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【目的】猪表皮生长因子（pEGF）具有刺激静止期猪卵母细胞的成熟以及刺激仔猪胃肠上皮细胞成熟的功能，从而可以提高母猪繁殖率和降低断奶仔猪的应激。因此开发猪表皮生长因子具有重要意义。【方法】用人工合成的pEGF 基因为模板，用PCR扩增获得pEGF-6His片段，将其克隆到载体pPIC9构建重组质粒pPIC9-pEGF并电转化毕赤酵母。用斑点杂交法筛选多拷贝整合转化子即基因工程菌，用Ni-NTA亲和层析法纯化目的蛋白，纯化产物用抗His-tag 的单克隆抗体进行蛋白质免疫印迹、氨基端测序鉴定、体外生物活性检测。【结果】斑点杂交法筛选中信号越强的转化子，甲醇诱导表达的目的蛋白含量越高。免疫印迹中可以观察到印迹条带。氨基端氨基酸测序发现纯化的表达产物含有2条肽链，其N-端15个氨基酸的序列分别与天然的pEGF以及Glu-Ala -pEGF的序列相同。体外生物活性检测结果表明，纯化的表达产物对BALB/c 3T3细胞具有显著的增殖作用。【结论】本研究获得了能高效表达具有生物学活性的重组猪表皮生长因子的基因工程菌。 相似文献
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根据雌激素类化合物在机体内的作用机理，以增强型绿色荧光蛋白（EGFP）基因为报告基因构建了4个启动子不同的表达载体(pERE-SV-EGFP, pERE-TA-EGFP, pERE-CMV-EGFP, pERE-TK-EGFP)。以这些表达载体瞬时转染MCF-7细胞，报告基因的基础表达与启动子的强度相关。以17β-雌二醇(E2 ,10-9 mol·L-1)诱导表达载体瞬时转染的MCF-7细胞，发现在表达载体pERE-TA-EGFP、pERE-TK-EGFP、pERE-SV-EGFP转染的MCF-7细胞中，E2能诱导2倍以上的报告基因的表达。这表明在这些瞬时表达系统中报告基因的表达是雌激素依赖性的，因此这些表达载体可用于稳定转染以建立稳定表达分析系统。 相似文献
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为建立一种快速检测猪表皮生长因子(pEGF)活性的方法,用本实验室构建的pEGF酵母表达载体进行摇瓶培养,通过鉴定为所需要的目的蛋白,用pEGF为添加物培养Balbc/3T3细胞,以pEGF浓度为横坐标,吸光度为纵坐标建立曲线。结果表明,理想的接种细胞的个数为5 000个/孔,细胞计数试剂盒(CCK-8)孵育的最佳时间为1.5 h,pEGF和人表皮生长因子(hEGF)标准品,在1 ng/mL~100 ng/mL范围内对细胞的增值作用相当,表明pEGF和hEGF有相同的生物学活性。建立了用CCK-8快速测定pEGF活性的方法。 相似文献
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王明海王云飞杨桂香 《拖拉机与农用运输车》2016,(2):4-6
精密成形技术作为一种先进的制造技术,涉及内容较广,已广泛应用于汽车零部件的制造中。而对于同属于动力机械的拖拉机,由于受多种因素制约,精密成形技术在其上的应用一直滞后于汽车。主要介绍了具有推广价值的两种精密成形技术(无模铸造和精密锻造),并结合拖拉机传动零部件技术发展需求,展望了其应用前景。 相似文献
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聚醚类离子载体抗生素的毒性研究进展 总被引：1，自引：0，他引：1
本文综述了聚醚类离子载体抗生素对动物的毒性反应、与其它抗菌药物的配伍禁忌、引起中毒动物死亡的机理及中毒防治的研究进展,为合理应用这类药物提供参考。 相似文献
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橡胶履带车辆差速转向系统的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
针对传统的履带车辆利用转向离合器实现转向存在的问题,为了提高橡胶履带车辆行驶动力性、机动性,提出了机械液压双功率流差速转向系统设计构思,具体地对该系统进行理论上的运动学、动力学分析,推导出输出转速、扭矩的函数表达式,为该系统设计提供理论依据。根据设计构思进行了实际工程设计、制造,通过试验充分证明了该系统设计理论的正确性和应用可行性。 相似文献
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对国内外兽药残留毒性及生态毒理研究情况进行了综述，兽药残留包括兽药在动物性食品中的残留和在生态环境中的残留，前者对消费者造成直接的危害，主要表现在：直接的毒性作用，对人类胃肠道菌丛的影响和使病原菌耐药菌株增加，在环境中的生态毒理包括对土壤生物群落的影响，对水生生物的影响，对昆虫的影响和在环境中的转归，文章阐明兽药残留与人类健康和生态环境十分密切的关系，对其进一步深入研究有重要的理论与实际意义。 相似文献
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以具有代表性的2K-H型行星齿轮传动为例,对行星齿轮传动速比常用的计算方法进行了介绍;分别用行星架固定法、力矩法、速度图解法等推导出2K-H型行星齿轮传动的特性方程;并对3种计算方法作简单对比,为行星齿轮传动设计和计算提供参考。 相似文献