猪乙型脑炎病毒E-Ⅲ抗原域蛋白间接ELISA的建立及应用     

郭锐  田永祥  周丹娜  段正赢  杨克礼  闫少侠  郑尤佳  梁望旺  刘泽文 《湖北农业科学》2012,51(22):5120-5122,5130

该研究利用纯化后的流行性乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)E-Ⅲ抗原域蛋白,将其作为包被抗原,建立了间接ELISA检测方法.试验的最佳反应条件为:最佳抗原包被浓度为17.5 μg/mL,血清抗体稀释度为1∶4,酶标二抗稀释度为1∶5 000,封闭液和稀释液用含0.4％ BSA的PBST.采用该方法对127份临床样品进行检测,结果显示,与商品试剂盒检测结果比较符合率达到90.00％.因此,该研究建立的流行性乙型脑炎间接ELISA检测方法具有良好的稳定性和可重复性,并具有较高的特异性和敏感性.  相似文献   

重组日本乙型脑炎病毒NS1的可溶性表达及抗原性分析     

周丹娜  梁望旺  郭锐  段正赢  罗明杰  杨克礼  袁芳艳  刘泽文  田永祥 《湖北农业科学》2012,(2):358-360,366

根据日本乙型脑炎病毒(JEV)Whe株非结构蛋白质1(NS1)的基因序列,设计引物,利用反转录PCR从实验室保藏JEV Whe株中克隆NS1全长序列,并将其插入pET28a表达载体,构建重组表达质粒NS1-pET28a,转化大肠杆菌BL21(ED3),经IPTG诱导,得到可溶性表达的融合蛋白质His-NS1。结果表明,该融合蛋白质分子量为46ku,大量表达于上清中。镍离子亲和层析柱进行纯化得到His-NS1蛋白质,经Western-blot检测,证明其具有良好的免疫学活性,这为进一步研究JEV NS1的功能及应用奠定了基础。  相似文献   

H1N1猪流感病毒HA基因在毕赤酵母中的表达     

袁芳艳;刘泽文;周丹娜;杨克礼;段正赢;郭锐;田永祥 《湖北畜牧兽医》2013,(9):5-8

利用RT-PCR扩增H1N1亚型猪流感病毒HA基因,亚克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9K中,构建分泌型重组表达载体pPIC9K-HA。将线性化的pPIC9K-HA电转化毕赤酵母菌GS115。将经MD平板筛选和PCR鉴定的阳性菌株用G418筛选多拷贝重组子。最后用1%甲醇诱导表达重组子,经SDS-PAGE和Western-blot检测,H1N1亚型猪流感病毒HA基因在毕赤酵母中成功得到了表达,产物约60.4KD,并具有免疫活性。本研究为进一步研究猪H1N1亚型猪流感病毒HA基因的功能及检测方法奠定了基础。  相似文献   

猪流行性腹泻的综合防制     

郭锐  田永祥  周丹娜  段正赢  杨克礼  戴德强  王红 《国外畜牧学(猪与禽)》2013,33(10):85-87

猪流行性腹泻（PED）是由猪流行性腹泻病毒（PEDV）引起的、以水样腹泻、呕吐、脱水和食欲下降为主要特征的、一种急性、高度接触性肠道传染病,近年来给养猪业带来了巨大的经济损失.笔者主要对从病原学、流行病学、致病机理、诊断方法以及防制措施进行了综述,为该病的综合防控提供参考.  相似文献   

仔猪红黄痢疫苗的最小免疫剂量、免疫持续期和保存期试验     

刘泽文  袁芳艳  刘威  周丹娜  杨克礼  郭锐  段正赢  田永祥 《华中农业大学学报》2019,38(2):88-93

用大肠杆菌K88、K99、987P菌株和C型产气荚膜梭菌制备成仔猪大肠杆菌病、C型产气荚膜梭菌病二联灭活疫苗(仔猪红黄痢疫苗),以不同剂量的疫苗免疫怀孕母猪,然后对其所产仔猪用发病剂量的相应菌株进行攻毒,同时将连续3批疫苗置2～8℃保存,分别于保存后的不同时间取样进行保存期试验。结果发现,用1.6mL以上剂量疫苗免疫组仔猪的攻毒保护率均在80%以上。通过对免疫母猪所产的1、4、7和10日龄仔猪进行攻毒,仔猪的攻毒保护率均不低于80%,说明疫苗免疫产生期为仔猪吸食初乳后24h内,仔猪被动免疫持续期为7d以上。疫苗保存期检测结果显示,疫苗保存27个月后,疫苗的性状检验合格,对怀孕母猪安全,疫苗免疫母猪所产仔猪攻毒保护率均不低于80%。因此,确定疫苗的最小免疫剂量为1.6mL,仔猪被动免疫持续期为7d以上,疫苗保存期为2～8℃保存24个月。  相似文献   

