边缘无浆体MSP5基因序列分析及其融合蛋白的纯化     

马米玲  殷宏  李有全  高金亮  关贵全  刘志杰  刘爱红  刘军龙  任巧云  罗建勋 《动物医学进展》2008,29(8)

参照已发表的主要表面蛋白5（MSP5）基因的核苷酸序列,设计了一对特异性引物,以边缘无浆体基因组DNA为模版。采用PCR技术扩增获得了MSP5基因;将其克隆到pGEM—TEasy载体,并进行测序分析,结果表明,克隆的MSP5基因与GenBank上登录的Florida株MSP5基因的序列同源性达98．6％,编码氨基酸的同源性为99％,并且该序列包含有完整的开放阅读框,大小为633bp。将该基因亚克隆入原核表达载体pGEX-4T-1,构建了重组原核表达载体。将其转化到DH5a宿主茵中,用IPTG进行诱导表达,实现了融合表达。表达产物的分子质量为45ku。Western blot分析表明,此表达产物能够被抗边缘无浆体阳性血清所识别。通过裂解、洗涤、变性、复性等方法对包涵体蛋白进行处理,获得的纯化产物浓度为1mg／mL。  相似文献   

蜱的化学和免疫学防治研究进展   总被引：3，自引：0，他引：3  

郝雪峰  殷宏  罗建勋 《动物医学进展》2008,29(12)

蜱既是常见的吸血外寄生虫,又是人和动物许多重要疾病的传播媒介。大量的蜱叮咬宿主动物可导致宿主消瘦、贫血,同时也使动物皮革的质量降低。作为传播媒介,蜱由于可传播原虫、立克次体、支原体、衣原体、螺旋体、细菌和病毒等,在世界范围带来了很大的经济损失。有很多蜱的防治策略,但均存在不足之处,目前主要以化学和免疫学防治为主。利用化学防治较为普遍,但由于使用不当已造成了蜱的耐药性和环境污染。蜱的免疫学防治主要是开发抗蜱疫苗,接种商品化的抗蜱疫苗被证实是一种可行的防治策略,因此疫苗将在未来对蜱的防治中起举足轻重的作用。  相似文献   

羊尤氏泰勒虫病的病理学观察     

李有全  罗建勋  关贵全  马米玲  高金亮  刘志杰  党志胜  刘爱红  任巧云  刘军龙  鲁炳义  陈怀涛  白启  魏永红  牛庆丽  田占成  殷宏 《畜牧兽医学报》2008,39(11)

对尤氏泰勒虫人工感染的绵羊进行了病理学观察。主要的组织病变：淋巴结充血、出血及淋巴窦网状内皮细胞增生;肺脏出血,间质淋巴细胞和网状细胞增生,肺泡隔增厚;肾小球内皮细胞、血管内皮细胞增生,淋巴网状细胞灶状积累,甚至形成结节;心肌细胞变性、坏死,染色不均;肠道固有膜明显充血、出血;肝细胞颗粒变性,有散在细胞坏死,汇管区和小叶间有淋巴网状细胞增生;瘤胃黏膜下层有散在性出血,肌层见灶状出血。  相似文献   

