家蚕副肌球蛋白/小副肌球蛋白基因的克隆及进化分析     

徐升胜  李兵  许西奎  沈卫德 《安徽农业科学》2009,37(18):8377-8379

[目的]克隆家蚕副肌球蛋白／小副肌球蛋白基因,分析该基因与运动性状的关系。[方法]利用PCR扩增和RACE技术获得了家蚕（Bombyx mori）副肌球蛋白的全长cDNA和小副肌球蛋白的部分cDNA;经检索家蚕wgs（基因组散弹序列）数据,获得了家蚕副肌球蛋白／小副肌球蛋白的基因组序列,并确定其基因组结构。[结果]家蚕PM/mPM基因由17个外显子和16个内含子组成,通过基因内部选择性启动子的使用,该基因组序列同时编码副肌球蛋白和小副肌球蛋白,小副肌球蛋白和副肌球蛋白共用最后6个外显子。家蚕副肌球蛋白与其他无脊椎动物副肌球蛋白的聚类分析表明,家蚕和野桑蚕有最近的亲缘关系,在昆虫纲中与黑腹果蝇关系最远。[结论]家蚕和野桑蚕副肌球蛋白的氨基酸序列间不存在可引起飞行缺陷的点突变,推测家蚕和野桑蚕飞行能力差异存在其他调控机制。  相似文献   

蜕皮激素诱导家蚕蜕皮激素受体和超气门蛋白基因的表达变化     

苏保锦  吴玉  赵斯斯  赵国栋  卫正国  李兵  沈卫德 《蚕业科学》2012,38(2):257-263

昆虫蜕皮激素受体(ecdysone receptor,EcR)是一种核内受体,为蜕皮激素的分子靶标。用0.002 g/L蜕皮激素溶液浸泡过的桑叶饲喂家蚕5龄幼虫,采用双跟踪标定定量PCR(dual-spike-in qPCR)方法,检测家蚕蜕皮激素受体基因BmEcR-A、BmEcR-B1和超气门蛋白(ultraspiracle,USP)基因BmUSP在家蚕幼虫马氏管、脂肪体、中肠组织的转录水平变化,分析蚕体组织以及BmEcR和BmUSP基因在蜕皮激素代谢过程中的作用与表达调控特征。结果表明:家蚕EcR的2种同工型基因BmEcR-A和BmEcR-B1的mRNA转录水平均变化显著,在脂肪体中的转录水平最高,其它组织相对较低;BmUSP的mRNA转录水平同样变化显著,且在脂肪体中的转录水平最高,马氏管次之,中肠最低。另检测正常情况下4龄眠期和5龄末期BmEcR-A、BmEcR-B1和BmUSP的mRNA转录水平相对于其它发育时期较高,且脂肪体中的转录水平要明显高于其它组织。BmEcR-A、BmEcR-B1和BmUSP均在家蚕幼虫脂肪体中高水平表达,表明了脂肪体在蜕皮激素代谢过程中的重要性。  相似文献   

菊酯类杀虫剂和昆虫的抗药性关系研究进展     

王举梅  李兵  沈卫德 《浙江农业科学》2010,(3):570-575

综述昆虫对菊酯类杀虫剂的抗性产生情况,抗性的机理及分子机制,抗性的检测及控制的研究进展,为研究菊酯类杀虫剂抗性治理策略提供参考依据。  相似文献   

家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂基因serpin-6在不同发育时期的表达分析     

俞燕芳  查宏贤  王彦云  卫正国  李兵  陈玉华  许雅香  沈卫德 《蚕业科学》2010,36(2):341-345

丝氨酸蛋白酶抑制剂(serpin)是一类具有重要生理调控功能的蛋白酶超家族。为研究家蚕serpin-6基因(Bmserpin-6)在蚕体内的功能,利用半定量RT-PCR方法,分析该基因mRNA在家蚕不同发育时期的转录水平。Bmserpin-6基因在家蚕各个发育阶段均有表达,在4龄眠期、5龄6d、吐丝48h(化蛹前)和化蛹6d的转录水平较高,在5龄4d、吐丝初期和蛹末期的转录水平较低。Bmserpin-6基因在5龄期家蚕精巢和卵巢中的表达均呈现先下降后上升的趋势。研究结果表明,Bmserpin-6基因mRNA的转录具有明显的时空特异性,推测其在家蚕不同的变态发育期执行不同的功能。  相似文献   

家蚕品种‘W-1’己_3期雌雄卵可溶性蛋白质表达谱研究     

谢再东  李兵  王举梅  许雅香  沈卫德 《浙江农业学报》2010,22(3)

为探讨家蚕胚胎发育后期雌雄卵可溶性蛋白质组分的差异,用蛋白质双向电泳技术对家蚕卵色限性品种‘W-1’己3期蚕卵可溶性蛋白组成进行了比较分析。结果显示:雄卵(淡黄色)和雌卵(褐色)分别检测到317和335个斑点,能互相匹配的蛋白点273对,其中雄卵特异斑点44个,雌卵特异斑点62个。结果表明:雌雄蚕卵可溶性蛋白质组分存在差异。对特征蛋白进行了基质辅助质量飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)分析,已鉴定的蛋白包括未知的角蛋白、原肌球蛋白同源体5、Sqd基因编码的RNA结合蛋白、转胶蛋白、热激蛋白20.4和原肌球蛋白1。进一步说明性别对胚胎器官和组织的形成有重要的影响。  相似文献   

