达氟沙星人工抗原的合成与鉴定   总被引：1，自引：0，他引：1  

龙淼  杨正涛  张乃生  朱连勤 《黑龙江畜牧兽医》2009,(1)

采用碳二亚胺偶联法将达氟沙星分别与牛血清白蛋白(BSA)、卵清白蛋白(OVA)载体蛋白偶联,制备达氟沙星人工抗原DFLX-BSA和DFLX-OVA,并用FeCl3显色反应、紫外扫描和酶联免疫吸附试验对制备的人工抗原进行鉴定.结果表明:DFLX与BSA和OVA的偶联比为14: 1和16: 1时可成功地制备达氟沙星人工抗原.  相似文献   

奶牛孕酮单克隆抗体的制备与初步鉴定     

张洪友  曾文渊  张乃生  杨正涛  夏成  吴凌 《黑龙江畜牧兽医》2009,(8)

试验应用淋巴细胞杂交瘤技术,以制备的P4免疫抗原免疫Balb/c小鼠为试验动物,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经间接ELISA方法进行筛选,采用有限稀释法进行细胞克隆,经过3次克隆筛选,最终获得2株能稳定分泌P4单克隆抗体的杂交瘤细胞系,分别命名为8G6、11A11.杂交瘤细胞培养上清液和小鼠腹水中2株单抗ELISA效价分别为1∶512 000,1∶216 000.单克隆抗体与检测抗原和对照均不发生交叉反应,显示出良好的特异性,灵敏度高,且8G6的亲和力优于11A11.奶牛孕酮单克隆抗体的获得为P4检测试剂盒的研制奠定了基础.  相似文献   

金黄色葡萄球菌ClfA基因的克隆及在大肠杆菌中的表达     

尹荣兰  杨正涛  张艳晶  刘辉  杨琦  刘珊  张乃生 《中国兽医学报》2009,29(2)

根据GenBank中ClfA基因序列设计特异性引物,以金黄色葡萄球菌基因组DNA为模板,进行PCR扩增,获得了约2 300 bp的DNA片段.将PCR产物克隆至pMD18-T载体中,构建了克隆质粒pMD18-ClfA.用BamHⅠ和EcoR Ⅰ双酶切pMD18-ClfA和pET28a(+),将纯化的基因ClfA亚克隆至pET28a(+),构建重组质粒pET28a-ClfA,并将其转化至大肠杆菌感受态BL21(DE3)中,经1 mmol/L IPTG诱导和SDS-PAGE分析,在87 000处出现了与目的蛋白一致的外源蛋白带,Western-blotting分析表明,该蛋白具有金黄色葡萄球菌的抗原性.  相似文献   

氟喹诺酮类药物残留免疫学检测方法的研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

魏东  杨正涛  李颖  郭昌明  刘辉  张乃生 《中国兽医学报》2009,29(12)

以沙拉沙星(SALX)为半抗原,牛血清白蛋白(BSA)偶联后免疫兔,获得对多种氟喹酮类(FQNS)药物有特异性的广谱性抗体.以SALX与卵清白蛋白(OVA)的偶联物作包被原,建立并优化了间接竞争ELISA检测方法,对SALX最低检出限达19.319 μg/L,且对诺氟沙星、环丙沙星和恩诺沙星均有特异性识别,最低检测限分别是22.646、26.181和19.054 μg/L.结果表明,该抗体可用于多种氟喹诺酮类药物残留筛选检测.  相似文献   

金黄色葡萄球菌FnBA活性基因的克隆及其原核表达     

张艳晶  尹荣兰  杨正涛  张乃生  周晓菲 《中国兽医学报》2009,29(12)

根据GenBank中纤连蛋白结合蛋白A基因(FnBA)序列设计了1对特异性引物,以金黄色葡萄球菌基因组DNA为模板,进行PCR扩增;结果获得了1 735 bp的DNA片段.将PCR产物克隆至pMD18-T载体中,成功地构建了克隆质粒pMD18-T-FnBA.以HindⅢ和BamH Ⅰ双酶切pMD18-T-FnBA和pET28a(+),将纯化的基因FnBA亚克隆至pET28a(+)中,构建了原核表达质粒pET28a-FnBA,并将其转化至E.coli BL21感受态细胞中,经1 mmol/L IPTG诱导和SDS-PAGE分析,在约85 000处出现了与预期目的蛋白一致的外源蛋白带.又经Western-blotting分析表明,该蛋白具有金黄色葡萄球菌的抗原性.  相似文献   

