瑞  原国辉  程登发 《植物保护学报》2015,42(5):859-860

<正>白眉野草螟Agriphila aeneociliella(Eversmann)是近年来小麦上的一种新发害虫,2010年在山东莱州小麦田首次发现(王海英等,2013),2013年在山西晋城、2014年在山东高密、2015年在青岛即墨等地相继发生为害。白眉野草螟1年发生1代,以幼虫越冬,5月上中旬以老熟幼虫滞育越夏,9月中下旬打破滞育化蛹,成虫羽化产卵,下代幼虫为害秋播小麦(曾娟等,2014),整个世代周期与我国北方冬  相似文献   

捻转血矛线虫ES24抗原基因的克隆与表达特性分析     

牛延萍  高丽丽  宋小凯  徐立新  李祥瑞  严若峰 《畜牧与兽医》2012,44(11)

根据捻转血矛线虫ES24抗原基因序列(U64793.1)设计1对特异性引物,用RT-PCR方法扩增出大小约为670 bp的DNA片段。将该DNA片段克隆到pMD18-T载体后进行序列测定和分析,结果发现该基因与GenBank中已知的捻转血矛线虫24 ku ES抗原基因的相似性达96%～98%。将该基因的开放阅读框插入pET28a(+)载体中,获得原核表达质粒pET28/ES24,并转化大肠杆菌BL21。重组细菌用IPTG诱导,经SDS-PAGE分析,结果表明该基因获得了表达,重组蛋白分子量大小约为25 ku。用实时荧光定量PCR技术对该基因在捻转血矛线虫的虫卵、第3期幼虫、雌虫和雄虫等不同发育阶段、不同性别虫体内的表达情况进行了定量分析,结果显示ES24基因在雄性成虫中表达量最高,雌虫和虫卵其次,在第3期幼虫中表达最低。  相似文献   

山羊白细胞介素-4成熟蛋白基因的原核表达及其生物学活性检测     

张晓燕  严若峰  徐立新  宋小凯  李祥瑞 《畜牧兽医学报》2012,43(10):1657-1663

本研究旨在进行山羊成熟白细胞介素-4的体外表达及重组蛋白生物学活性分析.运用PCR技术以pMD18-T-pGIL-4(pGIL-4为山羊IL-4全序列基因)为模板扩增成熟蛋白(mIL-4)基因,并构建pET-32a(+)-mGIL-4原核表达载体,IPTG诱导目的蛋白表达.使用改进的方法纯化目的蛋白后,采用淋巴细胞转化试验检测重组蛋白对山羊外周血T淋巴母细胞的增殖活性.经测序,mIL-4含339个核苷酸,编码112个氨基酸.表达的重组蛋白约为31.3 ku,主要以包涵体形式表达.通过改进纯化方法获得了高纯度的重组蛋白.试验证明,纯化、复性后的重组蛋白能显著刺激山羊外周血T淋巴母细胞的增殖,并表现出一定的剂量依赖性,8 μg·mL-1增殖能力最强.本研究为山羊重组白细胞介素-4的规模化生产及作为佐剂的开发应用奠定了基础.  相似文献