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21.
从广西南宁某猪场分离1株病毒(GX-3/98),通过RT-PCR扩增出猪瘟病毒约250 bp的E2基因主要抗原编码区,与猪瘟石门系强毒株及兔化弱毒株核苷酸序列同源性分别为80.6%和81.1%,属于基因Ⅱ群,subgroup 2.1亚型。该毒株经本动物传3代,均不表现典型的猪瘟临床症状。用猪瘟兔化弱毒疫苗免疫后,以此分离病毒攻毒,进行免疫保护相关试验,结果免疫组100%(2/2)获得保护,且在攻毒前、后扁桃体HCFA检测均为阴性。对照组(非免疫猪)攻毒后50%(1/2)死亡,另1头猪耐过。扁桃体HCFA检测,于攻毒后1周开始出现阳性结果,且一直持续到猪死亡的第79天。本试验结果初步表明,我国现行使用的猪瘟兔化弱毒苗对目前猪瘟病毒流行毒株仍具有良好的保护力。GX-3/98流行株为1株毒力较低的猪瘟病毒,能够长时间散毒。  相似文献   
22.
由上海申港机械厂(200042)研制生产,采用先进的辊轮式结构,平进干出,颗粒含水量低于10%,在加工颗粒饲料过程中能加入各种添加剂,营养损失极微,且便于密封后贮存,可广泛用于各类养殖业加工饲料的需要。主要型号及技术参数如下:GNJ型高效颗粒饲料机@涂长春  相似文献   
23.
应用套式PCR分段扩增犬瘟热病毒融合蛋白的全基因   总被引:2,自引:0,他引:2  
为研究犬瘟热病毒(CDV)融合蛋白各段功能,根据CDVOnderstepoort弱毒株的融合蛋白基因序列,设计合成了10条寡聚核苷酸引物。对此10条引物进行不同的配对,将1株犬瘟热疫苗弱毒株细胞培养物的总RNA进行RT-PCR扩增,利用1次PCR扩增得到了7个基因片段,最长的达1669bp,最短的为314bp;应用套式或半套式PCR,扩增得到了能覆盖整个融合蛋白基因的8个片段  相似文献   
24.
猪瘟病毒保护性抗原E2基因的克隆及在原核细胞中的表达   总被引:8,自引:0,他引:8  
应用RT-PCR分两段扩增猪瘟病毒(HCV)石门株E2基因,然后对其进行了克隆。利用两个片段重叠部分的单一BglⅡ位点,将它们连接成为完整的E2基因,并克隆到PUC19质粒中,获得重 质粒PHCF2。另设计一对引物,以PHCF2为模板扩增出不含信号肽的E2基因,然后将其克隆到表达载体质粒pBV220和PET_28a(+)中,获得重组质粒PBVE2和PETE2,用酶切,PCR和序列分析鉴定E2基因插  相似文献   
25.
从猪瘟病毒兔化弱毒株(HCLV)的细胞培养液中直接提取RNA,同时根据猪瘟病毒Alfort株的基因组序列化学合成了6条引物,应用“半巢式”PCR方法扩增了HCLV两个cD-NA片段,其大小与推算的长度相符,依次为693bn和276bp。这2个片段包括了HCLV基因组5’端非编码区调控序列,编码具有蛋白酶活性的P23蛋白的基因和编码大部分核衣壳蛋白P14的基因。最后,按标准方法将这2个cDNA片段克隆到pUC18的SmaI切点。  相似文献   
26.
以非免疫鸭胚增殖的减蛋综合征病毒(EDSV),经差速离心法纯化,电镜下观察到病毒无囊膜,大小为70~85nm。以蛋白酶K法抽提病毒基因组,琼脂糖凝胶电泳只出现1条分子量约34kb、背景清晰的核酸带。HindⅢ酶切EDSVDNA可见10条片段,以pUC19质粒为载体,采用鸟枪法对病毒基因组的HindⅢ酶切片段进行分子克隆,获得17个重组质粒,通过酶切、斑点杂交鉴定,证实已经成功地克隆到EDSV的5.24kb、2.02kb、1.65kb、1.47kb、1.41kb等5个DNA片段。  相似文献   
27.
猪瘟(CSF)是我国四大畜禽疫病之一,至今已流行70多年。我国于1954年成功研制了猪瘟兔化弱毒疫苗(Hog Cholera Lapinised Virus,HCLV),随即在全国范围内推广应用,并于1956年提出了消灭猪瘟的规划。由于长期贯彻预防为主的指导思想,坚持广泛接种猪瘟兔化弱毒疫苗的综合性防治措施,本病在我国已经得到有效控制,大规模的爆发流行基本停止,但是猪瘟并未被扑灭,该病仍在全国范围内不间断地小规模地散发流行,消灭猪瘟仍然还有很长的路要走。猪瘟在我国仍然流行的一个重要原因是我国缺乏全国范围内猪瘟的定性和定量流  相似文献   
28.
轮状病毒VP4、VP7基因的克隆与核苷酸序列分析   总被引:7,自引:3,他引:4  
用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从轮状病毒感染的细胞中扩增816bp,916bp的VP4,VP7片段中抗原表位区。通过T4DNA连接酶将其直接连接于克隆载体质粒pGEM-T上,转化至受体菌DH5α中,提取质粒经PCR扩增,酶切鉴定,证明重组质粒pT-V4,PT-V7中含有轮状病毒的VP4,VP7基因片段。经核苷酸序列分析。表明克隆了轮状病毒主要保护性抗原VP4,VP7基因中抗原表位区。  相似文献   
29.
用多次PCR方法对伪狂犬病病毒的立即早期蛋白(immediate early protein,IE180)基因进行部分缺失。测序证实缺失序列正确后,构建了IE180基因部分缺失突变体的真核细胞表达裁体peP1P2、pcP1P3P2、pcP6P2。将这些真核表达裁体与带有SV40早期基因启动子和报告基因CAT(氯霉素乙酰转移酶)的pCAT3-control载体质粒混合后,用质酯体介导的方法,共转染Hela细胞。通过CAT的ELISA方法检测瞬时表达结果表明:突变体P1P2和P1P3P2对SV40启动子具有较强的激活能力,而P6P2则对SV40启动子有较明显的抑制作用。  相似文献   
30.
对鸡新城疫病毒(NDV)B1株、La Sota株、Mukteswar株和长春强毒野毒株(C87E7)感染的鸡胚尿囊液分别进行浓缩和提纯,并作SDS-PAGE和Western印迹,进行结构蛋白及其抗原性的分析。结果,4株NDV的电泳图谱显示11-12条结构蛋白带,分子量从43000到120000不等。其中各株均有3条主要蛋白带,8~9条次要蛋白带。不同株NDV的次要蛋白带有明显的区别。Schiff氏试剂染色证明,分子量为76000、52000和50000的蛋白为糖蛋白。结构蛋白的抗原性分析表明,4株NDV蛋白带中有2条具有共同抗原性,其他蛋白带的抗原性则有差异或明显不同。  相似文献   
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