牛支原体黏附宿主细胞间接免疫荧光检测方法的建立     

李明霞  陈胜利  郝华芳  赵萍  季文恒  王展慧  刘永生  殷宏  储岳峰 《中国兽医学报》2018,(7)

牛支原体可引起牛肺炎、乳腺炎和关节炎等多系统炎症,关于其黏附宿主细胞的机理有待深入研究。本试验以牛支原体08M株和牛肾细胞MDBK为研究对象,抗牛支原体多克隆抗体为一抗,FITC标记的兔抗牛IgG为二抗,通过优化牛支原体黏附滴度、黏附时间及一抗、二抗工作浓度,建立牛支原体黏附宿主细胞的间接免疫荧光检测方法。最终确定牛支原体的最适黏附滴度为1×109 CFU/mL,黏附时间为4h,一抗最适工作浓度为1∶250,二抗最适工作浓度为1∶250。本试验建立的间接免疫荧光方法可用于牛支原体黏附宿主细胞的检测,为牛支原体体外感染的检测及黏附机理的研究提供有效的技术手段。  相似文献   

微小牛蜱4D8基因原核表达及免疫原性分析     

刘军龙  关贵全  李有全  马米玲  刘爱红  任巧云  殷宏  罗建勋 《动物医学进展》2009,30(10):11-14

按GenBank已知微小牛蜱的4D8基因核苷酸序列设计1对表达引物。提取微小牛蜱幼蜱总RNA,反转录合成双链cDNA,用设计的表达引物扩增出4D8基因,扩增得到的核苷酸长486 bp,编码161个氨基酸,该蛋白预计分子质量为18 ku。将该基因亚克隆到原核表达载体pGEX4T-1,构建重组原核表达载体pGEX4T-1-4D8,转化BL21宿主菌,经IPTG诱导,可成功表达。重组融合蛋白分子质量为45 ku左右,与预期大小一致。Western blot显示,兔抗微小牛蜱唾液腺、肠道和卵巢抗体能够识别重组表达蛋白。  相似文献   

甘肃省景泰县羊无浆体病的诊断     

孙明  刘志杰  马米玲  关贵全  罗建勋  殷宏 《动物医学进展》2012,33(4):114-117

为建立羊无浆体病简便快捷的病原学检测方法,论文以马米玲等已建立的边缘无浆体MSP5重组抗原间接ELISA检测方法对甘肃省景泰县多地采集的219份田间样品进行羊无浆体ELISA检测,以PCR检测方法进行病原学的检测和验证。同时为进一步验证MSP5基因在边缘无浆体和羊无浆体之间的保守性,Western blot检测证实边缘无浆体重组蛋白在45ku处与羊无浆体阳性血清反应,与羊其他病原阳性血清均不反应,表明该重组蛋白适合作为羊无浆体病的诊断抗原。在被检的219份样品中,ELISA方法检测阳性率为34.7%(76/219),PCR方法阳性率为30.6%(67/219),证实该地区存在羊无浆体病,与以往调查结果相比,阳性率有所下降。利用边缘无浆体MSP5重组抗原建立的EILSA方法具有良好的特异性和敏感性,可以检测羊无浆体病,为羊无浆体病的血清学诊断及流行病学调查提供了手段。  相似文献   

猪无名高热病中PRRSV的RT-PCR检测(简报)     

杨若耶  曾巧英  殷宏 《甘肃农业大学学报》2009,44(3)

为检测2006年在江西、湖北和湖南爆发的无名高热病是否由PRRSV引起,根据GenBank中登录的PRRSV(登录号:AF046869)ORF5序列设计引物,用RT-PCR方法对江西、湖北、湖南采集来的9份病料(包括肝脏、脾脏、血液)进行检测,并分析其与PRRSV ORF5序列的同源性.结果表明:所有病料中均检测出PRRSV,且3省的PRRSV的ORF5序列同源性高达95%以上,但与已发表的PRRSV ORF5的同源性只有88%左右,说明PRRSV和猪的无名高热病紧密相关,且产生了较高的变异.  相似文献   

口蹄疫基因工程疫苗研究进展   总被引：1，自引：0，他引：1  

杨生海  殷宏  张杰  刘永生  陈豪泰  马丽娜  马艳平  丁耀忠 《江西农业学报》2009,21(4)

介绍了口蹄疫在世界范围内暴发流行的现状及其疫苗的研究应用,重点综述了各种口蹄疫基因工程疫苗的研究进展。  相似文献   

犊牛粪便中益生菌的分离与鉴定     

韩元  李禤  郭鹏飞  关贵全  刘军龙  刘爱红  罗建勋  殷宏  李有全 《中国奶牛》2018,(7)

为了筛选出能够抑制犊牛腹泻的益生菌株,本研究采集了20份健康犊牛新鲜粪便,采用厌氧培养、形态学观察以及分子鉴定技术,初步分离得到3株革兰氏阳性杆菌(A1、A2和A3)和4株革兰氏阳性球菌(B1、B2、B3和B4),并对这些菌株进行分子鉴定。鉴定结果表明:A1和A2均为罗伊乳杆菌,A3为黏膜乳杆菌;B1为坚强肠球菌,B2为海氏肠球菌,B3和B4均为屎肠球菌。本研究为防治犊牛腹泻提供了更多的候选菌种。  相似文献   

