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[目的]研究犬IL-2基因的克隆和表达,为开发新型免疫增强剂和基因工程疫苗提供理论支持。[方法]从犬全血中分离出白细胞,经刀豆素刺激培养20 h后,提取总RNA;根据GenBank中犬IL-2基因序列,设计1对引物,进行PCR扩增,并构建原核表达载体pET-28a,将其转化到宿主菌BL21中,经IPTG诱导表达,表达产物用SDS-PAGE进行分析。[结果]RT-PCR扩增出一条约500 bp的条带,与预期结果相符;重组质粒pMD18-T-IL2经双酶切后,产生一个约500 bp基因片段,说明目的基因被成功克隆;表达载体pET-28a-IL2经双酶切和PCR鉴定后,分别产生一个约500 bp目的片段,表明表达载体构建成功;表达产物经SDS-PAGE分析,分子量约为20 kDa,与预期蛋白大小基本相同。[结论]犬IL-2基因被成功克隆和表达。 相似文献
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为了构建端粒酶逆转录酶表达载体,用带有绿色荧光蛋白报告基因的载体pEGFP-C1和带有hTERT cDNA的载体pCL-Neo-hTERT,通过基因重组构建新的载体pEGFP-hTERT,转化后筛选阳性克隆进行酶切鉴定;pEGFP-hTERT载体通过脂质体介导法转染纯化后的牛A型精原细胞,观察绿色荧光表达,G418筛选阳性克隆。结果表明,pEGFP-hTERT载体与预设计的一致;pEGFP-hTERT载体转染牛A型精原细胞后,经筛选获得了1个表达绿色荧光蛋白的阳性细胞克隆。由此可见,hTERT表达载体得到了成功构建,并在牛A型精原细胞中实现了表达。 相似文献