鳗鲡疱疹病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用     

李英英  杨金先  陈曦  陈强  宋铁英  葛均青 《水产学报》2021,(5):769-777

为了建立鳗鲡疱疹病毒(Anguillid herpesvirus,AngHV)的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR(qPCR)检测方法,利用PCR扩增出AngHV ORF49的序列,克隆至pET-32a载体,构建重组质粒pET-32a-ORF49,作为qPCR的标准品;根据ORF49序列设计引物,以梯度稀释的质...  相似文献   

欧洲鳗鳗苗丙线磷中毒的诊治报告     

林天龙  许斌福  龚晖  俞伏松  杨金先  陈强 《水产科技情报》1999,26(2):62-63

环境中的有机磷（１０％丙线磷）进入鳗苗体内后能与胆碱酯酶结合，使该酶的活性下降，出现一系列胆碱反应系统临床表现。碘解磷定可使钝化的胆碱酯酶复活；硫酸阿托品可解除毒蕈碱样症状，掌握好这两种复活剂的用量，可以控制病情  相似文献   

鳗鲡疱疹病毒SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用          下载免费PDF全文

李英英  杨金先  陈曦  陈强  宋铁英  葛均青 《水产学报》2021,45(5):769-777

[目的]建立鳗鲡疱疹病毒（Anguillid herpesvirus, AngHV）的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR（qPCR)检测方法。[方法]利用PCR扩增出AngHV ORF49的序列,克隆至pET-32a载体,构建重组质粒pET-32a-ORF49,作为qPCR的标准品;根据ORF49序列设计引物,以梯度稀释的重组质粒为模版,进行SYBR Green Ⅰ qPCR扩增,制作标准曲线,建立AngHV的qPCR检测方法,并评价其灵敏性、特异性、重复性和应用效果。[结果]结果显示,qPCR的Ct值与标准品的拷贝数线性关系良好,且线性范围广,获得的标准曲线的相关系数（R2）达到0.999,扩增效率为100.855%;该方法特异性好,仅特异性检测AngHV,而对鲤疱疹病毒Ⅲ型（Cyprinid herpesvirus 3, CyHV-3）、蛙虹彩病毒（Rana grylio virus, RGV）和鳗鲡虹彩病毒（Eel iridovirus, EIV）无扩增;该方法重复性好,组内和组间变异系数均小于2%;该方法灵敏性高于普通PCR法,最低可检测到10个病毒拷贝,而普通PCR法为1000个病毒拷贝。应用分析结果表明,感染AngHV的欧洲鳗鲡（Anguilla anguilla）的主要组织器官内均可检测到AngHV,并且鳃、鳍和皮肤黏液内的病毒量明显高于其他组织器官;对保存的25份疑似鳗鲡“脱黏败血综合征”病料进行检测,阳性检出率为96%,而普通PCR法的阳性检出率仅为76%。[结论]本研究建立的AngHV SYBR Green Ⅰ qPCR检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好,可用于AngHV的快速和定量检测,对鳗鲡“脱黏败血综合征”的防控也具有重要意义。  相似文献   

美洲鳗鲡“出血性烂鳃病”及其综合防控     

杨金先  陈强  李英英  陈曦  葛均青 《水产养殖》2021,(2):76-77

鳗鲡是我国重要的淡水养殖品种之一,养殖区域集中在福建、广东、江西等地,形成养殖、饲料、加工、出口等全产业链的外向型产业。2017年我国鳗鲡总产量达217000 t,从业人员超过10万人,全产业链年产值150亿元以上[1]。主要养殖品种有日本鳗鲡(Anguilla japonica)、欧洲鳗鲡(A.anguilla)、美洲鳗鲡(A.rostrata)和花鳗鲡(A.marmorata)。因美洲鳗鲡具有苗种资源丰富、来源稳定,能在低水温季节正常养殖等优势,其养殖量逐年增多,2018年美洲鳗鲡投苗数占总养殖量的41%。但随着工厂化高密度养殖的普及,病害频发成为鳗鲡养殖业健康可持续发展的重要制约因素。  相似文献   

嗜水气单胞菌ZN1株Mah-TrxA融合蛋白的粘附功能分析     

吴学敏  庄培德  毛凝  林天龙  龚辉  杨金先 《福建农业学报》2012,(6):583-588

为深入探讨嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila,Ah)主要粘附素在菌体侵入宿主和介导宿主产生免疫过程可能扮演的角色,对Ah菌ZN1株主要粘附素重组基因的表达产物的部分生物学功能进行分析。通过酶联免疫吸附试验、细胞与Ah菌的粘附试验及粘附抑制和阻断试验,研究分析克隆表达的Mah-TrxA(硫氧还蛋白与主要粘附素形成的融合蛋白)生物学功能。结果显示:克隆表达的Mah-TrxA融合蛋白具有良好的抗原性和免疫原性,对不同Ah菌株有交叉粘附抑制的作用,抗原竞争性抑制试验和抗体阻断试验均能显著减少不同Ah菌株对EPC的粘附作用。因此,克隆表达的Mah-TrxA确为ZN1菌株的主要粘附素;基因工程技术以融合蛋白形式表达的Mah-TrxA与野生菌株ZN1表达的主要粘附素具有类似的生物学活性。  相似文献   