甘肃、青海和宁夏地区牛病毒性腹泻病毒Erns基因的变异分析     

高闪电  王锦明  田占成  独军政  王建东  常惠芸  关贵全  李有全  殷宏 《畜牧兽医学报》2021,52(11):3157-3164

分析2013—2019年中国西北部分省区不同基因亚型牛病毒性腹泻病毒（BVDV）抗原基因E^rns的分子特征,了解其遗传演化规律。从甘肃、青海、宁夏规模化牛场送检的疑似牛病毒性腹泻发病牛150份EDTA抗凝血提取总RNA,利用RT-PCR扩增病毒基因组E^rns-E1区,克隆测序后比对,构建系统进化树进行遗传演化关系分析。利用牛肾细胞MDBK对检出的不同基因亚型BVDV进行分离,并鉴定其生物型。RT-PCR扩增结果表明,BVDV总体阳性率为37.33%,其中甘肃省、青海省、宁夏回族自治区BVDV阳性率分别为37.68%、35.71%、40.00%。获得56份E^rns-E1 DNA,克隆测序获得33条不同的E^rns序列,长度均为681 bp,分析表明流行株分属10个BVDV基因亚型：BVDV-1a （2株）、BVDV-1b （5株）、BVDV-1c （1株）、BVDV-1d （3株）、BVDV-1m （11株）、BVDV-1o （1株）、BVDV-1p （4株）、BVDV-1q （4株）、BVDV-1v （1株）、BVDV-2a （1株）。分离获得BVDV-1a亚型、BVDV-1b亚型、BVDV-1v亚型、BVDV-2a亚型分离株各1株,BVDV-1 d亚型分离株2株,均为非致细胞病变型。各亚型株间E^rns基因核苷酸相似性以BVDV-1a～1d经典亚型株（79.8%～85.9%）或1m～1q及1v新亚型株（81.0%～87.3%）较高,以BVDV-1 m和BVDV-1p流行株亚型间相似性最高（87.3%）。各亚型株E^rns基因编码蛋白的RNA酶活性位点以及双链RNA作用基序（₁₃₉KKGK₁₄₂）保守,但E^rns第26位糖基化位点（26 NRSL）在1m～1q、1v亚型株移位（24 NVSR）。首次以E^rns核苷酸序列构建系统进化树,结果显示1m～1q及1v等亚型BVDV株在进化上关系较为密切。本研究首次选用E^rns靶标基因对甘肃、青海、宁夏部分省区牛源BVDV株进行同源性及系统进化分析,发现10个基因亚型流行株,以1m亚型株最为普遍,1m～1q及1v等亚型株亲缘关系密切。  相似文献   

人血清用于体外培养牛巴贝斯虫     

Mish.  AK 殷宏 《国外兽医学(畜禽疾病)》1994,15(2):40-42

在牛巴贝斯虫的培养中，使用不同含量人血清和牛血清混合物，如：２０％＋２０％，３０％＋１０％，４０％＋０％，０＋４０％以及１９９培养液。牛巴贝斯虫稳定株接种给小犊牛，在染虫率６％时使用。培养液每隔２４小时更换一次，每间隔２４小时培养液的颜色由鲜红变为深咖啡色，红细胞染虫率的增加在２４－２８小时内最大。同时也观察到红细胞染虫率在１：２稀释明显高于１：１稀释。在培养液Ⅰ中，５０％牛血清被人血清替代，红细  相似文献   

牛中华泰勒虫新种(梨形虫亚目:泰勒虫科)2.分子分类学研究   总被引：6，自引：0，他引：6  

白启  刘光远  殷宏  赵启祖  刘德考  任家信  李新 《畜牧兽医学报》2002,33(2):185-190

分离自我国甘肃中部地区土种黄牛的一种形态特异的泰勒虫，采用传统分类学研究鉴定为新种，被定名为中华泰勒虫（Theileria sinensis sp.nov）。又利用对泰勒虫属特异的PCR引物（92/93）对该种基因组DNA扩增，结果表明该种属泰勒虫属原虫确定无疑，并对代表虫种进化和分类的18S rRNA基因序列进行了测定，对已测出该基因1067bp长片断序列与基因库中9种巴贝斯虫，7种已知牛泰勒虫的相应序列进行比较、分，建立起系统发生树。树图表明，瑟氏泰勒虫和水牛泰勒虫的亲缘关系非常近， 中华泰勒虫与这两个种的亲缘关系较近，与附膜泰勒虫、小泰勒虫、环形泰勒虫、斑羚泰勒虫、突变泰勒虫差异较大。  相似文献   

长角血蜱对牛大巴贝西虫的经卵传递试验研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

吕文顺  殷宏 《中国兽医科技》1990,(6):5-6

  相似文献