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通过反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增出了狂犬病无毒疫苗株(SRV9)糖蛋白(G)基因膜外主要功能区的两个片段,共约740个bp(450~1144),含有可以诱导中和抗体的两个抗原决定簇和决定毒力及与神经细胞受体结合部位的基因片段。通过平端连接将两片段克隆到pUC18的SmaI位点。采用Sanger双脱氧终止法测定cDNA片段的核苷酸序列,并推导出其氨基酸序列。将这一序列与已发表的狂犬病病毒SADB19株的相应序列通过计算机进行比较分析。结果证明两者核苷酸序列的同源性为98.6%,推导氨基酸序列的同源性为95.9%,主要抗原区内的几个重要氨基酸(如333位精氨酸等)发生了变异,糖基化位点也改变。 相似文献
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前言我国东北地区一些鹿场暴发了疑似鹿“狂犬病”。作者等调查了9个发病鹿场, 患鹿临床表现以中枢神经症状为主,有的狂暴,有的截瘫,发病率为14—25%,致死率为100%,病程经过24—72小时,死亡梅花鹿400余头,经济损失很大。本病只在 相似文献
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应用RT-PCR扩增猪瘟病毒(HCV)石门株部分p23和p14基因,然后采用平端克隆法将扩增的cD-NA克隆到pUC19的SmaⅠ位点,用双脱氧终止法对重组质粒中的插入片段进行序列分析。将所测定的序列与其他10株HCV相同基因区域用DNASIS计算机软件进行同源性比较和系统树分析,结果表明,大部分毒株为同一个型,该型共包括9个HCV株,以Brescia株为代表,石门(Shimen)株也属该型;而Alfort株和P97株与上述9个毒株差异较大,不属同一型。 相似文献
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中国猪瘟兔化弱毒株(C-株)兔脾组织毒主要保护性抗原E2(gp55)基因序列分析 总被引:7,自引:2,他引:5
利用反转录(RT)及套式PCR(N-PCR)方法扩增了中国猪瘟兔化弱毒株(C-株)兔脾组织毒主要保护性抗原E2(gp55)基因,成功地将其克隆并测定了核苷酸序列,与国内外已发表的猪瘟病毒(HCV)E2基因序列比较的结果是C-株兔脾毒与C-株细胞(SK6)毒、C-株疫苗(犊牛睾丸细胞,HCLV-C)毒、HCV-SM株(石门)毒、Brescia株(荷兰)毒、Alfort株(德国)毒的E2核苷酸序列同源性分别为98.87%、98.34%、94.58%、91.00%、80.78%;氨基酸同源性分别为98.95%、97.37%、94.22%、91.60%、89.23%。对C-株兔脾毒与C-株细胞毒、经典强毒及国内流行野毒E2上的A、B、C三个中和性抗原区的氨基酸组成进行了比较,其结果为C-株兔脾毒与C-株细胞毒的差异很小甚至没有差异,而与流行野毒及经典强毒在B、C区有较大的差异。我国经典强毒石门毒与国内80年代和90年代流行毒之间有明显的差异,表明我国猪瘟流行毒株发生了变化。 相似文献
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68.
应用Bac to Bac 系统表达NDV长春株HN蛋白基因 总被引:2,自引:1,他引:1
将质粒pKSHNC利用BamHI和XbaI双酶切后回收。将转座载体pFast BacI同样方法酶切、回收。将回收的HNC与pFastBacI连接,使目的基因亚克隆到pFast BacI上的ocu基因启动子下游的MCS上,然后转化E.coliDH5α,以LB/AMP+GM平板筛选阳性重组子,经酶切鉴定,再转化至Ecoli DH10Bac感受态细胞中,经抗性培养和蓝白斑筛选,挑取白色菌落为阳性重组表达载体,经酶切鉴定后,命名为Bacmid HNC。经小量提取后,转染sf-9细胞,27℃培养72h,应用SDS-PAGE和Western-blot检测和鉴定表达的HN蛋白。结果表明,本研究成功地构建了BacmidHN重组表达载体,本研究成功地构建了BacmidHN重组表达载体,并在sf-9昆虫细胞中表达了NDV长春株HN基因,SDS-PAGE出现一条特异性泳带,约74kDa,Western-blot结果出现一条杂交带,分子量与之相同,进一步证明我建的重组表达载体表达了NDV长春株HN基因。 相似文献
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牛BLG/hEPO和大鼠WAP/hEPO基因在家兔乳腺中的表达 总被引:1,自引:1,他引:0
将人红细胞生成素 (h EPO)基因组 DNA(g DNA)与 1.1kb牛 β-乳球蛋白 (BL G)基因的 5′端上游调控序列融合 ,构建了 p CMV- BL G- EPO- b GH poly A(p CBEA)乳腺定位表达载体。该载体与已构建的大鼠乳清酸蛋白 (WAP)基因 5′端上游调控序列和 h EPO融合基因 p WAP- EPO- WAP3′U TR(p WE3′)和 p CMV- WAP- EPO- b GH poly A (p CWEA )经脂质体包裹后 ,通过显微外科方法 ,经乳腺导管注入妊娠中后期家兔乳腺内 ,进行短暂表达。于家兔分娩后 1~ 2 5 d采奶 ,EL ISA检测乳汁中 EPO含量 ,3个载体均获得表达。表达水平从高到低依次为 p CWEA、p CBEA、p WE3′;表达量为 0 .116~ 0 .75 3μg/ L ,且表达一直持续整个泌乳期 相似文献
70.
人胰岛素基因杆状病毒表达载体的构建及其在Sf9细胞中的表达 总被引:4,自引:0,他引:4
对人胰岛素基因真核表达载体(pCMA/mINS)进行Xho I酶切,回收的含人胰岛素基因组基因的1608bp片段与线性化的杆状病载体pFast Bac I进行连接,获得重组载体pFast/mINS。将该重组载体转化DH10Bac感受态细菌,在体内进行重组,并经2次抗性与蓝白斑筛选,得到杆状病毒重组载体Bacmid/mINS。将该载体转染Sf9细胞,获得了重组杆状病毒,经Tricine-SDS-PAGE和Western-blotting检测,重组杆状病毒在Sf9细胞中的表达产物是胰岛素原,而细胞培养上清中未检测到胰岛素和胰岛素原。 相似文献