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[目的]建立鳗鲡疱疹病毒（Anguillid herpesvirus, AngHV）的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR（qPCR)检测方法。[方法]利用PCR扩增出AngHV ORF49的序列,克隆至pET-32a载体,构建重组质粒pET-32a-ORF49,作为qPCR的标准品;根据ORF49序列设计引物,以梯度稀释的重组质粒为模版,进行SYBR Green Ⅰ qPCR扩增,制作标准曲线,建立AngHV的qPCR检测方法,并评价其灵敏性、特异性、重复性和应用效果。[结果]结果显示,qPCR的Ct值与标准品的拷贝数线性关系良好,且线性范围广,获得的标准曲线的相关系数（R2）达到0.999,扩增效率为100.855%;该方法特异性好,仅特异性检测AngHV,而对鲤疱疹病毒Ⅲ型（Cyprinid herpesvirus 3, CyHV-3）、蛙虹彩病毒（Rana grylio virus, RGV）和鳗鲡虹彩病毒（Eel iridovirus, EIV）无扩增;该方法重复性好,组内和组间变异系数均小于2%;该方法灵敏性高于普通PCR法,最低可检测到10个病毒拷贝,而普通PCR法为1000个病毒拷贝。应用分析结果表明,感染AngHV的欧洲鳗鲡（Anguilla anguilla）的主要组织器官内均可检测到AngHV,并且鳃、鳍和皮肤黏液内的病毒量明显高于其他组织器官;对保存的25份疑似鳗鲡“脱黏败血综合征”病料进行检测,阳性检出率为96%,而普通PCR法的阳性检出率仅为76%。[结论]本研究建立的AngHV SYBR Green Ⅰ qPCR检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好,可用于AngHV的快速和定量检测,对鳗鲡“脱黏败血综合征”的防控也具有重要意义。 相似文献
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鳗鲡是我国重要的淡水养殖品种之一,养殖区域集中在福建、广东、江西等地,形成养殖、饲料、加工、出口等全产业链的外向型产业。2017年我国鳗鲡总产量达217000 t,从业人员超过10万人,全产业链年产值150亿元以上[1]。主要养殖品种有日本鳗鲡(Anguilla japonica)、欧洲鳗鲡(A.anguilla)、美洲鳗鲡(A.rostrata)和花鳗鲡(A.marmorata)。因美洲鳗鲡具有苗种资源丰富、来源稳定,能在低水温季节正常养殖等优势,其养殖量逐年增多,2018年美洲鳗鲡投苗数占总养殖量的41%。但随着工厂化高密度养殖的普及,病害频发成为鳗鲡养殖业健康可持续发展的重要制约因素。 相似文献
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为了消除目前储量参数碾平算法中的系统误差和降低进位误差,对原有的储量参数碾平算法进行了改进。采用地面脱气原油体积、质量、溶解气约束方法碾平储量合计单元各项参数,从而有效消除储量参数碾平中的单项系统误差;将各碾平参数值在各自变化范围内按照最小单位步长先离散化,再采用全排列组合法优选出使体积、质量、溶解气储量相对误差平方和达到最小的一组参数,该组参数即为合计项的最优储量参数碾平项选择。经过检验,利用该方法能够降低进位误差。 相似文献
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猪流行性腹泻病毒近年来在福建省呈现了不断扩散和暴发的态势。本文以筛选到的PEDV野生毒株P55为研究对象,通过对其主要结构蛋白M和N基因的序列比较和遗传进化分析,结合前期的S1和ORF3蛋白研究结果,综合评定该毒株的分子遗传学特征。序列分析结果显示,P55的M和N基因与参考序列比较,均未发现片段缺失和插入,仅N蛋白序列中存在少量点突变;遗传距离分析结果显示,P55的M和N蛋白的变异度较S1和ORF3低。上述结果表明,与P55毒力相关的分子机制除了ORF3外,还可能存在其他基因区域的协同作用。该结果为预防和控制该类变异毒株的流行提供了参考。 相似文献
