肾型IBV陕西分离株 CK/ CH/ Shaanxi/ 2009/ H09全基因的克隆与序列分析     

杨涛  张淑霞  杨增岐  刘青天  郝华芳  陈胜利  杜恩岐  王兴龙  党如意  王晶钰 《西北农业学报》2013,22(11):189-194

为了解鸡肾型传染性支气管炎病毒陕西流行株的分子生物学特征,参考DY07株全基因核苷酸序列设计22对引物,采用RT PCR方法对西北农林科技大学动物医学院禽病研究室分离的1株肾型IBV陕西分离株CK/CH/Shaanxi/2009/H09的全基因进行分段扩增并测序,将测序成功的各序列依次拼接,得到全基因序列后进行序列比对分析。研究结果表明,该分离株基因组全长27 675 bp,共有10个开放阅读框,其基因排序为5′cap Replicase S 3a 3b 3c M 5a 5b N poly（A）3′,纤突蛋白裂解位点为到⁵³⁶RRFRR⁵⁴⁰, 3a、5a和N基因的大小与参考毒株相比是保守的,但编码其他蛋白的基因长度存在差异;同源性分析结果显示,该毒株与48个参考毒株的同源性为85.2%~93.5%;系统进化树分析结果显示,该毒株与中国分离株ck/CH/LDL/091022、YX10株和DY07 株的亲缘关系较近,同属于中国近年来主要流行的血清型毒株,但在基因水平上已经产生一定程度的变异。  相似文献   

鸡IFN-β启动子荧光素酶报告载体的构建与活性检测     

陈胜利  唐文雅  郝华芳  王兴龙  刘阳坤  付向晶  张鹏  贺生芳  杜恩岐 《中国兽医学报》2013,33(6)

构建并鉴定鸡β干扰素(IFN-β)基因启动子荧光素酶报告基因载体并进行转录活性分析.通过PCR方法从鸡基因组DNA中克隆鸡IFN-β基因启动子,亚克隆到含萤火虫荧光素酶报告基因pGL3-basic载体上,构建鸡IFN-β基因启动子荧光素酶报告基因载体pChIFN-β-luc;用脂质体法将构建的报告基因载体瞬时转染鸡胚成纤维细胞系DF-1,并设置空白对照组和poly(I:C)处理组,检测荧光素酶的活性.经PCR扩增出鸡IFN-β基因启动子序列,双酶切及测序鉴定各重组体构建正确;转染后检测,pChIFN-β-luc具有转录活性,并且在poly(I:C)的刺激下其荧光素酶活性显著升高.本试验为进一步研究鸡IFN-β基因转录调控机制奠定了基础.  相似文献   

禽脑脊髓炎病毒陕西分离株VP1基因的克隆及序列分析     

郝华芳  张淑霞  杨涛  杨增岐  王兴龙  杜恩岐  党如意 《动物医学进展》2012,33(7):23-27

对禽脑脊髓炎病毒(AEV)陕西分离株SX株VP1基因进行克隆和序列分析,了解VP1基因的分子生物学特征。根据发表的AEV VP1基因序列,设计并合成一对特异性引物,采用RT-PCR方法扩增出AEVSX分离株的VP1基因,将其克隆到pMD18-T载体上,进行序列测定后与已知的AEV毒株序列进行比较分析。结果表明,获得的AEV SX分离株VP1基因的全长为810bp,编码270个氨基酸残基;SX株与参考毒株VP1基因的核苷酸同源性为91.5%～99.4%,推导的氨基酸同源性为88.5%～98.9%;在1～7、19～25、149～155处有3个潜在抗原位点。系统进化树表明,SX株与1143、L2Z参考毒株的亲缘关系较近。  相似文献   

猪源副黏病毒HX01株分离鉴定、全基因测序与遗传变异分析     

陈胜利  刘辉  唐文雅  郝华芳  张渭东  王兴龙  杜恩岐  张淑霞  党如意  杨增岐 《兽医大学学报》2012,(10):1418-1422,1428

从陕西省户县某猪场患流感样症状病死仔猪肺脏分离得到1株副黏病毒,命名为猪源副黏病毒（PPMV）HX01株,对分离毒株鉴定后进行部分生物学特性研究和全基因测序分析。参考PPMV JL-1株基因组序列设计10对引物,对PPMV HX01株分段扩增并测序,将测序成功的各序列依次拼接得到全基因序列并进行序列比对。该病毒MDT为91.2h,ICPI和IVPI为0,EID50为10-10.25/mL,表明该毒株属于新城疫弱毒株。序列分析结果表明,PPMV HX01株（全基因序列GenBank登录号：JF795531）与NDV参考毒株全基因核苷酸同源性83.3%～99.8%,该病毒与基因Ⅱ型我国传统弱毒疫苗株La Sota全基因水平和各个基因编码开放阅读框的同源性均在99.5%以上,而与基因Ⅸ型国家标准强毒株F48E9和目前流行的基因Ⅶ型毒株亲缘关系较远。  相似文献   

腺病毒表达鸡GM-CSF及其对鸡骨髓细胞增殖活性的检测     

王兴龙  郝华芳  杜恩岐  唐文雅  张鹏  陈胜利  张渭东  张淑霞  党如意  杨增岐 《兽医大学学报》2012,(4):509-512

为了方便鸡粒细胞/巨噬细胞集落细胞刺激因子（GM-CSF）作为疫苗佐剂使用,用PCR方法扩增出鸡GM-CSF基因,将其连入人腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV,将重组穿梭载体与腺病毒骨架重组后,获得重组腺病毒骨架载体,线性化后转染293SD细胞,获得能够表达鸡GM-CSF的腺病毒。将获得的重组腺病毒转导鸡成纤维细胞系DF1,细胞培养上清中,可以检测到GM-CSF刺激鸡骨髓细胞活性,为鸡GM-CSF进一步应用奠定了基础。  相似文献   

“兽医传染病学”人工造病开设系统大实验探讨   总被引：3，自引：1，他引：2  

张淑霞  杨增岐  党如意  杜恩岐  王兴龙  刘芳宁 《中国农业教育》2011,(1):56-58

针对教学安排的计划性与动物传染病发生的随机性的矛盾,通过多年的探索,初步形成了将人工造病引入实践教学中,开设系统大实验的实践教学模式。探讨了＂兽医传染病学＂系统大实验开设内容的选择、实验方案的设计和实践教学的组织实施。系统大实验的开设对于培养学生的学习兴趣,提高学生分析问题、解决问题的综合素质起到了积极的作用。  相似文献   

禽脑脊髓炎病毒VP1蛋白间接ELISA检测方法的建立     

张淑霞  郝华芳  杨涛  杨增岐  王兴龙  杜恩岐  党如意 《中国兽医学报》2013,33(4)

对AEV陕西分离株VP1基因进行原核表达,采用SDS-PAGE和Western blotting检测表达产物;以纯化的蛋白为包被抗原建立ELISA方法,并对反应条件进行优化.结果表明,VP1蛋白在大肠杆菌中成功表达,产物约为50 000的融合蛋白,具有良好的反应原性;优化的ELISA最佳工作条件为:重组抗原包被质量浓度3.8 mg/L,37℃2h后4℃过夜,1％ BSA 37℃封闭2h,待检血清1∶50稀释37℃孵育0.5h,酶标抗体1:4 000稀释,37℃作用30min,底物37℃显色5 min,临界值为0.360;建立的ELISA方法特异性强、重复性好、敏感性高;临床检测180份样品,与美国IDEXX公司AEV抗体检测试剂盒检测结果符合率为91.9％.该方法可用于临床样品的大批量检测.  相似文献