Ⅱ型犬腺病毒C株E1、E3区克隆测序及E3区标记载体瞬时表达     

王凤雪  罗国良  柴秀丽  张海玲  易立  邵西群  赵建军  闫喜军 《特产研究》2008,30(3)

设计4对引物，对犬Ⅱ型腺病毒2C（CAV-2C）株E1、E3区进行了扩增，将片段进行T克隆、测序，并构建了E3区缺失、标记EGFP的转移载体，在MDCK和293-T细胞上成功表达，但在MDCK细胞中的转染效率较低。本研究为犬腺病毒活病毒载体构建的研究提供基础。  相似文献   

A型流感病毒及其亚型H5、H7、H9分型RT-PCR检测方法初探     

邵西群  闫喜军  王凤雪  柴秀丽 《特产研究》2008,30(3)

本研究验证了来自资料的A型流感M基因通用引物AIM、通用反转录引物AIU的可用性；参考并分析GENBANK中A型流感的H5、H7、H9亚型病毒序列自行设计H5、H7、H9亚型的分型引物，尝试用RT-PCR方法对A型流感病毒及其H5、H7、H9亚型病毒分型检测，进一步确定3种病毒亚型的诊断流程。  相似文献   

狐狸传染性脑炎中和试验监测方法的建立和应用   总被引：1，自引：0，他引：1  

柴秀丽  闫喜军  姜莉莉  吴威  丛丽  邵西群  王凤雪 《特产研究》2006,28(4):8-10

本研究建立了狐狸传染性脑炎中和试验方法,采用该方法对疫苗免疫狐狸进行抗体水平动态监测。结果表明:该方法特异性强,重复性好,适用于狐狸传染性脑炎活疫苗免疫效果评价。  相似文献   

狐、貉源犬瘟热病毒H和F基因的克隆与序列分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

闫如勋  赵建军  柴秀丽  闫喜军  倪佳  张海玲  高晗  白雪  张蕾  陈立志  吴威 《江苏农业科学》2012,40(1):23-26

为研究我国圈养狐、貉流行犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)的基因分型与遗传变异情况,通过RT - PCR方法扩增与测序分析了2009年来源于山东省和河北省病料中的CDVH与F基因,并分别与GenBank CDV野毒株和疫苗株的基因序列比对,构建了核苷酸序列的系统发生树.H基因系统发生分析显示,6株毒株归属为Asia -1型.H蛋白氨基酸序列比较表明,除HeB(09)3株有8个潜在N-连接的糖基化位点外,其余毒株N-连接的糖基化位点均为9个.以往的研究结果显示,日本和中国台湾分离株的潜在N-连接糖基化位点为8～9个.6株野毒F蛋白编码区氨基酸的同源性为98.0％～99.5％,与CDV3(登录号EU726268)和Onderstepoort(登录号AF305419)疫苗株的同源性为89.1％～90.6％,F蛋白的前导区(1～ 135位氨基酸)与疫苗株相比的同源性为62.2％～66.7％;野毒株F蛋白氨基酸在108～ 110处比疫苗株CDV3多1个潜在N-连接的糖基化位点,HeB(09)3的F蛋白还在366～369位多1个潜在的N-连接的糖基化位点.目前在山东省和河北省2地狐狸和貉中流行的犬瘟热野毒株为Asia -1型,HeB(09)3株H蛋白和F蛋白在N-连接糖基化方面与其他5株野毒株有明显的不同.  相似文献   

貉细小病毒LN10-1株分离鉴定及其免疫原性研究     

康洪涛  赵建军  柴秀丽  张蕾  胡博  闫喜军  吴威 《畜牧兽医学报》2012,43(6):956-964

为研制貉细小病毒性肠炎疫苗,筛选出针对貉细小病毒性肠炎免疫原性好、安全高效的疫苗备选株,应用CRFK细胞从辽宁省发病貉的粪便中分离病毒,并通过形态学、血清学、分子生物学、动物回归及免疫接种等方法对分离株进行鉴定。鉴定结果表明成功分离出1株貉细小病毒,命名为LN10-1株。其VP2基因核苷酸序列与猕猴源猫泛白细胞综合征病毒株(BJ-22/2008/CHN株)相似性高达99.7%。VP2蛋白上决定宿主范围的2个氨基酸位点发生了突变。VP2基因种系发生分析显示,LN10-1株位于猫泛白细胞综合征病毒(Feline panleukopenia virus,FPLV)、蓝狐细小病毒(Blue fox parvovirus,BFPV)、水貂肠炎病毒(Mink enteritis virus,MEV)组成的食肉类动物细小病毒聚类分支与由犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)组成的聚类分支。由LN10-1株制备的灭活疫苗免疫结果显示,接种28d细小病毒中和抗体滴度可达到1∶256以上。推测LN10-1株可能正处于FPLV与CPV进化的中间状态,或是CPV适应新宿主(貉)而形成的一种新病毒,可以作为针对貉细小病毒性肠炎灭活疫苗的候选株。  相似文献   

