东北边境地区野猪及放养杂交野猪戊型肝炎流行病学调查     

任照文  丁美明  彭鹏  蔡建秋  张必凯  涂长春  郭焕成 《中国兽医学报》2019,(4):695-701

为了解东北边境地区野猪及放养杂交野猪群体猪戊型肝炎病毒(HEV)感染情况,于2015—2018年在吉林省、黑龙江省的中朝、中俄边境和内蒙古自治区境内加格达奇周边地区采集6月龄以上杂交野猪血清、粪便或肛拭子样品共520份,采集野猪血清和粪便样品共248份。ELISA检测、RT-nPCR检测、全基因组测序、同源性及进化分析结果显示,杂交野猪和野猪感染HEV的血清抗体总阳性率为34.1%(136/399);核酸总阳性率为1.56%(12/771),12份核酸阳性样品均来自杂交野猪,病毒基因组ORF2部分核苷酸序列同源性为85.4%～100.0%,属于基因4型,4a、4b亚型。对4a亚型的1份阳性样品(LJG-18)进行病毒全基因组扩增测序,其核苷酸序列与日本的人源毒株JKO-ChiSai98C同源性最高,为94.9%,与吉林省猪源毒株Ch-S-1同源性为90.2%。结果表明:东北边境地区放养杂交野猪群具有较高的HEV血清抗体阳性率,HEV流行毒株以4a亚型为主。本试验针对我国野猪及放养杂交野猪群体开展猪戊型肝炎流行病学调查,为该病的流行情况提供了新的科学数据,对我国养猪业健康发展和公共卫生安全具有重要意义。  相似文献   

高效抗猪瘟病毒shRNA的筛选     

戴祯  王铁东  王侃侃  欧阳红生  涂长春  逢大欣 《兽医大学学报》2014,(2):182-186,191

为降低RNAi技术的毒副作用，筛选高效抑制猪瘟病毒复制的shRNA序列，根据有关报道构建了荧光报告系统shRNA筛选平台。该平台以9种抑制效率分别为强、中、弱的shRNA筛选载体作为参照，结合荧光报告系统进一步量化shRNA的抑制效率。根据2种已知体外有效抑制猪瘟病毒复制的siRNA-N2、siRNA-NSSB，分别设计得到shRNA-N2、shRNA-NS5B表达栽体，继而采用高效、高灵敏度的shRNA筛选平台对这2种shRNA进行了检测，结果显示单拷贝情况下，shRNA-N2抑制靶序列效率较强，shRNA-NSSB抑制效率弱。本试验通过新策略大大提高了shRNA干扰效率检测的灵敏度，为采用shRNA转基因克隆动物进行抗病育种的研究提供了保障。  相似文献   

新生长白仔猪尾尖成纤维细胞的分离培养及其对猪瘟病毒的易感性分析     

武蓉  戴祯  赵致阳  高飞  全龙泉  逄大欣  王铁东  涂长春  欧阳红生 《中国兽医学报》2013,33(3):326-329

以出生2日龄的正常长白仔猪尾尖组织为材料,通过组织消化法培养获得原代尾尖成纤维细胞.并通过间接免疫荧光法,梯度10倍倍比稀释猪瘟病毒石门株(105.2 TCID50/mL)感染在猪尾尖成纤维细胞,确定尾尖成纤维细胞最佳病毒感染滴度.结果显示,运用组织块消化法能够获得生长状态的原代猪尾尖成纤维细胞,并且细胞对10-3稀释倍数的猪瘟病毒石门株具有适中的感染力.  相似文献   

我国食源性人兽共患细菌病流行现状及其防控对策   总被引：2，自引：0，他引：2  

焦新安  涂长春  黄金林  冯书章 《中国家禽》2009,31(19)