抗猪大肠杆菌功能性卵黄粉的制备及对小鼠的攻毒保护作用     

杨金先  郭庆  俞伏松  叶鼎承  曾丽莉  宋铁英 《福建农业学报》2011,26(2):159-165

通过制备抗致病性大肠杆菌特异性IgY及富含特异性IgY的功能性卵黄粉,进行小鼠的攻毒保护试验,探讨功能性卵黄粉对由致病性大肠杆菌引起的疾病的防治作用.结果显示:(1)致病性大肠杆菌与特异性IgY混合后,菌体出现凝集,且病原菌的运动力明显受抑制;(2)浓度为1.3×109CFU·mL-1的致病性大肠杆菌K88、K99和9...  相似文献   

大黄鱼副溶血弧菌的分离、鉴定及致病力分析   总被引：25，自引：0，他引：25  

许斌福  林能锋  杨金先  俞伏松  董传甫  林天龙 《福建农业学报》2002,17(3):174-177

于2000年7月,从福建省宁德地区东吾洋海区患败血病的大黄鱼体内分离到1种优势菌,根据人工感染证实为病原菌,其半数致死剂量为1.0×107 cfu*ml-1;经43项形态、生理、生化特性测定,鉴定为副溶血弧菌Vibrio parahaemolyticus.其主要特性为革兰氏阴性,弧状,极生单鞭毛,氧化酶阳性,发酵型,精氨酸双水解酶、尿素酶为阴性,赖氨酸脱羧酶、鸟氨酸脱羧酶为阳性,VP为阴性,吲哚为阳性、不产生H2S,利用葡萄糖、甘露醇产酸,不利用肌醇、蔗糖,神奈川溶血活性(KP)为阴性,对O/129等高度敏感.  相似文献   

欧洲鳗败血症的诊治   总被引：2，自引：0，他引：2       下载免费PDF全文

龚晖  杨金先  许斌福  俞伏松  陈强  林天龙 《水产科技情报》2001,28(3):115-116

鳗鲡是水产大省福建的主要养殖对象 ,是福建省的四大出口支柱产业之一。我国于 2 0世纪90年代初开始大规模引进欧洲鳗 ,由于异地饲养及养殖池老化等原因 ,欧洲鳗疾病发生率逐年上升 ,其中以败血症感染率最高 ,危害最大。据统计 ,福建省的鳗鲡养殖场 ,1 998年欧洲鳗败血症的感染率在 5 0 %左右 ,死亡率 5 %～ 1 0 % ;1 999年的感染率在 70 %左右 ,死亡率 8%～ 1 5 % ;2 0 0 0年 4月至 7月的感染率达 80 %左右 ,死亡率 5 %～3 0 % ,仅福州长乐地区 2 0 0 0年因败血症而死亡的欧鳗就达 3 5 0万尾。由于对该病的流行病学不甚了解 ,欧洲鳗发病后…  相似文献   

斑点叉尾鮰血清免疫球蛋白纯化及其结构分析   总被引：2，自引：0，他引：2  

伊光辉  林天龙  熊邦喜  刘晓东  杨金先 《福建农业学报》2005,20(2):91-96

通过饱和硫酸铵分步盐析结合柱层析纯化温和气单胞菌免疫的斑点叉尾鮰血清免疫球蛋白(Ig)，结果表明，斑点叉尾鮰血清Ig主要分布在35％～55％的硫酸铵沉淀区间；而在Sepharose-4B凝胶柱和DEAE-52阴离子交换柱层析纯化的Ig均出现在第1个蛋白质峰。SDS—PAGE分析表明，纯化后的血清Ig纯度提高。通过变性还原、变性非还原和非变性非还原3种条件下的免疫印迹(Westernblot)试验对血清Ig的结构进行初步分析，发现SDS变性还原条件下血清Ig重链分子量为72kD，轻链有3条，其分子量分别为21kD、23．5kD和26kD；在变性非还原条件下血清Ig则出现多种结构形式，主要条带的分子量分别为760kD、525kD、330kD和230kD；而在非变性非还原条件下Ig仅出现一种结构形式，分子量约为870kD。  相似文献   

中华鳖“腐皮病”病原的研究   总被引：4，自引：0，他引：4  

储卫华  杨金先 《中国兽医杂志》2001,37(3):43-45

对江苏省吴县、吴江等地区养殖的患“腐皮病”的中华鳖的病原进行了分离，从病鳖的肝脏分离得菌株B-1，用菌株B-1进行人工感染，100%的鳖患病，出现与自然病鳖相同的症状。对B-1株进行菌体形态特征、培养特性、生理生化反应及致病因子检测，证明该菌为致病性嗜水气单胞菌。  相似文献