亚洲璃眼蜱成蜱不同发育期miR-451与MIF表达谱的动态分析     

罗金  袁小松  郝佳伟  田占成  谢俊仁  陈泽  任巧云  殷宏  罗建勋  刘光远 《中国农业科学》2015,48(21):4366-4373

【目的】microRNA （miRNA）作为一类内源性的非编码RNA,仅有18-25 nt,其广泛存在于动植物细胞中,可诱导生物基因沉默,参与细胞生长、发育、基因转录和翻译等诸多生命活动的调控过程。以亚洲璃眼蜱为研究对象,对miR-451及其靶基因（巨噬细胞游走因子, MIF）在相互作用关系进行分析。【方法】参考miR-451成熟体序列（AAA CCG UUA CCA UUA CUG AGU UU）来自研究单元亚洲璃眼蜱高通量测序所获得的结果。根据该成熟体序列设计stem-loop及PCR引物,RT-PCR扩增获得蜱源性miR-451序列;并对不同物种来源的miR-451序列特征进行分析。基因合成方法获得抑制miR-451的dsRNA序列,用于亚洲璃眼蜱饥饿成蜱体内注射。参考美洲钝眼蜱MIF基因（登录号：AF289543.2）,设计亚洲璃眼蜱的特异性实时荧光定量引物,以β-actin作为内参基因,采用SYBR Green real-time RT-PCR方法检测注射dsRNA后亚洲璃眼蜱饥饿成蜱不同发育时间点MIF基因的表达水平,以及miR-451的表达谱特征。【结果】琼脂糖凝胶电泳检测miR-451的PCR产物条带与预期大小一致,为72 nt。不同物种来源的miR-451具有较高的保守性,特别是种子序列极度保守,仅在短尾负鼠miR-451成熟体的19位点处存在A→U的突变。miR-451的RNA干扰实验证实,0-30 h miR-451表达逐渐上调,6 h达到最高值,其拷贝数为1.0×108。随后表达丰度逐渐降低。30 h其表达水平与PBS对照组相同。48-60 h miR-451再次出现一个表达上调微小变化过程。而miR-451抑制后的MIF直到30 h才有表达的上调,42 h达到峰值（拷贝量仅为9.0×103）,此后其表达规模受到抑制,48 h时与PBS对照组水平一致。84 h后表达才逐渐上调,直到90 h达到峰值,并呈现正态分布趋势。【结论】利用RT-PCR获得亚洲璃眼蜱成蜱阶段miR-451序列,生物信息学方法分析了miR-451序列在不同物种间具有较高保守性。miRNA的保守性决定其靶标基因的特异性,因此,以上结果提示miR-451在动物细胞中可能扮演重要的生物学功能,是MIF功能发挥的一个重要调控因子。MIF作为miR-451靶标基因,其功能的实现可能受该miRNA的调控。基于此类推测qPCR及RNA干扰分析表明,miR-451参与了MIF的表达调控。且是一种负调控作用。当miR-451表达量升高时,MIF表达量明显下调。此研究首次证实miR-451在亚洲璃眼蜱成蜱发育阶段的表达是一种普遍现象,且对MIF存在负调控作用。这一研究为后期miR-451参与蜱的免疫应答及miR-451与靶标基因的相互作用机制提供了参考。同时证明,miRNA参与基因功能的调控具有一定的特异性和时序性。  相似文献   

饱和食盐水漂浮鸡球虫卵囊的用量和处理时间研究     

龚振兴  魏红梅  刘百林  常芳  殷宏  蔡建平 《湖南农业科学》2019,(6)

饱和食盐水是球虫卵囊分离纯化常用试剂,为降低鸡球虫病活疫苗生产成本,试验比较了不同用量的饱和食盐水对柔嫩艾美耳球虫卵囊的漂浮效果,同时研究了饱和食盐水处理柔嫩艾美耳球虫卵囊对其孢子化的影响。结果表明:饱和食盐水的使用量并非越多越好,4～6倍体积的饱和食盐水可获得最佳漂浮效果,且饱和食盐水处理卵囊的时间不宜超过30 min。  相似文献   

尚待命名的牛泰勒虫一新种     

白启  刘光远  殷宏  韩根凤  F.Jangejen  vanderM.Weide  I.J.Nijman 《中国农业大学学报》1998,(Z2)

原始虫株分离自中国甘肃中部地区自然感染带虫牛体(白启等,1995),经接种健康除脾牛大量繁殖后,活虫种保藏在中国兽医原虫资源库。试验用动物均为1～2岁健康除脾黄牛。供试蜱有残缘璃眼蜱(Hyalomma detritum)、长角血蜱(Heamaphysalis longicornis)、青海血蜱(H.qinghaiensis)、森林革蜱(Der-macentor silvarum)、微小牛蜱(Boophilus microplus),均系本实验室培育繁殖的清洁蜱。蜱的感染和传播试  相似文献   