食源性疾病是食品安全的主要问题,世界卫生组织(WHO)将食源性疾病定义为:"通过摄食进入人体导致人体惠感染性或中毒性的疾病".这里包括了由食品生物性污染和化学物质残留引起的食源性疾病.近年来,国内外食源性人兽共患细菌病事件频频发生,在我国,由于食物链中病原细菌污染及其造成的食源性疾病也屡见不鲜.另外,随着抗菌药物的广泛应用,细菌耐药性日趋严重,细菌耐药性也助推了食源性人兽共惠细菌病的流行.由此可见,人兽共患病原细菌是引起食源性疾病的主要原因之一,已成为威胁人们健康的重要公共卫生问题.因此,我国应加强对食源性人兽共惠细菌病的研究和防控工作.  相似文献   

猪瘟病毒基因分型寡核苷酸芯片方法的建立     

郭焕成  席进  刘帅  涂长春 《兽医大学学报》2012,(2):177-181,211

根据猪瘟病毒（CSFV）E2基因序列,设计41条针对CSFV 3个基因群共10个亚群各亚群寡核苷酸探针。利用欧盟猪瘟诊断手册推荐的CSFV E2基因套式RT-PCR方法,在内套PCR过程中进行Cy3-dCTP掺入荧光标记,制备芯片杂交样品。用标记的PCR产物与寡核苷酸探针阵列杂交,置于GenePix 4100A扫描仪中扫描,利用Ge-nePix Pro 6.0软件分析杂交图像。特异性和灵敏度试验显示,芯片方法与本室发表的CSFV real-time RT-PCR方法的灵敏度相近,芯片探针与猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪2型圆环病毒（PCV2）、猪伪狂犬病毒（PRV）样品无非特异性杂交。以包括1.1、2.1、2.2、2.3亚群的8份CSF阳性样品进行芯片的检测验证,结果表明,通过特异性的杂交图谱或杂交信号分析可准确判定样品所属的基因亚群,寡核苷酸芯片的检测结果与测序的分型结果全部符合。本研究为将寡核苷酸芯片技术用于猪瘟病毒的基因分型和分子流行病学研究奠定了基础。  相似文献   

狂犬病病毒荧光定量RT-PCR快速检测试剂盒的评价及应用     

许运斌  孙彦伟  邵明富  查云峰  范金红  席进  朱妍  涂长春 《中国兽医学报》2012,32(3):420-426

基于目前在我国人群和动物中流行的狂犬病病毒（RV）均属于基因Ⅰ型,在本室所建立的基因Ⅰ型RV荧光定量RT-PCR方法的基础上,组装了可以便捷使用的RV快速检测试剂盒。对4 577份临床样品的检测结果表明,该试剂盒的检测灵敏度达4.68个TCID50,与《狂犬病防治技术规范》规定的套式RT-PCR灵敏度相当,而且稳定性良好,可以冷冻保存8个月以上。所研制的荧光定量RT-PCR快速检测试剂盒具有操作简便、快速、特异性强、灵敏度高、重复性好、稳定性强等优点,既适合单个临床样品的确诊,又适合RV流行病学监测的大规模筛查。  相似文献   

同时检测猪瘟病毒和北美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒的复合荧光定量RT-PCR方法的建立   总被引：2，自引：0，他引：2  

成丹  赵建军  李娜  孙元  周艳君  朱妍  田志军  涂长春  童光志  仇华吉 《畜牧兽医学报》2009,40(1)

应用猪瘟病毒（CSFV）及北美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）特异性引物和TaqMan水解探针,建立一种同时检测CSFV和PRRSV的复合荧光定量RT—PCR方法。该方法可检测到3．2TCID50的CSFV和1．8TCID50的北美洲型PRRSV,比常规PCR方法敏感性高50倍以上。用复合荧光定量RT—PCR方法对155份现地样品进行检测,结果73份为PRRSV阳性,16份为CSFV阳性,13份为CSFV和PRRSV混合感染,与常规RT—PCR的符合率高达99．4％。该复合荧光定量RT—PCR方法敏感、特异、重复性好。  相似文献   