芹菜素对LPS诱导小鼠急性肺损伤的保护作用     

王玉明  杨正涛  张乃生 《安徽农业科学》2015,(35):187-189

[目的]揭示芹菜素的抗炎作用机制.[方法]通过建立小鼠模型,研究芹菜素对LPS诱导急性肺损伤的保护作用.[结果]芹菜素可以降低LPS诱导的肺组织损伤和肺组织MPO活性.与LPS组相比,芹菜素治疗组可以显著降低肺泡盥洗液中TNF-α、IL-1β、IL-6的表达水平,并抑制NF-κB信号通路的激活.[结论]芹菜素可以通过抑制NF-κB的激活并降低炎性细胞因子的水平,从而对小鼠急性肺损伤产生抗炎保护作用.  相似文献   

培养条件对奶牛金葡菌5型荚膜多糖产量的影响   总被引：1，自引：0，他引：1  

杨正涛  张乃生  刘庆涛  杨琦  尹荣兰 《安徽农业科学》2008,36(16):6813-6814

[目的]研究不同培养条件对牛源金葡菌5型荚膜多糖产量的影响,以便于CP5的生产制备,从而为开展奶牛金葡菌新型多糖疫苗的研究奠定基础。[方法]从患隐性乳腺炎奶牛乳样中分离金葡菌,鉴定荚膜多糖血清型,对5型荚膜多糖菌株,采用BHI,哥伦比亚固体培养基,mod110三种培养基,每种培养基分别采用固体培养,碳源为葡萄糖的液体培养和碳源为乳糖的液体培养三种方式,共组成9种不同培养条件进行培养,研究培养条件对金葡菌荚膜多糖产量的影响。[结果]不同培养结果表明,与常用哥伦比亚培养基比较,BHI培养基能降低荚膜多糖产量,而mod110培养基能提高荚膜多糖产量;同种培养基,固体培养方式比液体培养方式有更高的荚膜多糖产量,同时乳糖作为碳源可提高荚膜多糖产量。  相似文献   

奶牛孕酮单克隆抗体的制备及其酶免疫测定方法的初步建立   总被引：1，自引：0，他引：1  

杨正涛  张乃生  冯晓琼  曾文渊  周虚  张嘉保  邵谱 《安徽农业科学》2008,36(18)

[目的]制备奶牛孕酮McAb,建立孕酮酶免疫检测方法,为研制检测试剂盒奠定基础。[方法]用琥珀酰亚胺法将孕酮与钥孔血蓝蛋白(KLH)和卵清白蛋白(OVA)偶联制备完全抗原,免疫BalB/c小鼠,建立杂交瘤细胞株制备McAb,对McAb特异性、亚类、交叉反应性及相对亲和力等进行鉴定,筛选最佳McAb,建立酶免疫检测方法。[结果]获得3株杂交瘤1F6、2G6和2A11,腹水效价依次为1∶1×106、1∶1×105和1∶8×104,其中1F6为IgG2b亚型,2G6和2A11为IgM亚型,3株McAb都能和游离孕酮发生特异性反应,相对亲和力1F6>2G6>2A11,其中1F6对雌二醇的交叉反应率小于0.01%。选用1F6与酶标孕酮建立ELISA检测方法,制作标准曲线,检测范围为0.5~100.0ng/ml。[结论]该研究制备的单克隆抗体,可用于建立孕酮酶免疫检测方法,为奶牛孕酮水平的定量监测提供了较实用的方法。  相似文献   

不同播期和播量对穴盘旱育秧水稻产量的影响     

辛淑荣  边文范  赵庆雷  姚利  郭兵  吴希波  单洪涛  朱宝岗  孙云建  杨正涛 《山东农业科学》2020,52(8)

  相似文献   

甲壳素类肥料的应用研究进展     

杨正涛  辛淑荣  王兴杰  张昌爱 《中国农业科技导报》2018,20(1):130-136

甲壳素类肥料作为一种新兴的功能性肥料,因其在改善蔬果品质方面的突出效果,在农业生产中逐渐得到了越来越多的重视。分析了甲壳素优良的保水持水、杀菌抑菌、营养协调及生理调节性能,概述了甲壳素类肥料在抗逆、增产、提质及土壤环境改善方面的作用,并从利用方式、生产工艺、检测方法及推广应用等方面总结了甲壳素肥料的应用现状,以期为甲壳素类肥料的推广应用提供理论支持。  相似文献