牛的巴贝斯虫18S rRNA基因序列比较研究   总被引：10，自引：2，他引：10  

罗建勋  殷宏  刘光远  关贵全  刘志杰  刘爱红  党志胜  马米玲  鲁炳义  孙彩琴  白启  吕文顺  陈溥言 《畜牧兽医学报》2005,36(9):906-911

对中国已报道的8株牛的巴贝斯虫（包括1株牛巴贝斯虫、1株双芽巴贝斯虫、1株大巴贝斯虫、3株卵形巴贝斯虫和2株巴贝斯虫未定种）的18S rRNA基因序列进行了测定与比较。自感染动物的血液中纯化虫体，提取基因组DNA，PCR扩增靶基因，然后将其连接到pGEM—T Easy载体上，进行克隆测序。研究结果显示：牛的巴贝斯虫18S rRNA基因大小在1653～1699bp之间；用所测得的和自GenBank下载的各种动物的巴贝斯虫18S rRNA基因序列构建了系统发生树，发现由刻点血蜱传播的大巴贝斯虫伊犁株与由长角血蜱传播的3株卵形巴贝斯虫存在明显差别，应属于2个独立种；由小亚璃眼蜱传播的牛巴贝斯虫未定种不同于目前已报道的任何种类，在中国应为一个新种。因而，中国存在5种牛的巴贝斯虫，即：牛巴贝斯虫，双芽巴贝斯虫、大巴贝斯虫，卵形巴贝斯虫和巴贝斯虫未定种。  相似文献   

甘肃省牛蜱传性血液原虫生物学特性研究及病原的分离     

罗建勋  殷宏  吕文顺 《中国兽医杂志》1998,24(5):9-11

用病原检查法对甘肃省４２个县市的１３１１头牛进行了牛蜱传性血液原虫病的大面积调查,证实该省牛蜱传染性血液原虫的种类为双芽巴贝斯虫,大巴贝斯虫,瑟氏泰勒虫,环形泰勒虫及国边虫等５种病原,  相似文献   

小亚璃眼蜱对牛巴贝斯虫未定种和环形泰勒虫传播的试验研究     

罗建勋  殷宏  关贵全  马米玲  孙彩琴  鲁炳义  白启  吕文顺  陈溥言 《畜牧兽医学报》2005,36(11):1197-1201

利用蜱传播试验确定小亚璃眼蜱对中国新分离的牛的巴贝斯虫未定种和环形泰勒虫的传播能力与传播方式，进而明确其在中国牛梨形虫病传播中的流行病学意义。试验结果表明：小亚璃眼蜱可在雌虫阶段受到巴贝斯虫未定种的感染，并可在次代若虫（2／2）和成虫（3／3）阶段将病原传播给试验牛；小亚璃眼蜱幼虫和若虫吸入环形泰勒虫，饱血脱落的幼虫和若虫所蜕化发育的饥饿若虫（2／2）和成虫（2／2）均可将病原传递给敏感动物；感染巴贝斯虫未定种的小亚璃眼蜱饱血雌虫所孵育出的次代幼虫和若虫仍可被环形泰勒虫感染，所发育出的若虫（2／2）和成虫（2／2）可在一次传播试验中将环形泰勒虫和巴贝斯虫未定种同时传播给试验动物。  相似文献   

猪繁殖与呼吸综合征   总被引：1，自引：0，他引：1  

杨生海  殷宏  刘永生  张杰  陈豪泰  孙德惠 《动物医学进展》2008,29(8)

猪繁殖与呼吸综合征1987年首次于美国暴发,该病主要经胎盘感染,引起怀孕母猪流产、死胎及木乃伊胎。猪繁殖与呼吸综合征几乎存在于世界上每一个养猪国家。论文就猪繁殖与呼吸综合征的病原特征、基因结构、结构蛋白、流行特征、病理变化与症状、演化、疫苗的应用等方面进行综述。  相似文献