不同转染介质对狂犬病病毒糖蛋白基因免疫的效应   总被引：4，自引：2，他引：2  

张茂林  扈荣良  余兴龙  涂长春  钱爱东  荣爱红  李红卫  殷震 《中国兽医学报》2000,20(6):528-531

将狂犬病病毒糖蛋白 ( RGP) c DNA Bgl 片段 ( 1 .6 7kb)分别克隆进质粒 p GFP-Cl、p SV2 -dhfr和pc DNA3 ,构建了重组质粒 p GFP-C1 -RGP、p SV2 -RGP和 pc DNA3 -RGP,通过脂质体和聚乙烯亚胺 ( PEI)包裹后分别转染 BHK-2 1细胞和乳鼠脑内接种 ,3种重组质粒均能表达出 RGP。表达水平高低依次为 p GFP-C1 -RGP>pc DNA3 -RGP>p SV2 -RGP。 3种重组质粒分别以全裸质粒、质粒 -脂质体、质粒 -PEI形式 ,经骨骼肌免疫小鼠 ,间接 ELISA检测。结果显示 ,免疫鼠血清中特异性抗体水平明显高于对照组 ;80 %免疫小鼠能抵抗狂犬病病毒强毒的攻击。全裸质粒免疫诱生的抗体水平同其剂量相关 ;而以 PEI或脂质体作为转染介质、质粒接种量超过 2 0μg时 ,诱生抗体水平不再随质粒剂量增大而显著变化。质粒免疫后 1 50 d采用 PCR仍然能从注射部位检测到 RGP基因的存在  相似文献   

质粒DNA拓扑学结构对基因疫苗生物学特性的影响     

李作生  余兴龙  张茂林  乔红伟  程从升  徐兴然  扈荣良  涂长春 《中国兽医学报》2004,24(3):250-251

利用不同拓扑学结构的质粒 ,分别转化 E.coli感受态细胞、转染 SK6 - 6细胞和免疫小鼠 ,比较了不同拓扑学结构质粒对转化效率、转染率和对免疫应答水平的影响。结果显示 ,超螺旋占 5 0 %比例的猪瘟病毒 E2基因表达质粒p CDSW转化 E.coli感受态细胞的效率比开环的 p CDSW高 8倍 ,超螺旋比例占 80 %的 p VAXE2 IL- 2质粒比酶切线性化质粒转化率高 2 2倍 ;以荧光蛋白基因为报告基因 ,超螺旋比例占 80 %的荧光蛋白真核表达质粒转染真核细胞的效率是线性化质粒的 12倍 ;以猪瘟病毒主要保护性抗原 E2基因表达质粒 ,分别制备成超螺旋和开环形式占优势的质粒 ,免疫昆明鼠 ,抗体检测结果显示 ,超螺旋比例高的基因疫苗免疫效果明显好于开环质粒的基因疫苗  相似文献   

利用随机肽库鉴定猪瘟病毒E2蛋白抗原表位     

肖昌  余兴龙  张茂林  徐兴然  涂长春  张玉静 《中国兽医学报》2005,25(5):449-453

利用噬菌体随机12肽库对抗猪瘟病毒（classical swine fever virus CSFV）糖蛋白E2特异的单抗A11进行表位鉴定，经过4轮筛选后，随机挑取10个噬菌体克隆作竞争ELISA检测。结果表明，10个克隆中除4号克隆外，其余9个均能抑制原核表达的E2蛋白和A1l单抗之间的抗原抗体反应，抑制率在35％～64％；DNA测序表明，所有产生竞争抑制作用的8个噬菌体克隆的12肽序列均舍有XXWRXXXL核心序列，而没有抑制作用的克隆则不含该核心序列；Western-blot试验证明，所挑阳性克隆均能被单抗A11识别。多序列比较发现，该核心序列与猪瘟病毒E蛋白的28～35位氨基酸TTWKEYSH有一定的同源性，人工合成的含有部分核心序列氨基酸的多肽可以与单抗A11反应，表明单抗A11所针对的抗原表位位于CSFVE2蛋白的28～35位氨基酸。  相似文献