仔猪黄痢大肠杆菌的分离鉴定     

刘泽文  袁芳艳  刘威  高婷  周丹娜  杨克礼  段正赢  郭锐  梁婉  田永祥 《湖北农业科学》2019,58(23)

湖北省红安县某猪场新生仔猪发生一种以剧烈腹泻、排出黄色粪便并迅速脱水死亡为主要症状的疾病,经病原分离、革兰氏染色、PCR鉴定、生化试验和血清型鉴定,确定新生仔猪病是由大肠杆菌感染引起。经血清型鉴定,该分离菌株属于纤毛抗原987P型,该菌株对头孢曲松、头孢噻肟较敏感。  相似文献   

猪流行性腹泻病毒HB201602株的分离鉴定及S1基因序列分析     

刘威  袁芳艳  周丹娜  刘泽文  杨克礼  段正赢  郭锐  高婷  梁婉  田永祥 《湖北农业科学》2019,58(24)

从湖北地区规模化养殖场疑似腹泻病料中成功检测并分离获得了一株猪流行性腹泻病毒,分离毒株感染Vero细胞可引起明显的细胞病变,病毒效价达1.0×105.6TCID50/0.1 mL。间接免疫荧光结果显示HB201602感染细胞后,能被抗PEDV S蛋白的特异性单克隆抗体所识别,进一步证实所分离毒株为PEDV病毒。基于S1基因构建了系统发育树,表明2011年后分离的毒株大多以G2型变异毒株为主,HB201602属于G2-a亚型(变异毒株)簇。S1基因遗传变异分析发现G1-b亚型毒株与其他簇毒株相比存在9个特异的氨基酸突变,G1-a亚型经典毒株存在4个特异的氨基酸突变,S1基因的变异分析将有助于了解PEDV的遗传变异趋势,为新型疫苗的研发提供依据。  相似文献   

鄂西山区猪圆环病毒2型感染的血清学调查     

杨克礼  杨年信  田永祥  田云华  段正赢  郭锐  王文丽  米选高 《国外畜牧学(猪与禽)》2016,(10):33-36

为了解鄂西山区猪群中猪圆环病毒2型的感染情况,应用ELISA方法对鄂西山区2013-2015年间的1260份不同年龄段的猪血清进行PCV2抗体检测,同时检测了PRRSV、PRV g E及CSFV抗体,结果表明PCV2抗体检测平均阳性率为56.75%(715/1260),不同猪群的检测结果表明,公猪的PCV2抗体阳性率最低为20%(4/20),保育猪PCV2抗体阳性率最高为66.67%(204/306);全部未免疫PRRSV疫苗猪的PRRSV抗体平均阳性率为48.45%(344/710),PRV g E抗体平均阳性率为23.73%(299/1260),而CSFV免疫抗体平均阳性率仅为71.35%。同时发现PCV2抗体感染率高的猪场PRRSV、PRV的感染率也相对较高,而CSFV的免疫抗体阳性率则相对较低。本研究结果表明PCV2感染在鄂西山区猪群中普遍存在,且与PRRSV、PRV的感染具有一定的相关性。  相似文献   

两株A型禽流感病毒NP基因的PCR扩增及序列分析     

刘泽文  徐涤平  周平华  段正赢  汪宏才  杨峻 《动物医学进展》2004,25(3):96-98

研究选择 AIV NP基因为目的基因 ,设计了一对特异性引物 ,筛选出最佳的 RT-PCR扩增条件 ,特异性地扩增出了两株 A型禽流感病毒的部分 NP基因片段 ,并对其进行了序列分析 ,结果表明 ,两株来源于不同禽类的 AIV的NP基因同源率高达 92 %。AIV NP基因结构具有高度保守性  相似文献   

大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位基因的原核表达     

梁望旺  周丹娜  刘泽文  伍锐  杨克礼  段正赢  邓均华  徐涤平 《湖北农业科学》2009,48(11)

大肠杆菌(Escherichia coli)不耐热肠毒素B亚单位(LTB)不仅是重要的黏膜免疫原,而且作为佐剂在黏膜免疫中起着重要的作用.试验采用PCR方法扩增了肠毒素性大肠杆菌的LTB基因,并将其克隆到pGEX-KG原核表达栽体上,构建了重组质粒pKG-LTB,经酶切和测序鉴定后,转化到大肠杆菌BL21(DE3)进行IPTG诱导表达,经SDS-PAGE和Western-blot分析表明,克隆的LTB基因与谷胱甘肽转移酶(GST)基因获得了高效融合表达,表达的融合蛋白GST-LTB分子量约为35kDa,并具有免疫反应活性.这为进一步研究LTB蛋白黏膜免疫原性和黏膜佐剂的作用奠定了基础.  相似文献