家蚕生理生化学讲座(五)——第五讲 滞育     

沈卫德 《江苏蚕业》1987,(1)

<正> 蚕在适宜的自然环境中,能顺利地进行生长发育和繁衍后代。但在食物短缺、气候寒冷的冬天,蚕就不可能进行生长发育和繁殖后代。只有成功地渡过这个不良环境,才能维持个体的生存和种族的绵延。蚕卵是不向外界摄取食物的,再加上滞育的卵对低温具有很强的抵抗能力。因此,以滞育卵越冬是蚕战胜不良环境的巧妙手段,这是蚕在长期进化过程中获得的一种适应环境的遗传特性。滞育和冬眠夏蛰是不同的生态现象。冬眠和夏蛰是在动物的任何发育阶段和时期、  相似文献   

5龄家蚕乙酰胆碱酯酶基因的转录水平     

曹雅琪  王彬彬  顾芝亚  张霞  沈卫德  李兵 《江苏农业科学》2012,40(6):45-46,85

乙酰胆碱酯酶(AChE)是有机磷和氨基甲酸酯类物质的作用靶酶.通过半定量PCR的方法测定家蚕4龄眠到上蔟期的2种ace基因的表达量,并测定该时期家蚕的AChE活性,以及5龄3d各组织中2种ace基因的表达量.结果表明,aceI基因在4龄眠到5龄第2天,第6天到第8天的转录表达最较多,第3天到第5天表达量相对较少；ace2基因在4龄眠期转录表达量多,进入5龄后,转录表达量减少且隔天转录表达量大致相同.在5龄中期和后期,AChE各具有1个峰值.5龄3d,acel基因在脂肪体、脑、卵巢中的转录表达量多,在其他组织中表达量较少,其中在血液中最少,ace2基因在脂肪体、精巢、卵巢中转录表达量多,在其他组织中表达量较少.  相似文献   

外源siRNA诱导家蚕先天免疫应答     

何渐鸣  王明慧  毛钰霞  沈卫德  许雅香 《江苏蚕业》2013,(4):1-3

LPS是众所周知的病原体相关分子模式(PAMP),能激活昆虫的先天免疫应答。在LPS和siRNA诱导后相关基因的相似应答说明siRNA在家蚕先天免疫应答中也能充当PAMP。注射siRNA广泛应用于昆虫内源性基因的沉默和研究基因的功能。在这个研究里,我们报道了家蚕在LPS和siRNA诱导后黑化作用相关基因的转录水平。  相似文献   

BmNPV对家蚕BmN细胞周期及周期蛋白基因表达水平的影响     

刘丽华  沈卫德  李兵 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》2014,42(2):41-45

【目的】研究家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori Nucleopolyhedroviruses,BmNPV)对家蚕卵巢细胞系(BmN)细胞周期及细胞周期蛋白基因转录水平的影响。【方法】用BmNPV感染家蚕BmN细胞,分别在病毒感染后的不同时间(12,24,36,48h),应用实时荧光定量PCR方法检测细胞周期蛋白基因CyclinA、CyclinB、CyclinE的表达情况,用流式细胞仪检测细胞周期的变化。【结果】BmNPV感染24h后,BmN细胞出现明显感染症状,变为圆形;48h后细胞核内出现多角体。随着感染时间的延长,CyclinA、CyclinB、CyclinE基因表达量均下降,分别在感染12,24,36h后,表达量降低为0。流式细胞仪检测结果显示,在BmNPV感染后24h左右,抑制于G2/M期的BmN细胞达到68%。【结论】BmNPV感染家蚕BmN细胞后,导致CyclinB、CyclinE基因表达量降低,对CyclinA基因表达量的影响较小;同时BmNPV感染可以将BmN细胞发育抑制于G2/M期。  相似文献   

家蚕核型多角体病毒成纤维细胞生长因子基因的表达和定位     

宋志秀  李兵  王文兵  沈卫德 《蚕业科学》2006,32(2):189-193

为了解杆状病毒基因组中成纤维细胞生长因子基因(fgf)的功能,分离纯化了BmNPV DNA,采用PCR方法获得了BmNPV的fgf基因,并克隆至原核表达载体pET28 a,构建了高效原核表达质粒pET28 af-gf。通过IPTG诱导表达后,经SDS-PAGE检测证实了在27 kD左右有一特异条带,与预测的蛋白质分子量大小一致,并通过N i2+-NTA离子交换树脂亲和纯化了目的蛋白。同时构建了融合GFP的真核表达载体pCDNA3.1-gfp-fgf,通过脂质体转染进入COS-7细胞进行表达和定位观察。fgf基因产物定位于细胞核。  相似文献