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2018年5、6月份对西沙群岛的永兴岛、石岛、赵述岛、西沙洲、南沙洲、中沙洲、北沙洲、北岛、中岛和南岛共10个岛屿的植物资源进行了野外考察、标本采集、鉴定以及文献查阅,共记录西沙群岛维管植物90科406种,确定西沙群岛未记录野生维管植物52种,新归化植物10种,新增栽培植物87种,隶属于59科130属,凭证标本保存于中国热带农业科学院植物标本室ATCH。西沙群岛原记录维管植物398种,在此次调查的基础上,结合相关文献资料及植物标本进行统计,西沙群岛维管植物共计101科352属543种,其中野生植物292种,栽培植物251种。此研究为西沙群岛植物资源提供了重要信息。 相似文献
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嗜水气单胞菌对水产动物养殖具有极大的危害。前期研究已制备抗嗜水气单胞菌外膜蛋白(MOMP)的鱼用功能性卵黄粉。本文通过ELISA和Western blot分析该功能性卵黄粉所含抗体的效价和特异性,结合对鳗鲡的免疫攻毒保护和投喂后的生长性能测定,研究其对防控鳗鲡嗜水气单胞菌疾病的影响。结果显示,鱼用功能性卵黄粉中的卵黄抗体能与3株代表菌的MOMP抗原特异结合,ELISA效价检测显示效价均达到1.10 240以上;投喂鱼用功能性卵黄粉13 d后,鳗鲡经嗜水气单胞菌攻毒的存活率较未投喂组提高30.8%。3个养殖场进行的鳗鲡生长性能测定结果显示,饲料中添加0.3%的鱼用功能性卵黄粉后,鳗鲡的增重率较对照组分别提高42.8%、13.6%和8.8%,饲料转化率分别提高4.04%、3.11%和2.55%;死亡率数据统计显示,2个养殖场差别不明显,1个养殖场死亡率下降了38.8%。上述结果说明,鱼用功能性卵黄粉可用于嗜水气单胞菌感染引起的鳗鲡疾病的预防和控制,具有进一步的研究和开发的前景。 相似文献
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【目的】克隆鳗鲡疱疹病毒（Anguillid herpesvirus,AngHV） ORF87基因,分析其序列特征并制备多克隆抗体,为揭示ORF87基因在AngHV侵染过程中的作用机制提供技术支持。【方法】根据GenBank已公布AngHV参考株（NC_013668）的ORF87基因序列设计引物,从AngHV-FJ株基因组中扩增出ORF87基因,构建重组质粒pMD19-ORF87经酶切鉴定和测序验证后,采用Softberry、ProtParam、CDD、TMHMM、SignalP 5.0、PSORT及BepiPred等在线软件进行生物信息学分析;将ORF87基因克隆至pET-32a表达载体上,转化大肠杆菌BL21 （DE3）感受态细胞,经IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE检测及Western blotting鉴定;以纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔,制备ORF87多克隆抗体。【结果】克隆获得的AngHV-FJ株ORF87基因为2127 bp,与GenBank已发布的参考序列高度同源（相似性为99.72%）,仅存在4个碱基突变;其编码蛋白分子量为80.1 kD,理论等电点（pI）为7.62,不稳定系数为42.38,总平均亲水性为-0.271。ORF87蛋白具有蛋白激酶C超家族（PKC-like Superfamily）的保守结构域,但不具信号肽和跨膜结构域;其亚细胞定位可能位于细胞核和细胞质膜,存在19个潜在B细胞抗原表位,即具有良好的免疫原性。AngHV-FJ株ORF87基因可在大肠杆菌中高效表达,表达获得的融合蛋白约100.0 kD,主要以包涵体形式存在;以融合蛋白免疫新西兰大白兔制备获得的ORF87多克隆抗体效价达1:16000,能特异性识别AngHV的ORF87蛋白。【结论】 AngHV-FJ株源ORF87基因经原核表达载体诱导表达获得的融合蛋白ORF87具有Serine/threonine蛋白激酶活性,以其免疫新西兰大白兔制备获得的ORF87多克隆抗体具有高效价,能特异性识别AngHV感染,可作为亚细胞定位及表达时相分析等蛋白特性研究的工具,用于解析ORF87基因在AngHV侵染过程中的作用。 相似文献