犬瘟热疫苗株CDV3的血凝素基因的克隆与序列分析     

王凤雪  闫喜军  邵西群  柴秀丽  温永俊  吴威 《黑龙江畜牧兽医》2007,(7):118-120

犬瘟热是由犬瘟热病毒(CDV)引起的犬科、鼬科、浣熊科等多个科属动物感染的一种急性、热性传染病,犬、水貂、狐狸、貉等动物极易感染此病。近年来,国外对CDV蛋白组成和基因组结构的研究已经较为深入。CDV基因组为负链线性RNA,总长15 690 bp,由15 616个核苷酸组成。病毒粒子中主  相似文献   

犬Ⅰ型腺病毒结构蛋白Knob的可溶性表达及免疫原性研究     

孙杰  秦飞燕  朱言柱  薛向红  廉士珍  赵辉  王洋  柴秀丽  闫喜军 《黑龙江畜牧兽医》2019,(15)

为了探究犬Ⅰ型腺病毒(Canine adenovirus type 1, CAdV-1)F1301株结构蛋白Knob的免疫原性,试验采用原核表达技术将Knob蛋白基因克隆到pColdⅡ原核表达载体中进行低温诱导,并在大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中实现可溶性表达。利用纯化后的重组蛋白Knob免疫Balb/c小鼠,监测免疫后小鼠血清中重组蛋白Knob特异性抗体ELISA效价、病毒中和抗体效价,测定脾脏T淋巴细胞增殖活性,研究重组蛋白Knob的免疫原性。结果表明:表达的重组蛋白Knob为可溶性蛋白,分子质量约为20 ku。第2次免疫后7,14天,试验组小鼠血清ELISA抗体效价分别为1∶6 400和1∶3 200,中和抗体效价分别为1∶118和1∶96。第2次免疫后7天,试验组小鼠T淋巴细胞增殖指数为1.322,显著高于对照组(P0.05)。说明试验成功表达出CAdV-1重组蛋白Knob,所表达的重组蛋白Knob具有良好的免疫原性且存在CAdV-1的中和抗原表位。  相似文献   

狐阴道加德纳氏菌病灭活疫苗免疫监测及效果评价     

闫喜军  柴秀丽  赵传芳  邵西群  王凤雪  姜莉莉 《特产研究》2007,29(3):5-7

应用RBPT和Dot-ELISA方法对狐阴道加德纳氏菌病灭活疫苗免疫狐狸进行抗体监测。结果表明,疫苗接种第7d血清抗体阳转,第21～30d抗体达到高峰,高水平抗体可持续180d。通过免疫抗体与攻毒保护相关性测试,RBPT检测抗体在1:16和Dot-ELISA检测抗体在1∶320可抵抗GVF强毒菌株攻击获得保护,两种方法可以作为狐阴道加德纳氏菌病灭活疫苗效力检验评价方法在生产中应用。  相似文献   

犬和北极狐白细胞介素-2基因的克隆及序列分析     

易立  张海玲  程世鹏  闫喜军  柴秀丽  罗国良  王建科  赵建军 《经济动物学报》2008,12(1):18-20

为了给制备犬和狐白细胞介素-2相关免疫治疗剂、免疫增强剂提供材料,并且为构建插入犬和狐白细胞介素-2基因表达盒的新型基因工程疫苗提供物质基础,从犬、北极狐两种犬科动物基因组中克隆白细胞介素-2,经测序验证扩增片断长度为580 bp,包含全部编码序列和两侧非翻译区。序列分析表明犬与狐核苷酸序列同源性都超过99%,氨基酸序列完全一致。  相似文献   

水貂肠炎病毒VP2基因的原核表达及间接ELISA方法的建立     

陈涛  赵建军  张海玲  柴秀丽  闫喜军  吴威  钱爱东 《中国预防兽医学报》2009,31(9)

为了对水貂肠炎病毒(MEV)疫苗免疫后抗体水平的监测和疫苗免疫效力的评价,本研究在分析MEV VP2蛋白抗原性的基础上,设计1对特异性引物克隆VP2蛋白抗原性较好的基因片段,将克隆的基因片段定向插入到pProEXHTb原核表达载体中,构建了VP2基因原核表达重组质粒pProEXHTb-VP2A,并实现在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达,经鉴定表达的重组蛋白以包涵体形式存在,免疫印迹试验表明获得的重组蛋白具有与抗体较好的反应原性.应用His-Bind亲和层析柱纯化重组蛋白VP2A,以纯化后的重组蛋白作为ELISA诊断抗原,并对反应条件进行优化,初步建立了检测MEV抗体的VP2A-ELISA方法.确定了抗原最佳包被浓度为9.65 μg/mL,血清最佳稀释倍数为1:10.判定标准为S/P值≥0.312为阳性,S/P值≤0.243为阴性,介于两者之间为疑似.该抗原不与犬瘟热病毒、阿留申病毒阳性血清反应,具有良好的特异性.采用VP2A-ELISA对180份水貂血清样品进行检测,结果显示VP2A-ELISA与HI试验的符合率达到87.8%,表明建立的间接ELISA方法具有较高的敏感性和特异性,为现地免疫貂群抗体检测和MEV流行病学调查提供了一种简便的血清学诊断方法.  相似文献