狐狸脑炎病毒的分离鉴定和流行病学调查     

钟志宏  夏咸柱  赵奕  涂长春  武银莲 《中国兽医学报》1990,(2)

用狗肾传代细胞(MDCK)从3个养狐场的病死狐脏器中分得3株病毒,经电镜观察,理化学、生物学性状和血清学鉴定以及病毒结构蛋白分析,证明其为狐狸脑炎病毒。同时,对这3个发病狐场进行了流行病学调查,所获得的临床资料以及血清学、病毒学和细菌学检测结果进一步证实了这3个养狐场此次所发生的传染病是狐狸脑炎.  相似文献   

牛病毒性腹泻病病毒Changchun184株E2基因的克隆及在大肠杆中的高效表达   总被引：6，自引：0，他引：6  

徐兴然  涂长春  余兴龙  肖昌  张青婵  张丽颖  查云峰  史子学 《中国预防兽医学报》2005,27(2):98-101

根据GenBank已发表的多个BVDV-1序列的比较分析结果设计引物,应用RT-PCR及套式PCR克隆得到包含Changchun184(CC-184)株E2基因的片段F2/R2,克隆、测序分析结果表明该片段大小为1391bp,软件分析结果表明CC-184株E2基因长度为1122bp(GenBank accession number:AF526380).通过基因操作构建得到表达完整E2蛋白和去除E2蛋白C-端疏水区的重组质粒pET28a-BE2和pET28a-BE2m,转化大肠杆菌并诱导目的蛋白表达,SDS-PAGE检测结果表明重组菌能表达目的蛋白,其表达量分别占菌体总蛋白的6.25%和35.7%.Western blot分析结果正实表达蛋白为CC-184株E2蛋白.  相似文献   

疫苗使用为何争议不断?     

杨汉春  梅克义  蔡宝祥  仇华吉  陈西钊  李庆怀  涂长春  袁振国  刘志国  潘春刚 《猪业科学》2005,22(2):11-15

1　　我国当前的猪病流行情况非常复杂,是否与疫苗没有得到正确使用有关系?　疫苗到底要不要用?陈西钊:疫苗肯定要用,对我国绝大多数猪场目前的情况,疫苗都是不得不打的,而且疫苗是一种非常有效的防疫手段,但疫苗的来源必须是正规厂家生产的合格疫苗。潘春刚:这本身就是一个比较复杂的问题,我国猪病情况之所以复杂,除养殖场没有根据实际情况合理正确的使用合格疫苗产品以外,还与品种引进时疫病监测技术及综合防治措施等有关。正确使用疫苗的前提是养殖场的管理和综合防治水平要过关,要讲科学。刘志南:猪场疫病情况复杂与病原种…  相似文献   

猪瘟病毒E2蛋白重组T4噬菌体的构建及免疫学特性   总被引：4，自引：1，他引：4  

吴健敏  任兆钧  余兴龙  张念祖  涂长春 《中国兽医学报》2004,24(6):521-524

利用重组 PCR技术将猪瘟病毒 (CSFV) E2基因与 T4噬菌体 SOC基因 C端融合 ,构建了大小为 12 33bp的SOC/ E2融合基因 ,将其插入携带 T4溶菌酶基因 (e)和 denv基因的 T4重组载体 (p RH) ,构建了重组载体 p RSE2 ,通过重组载体与缺失突变型 T4噬菌体基因发生同源重组 ,将 SOC/ E2融合基因整合入 T4噬菌体的基因组中。经EL ISA、Western blot等免疫学检测证实 ,T4噬菌体表达的 E2融合蛋白具有 CSFV免疫学活性 ,动物试验证实 T4 .SOC.E2重组噬菌体免疫鼠后能诱导产生特异性的猪瘟抗体  相似文献   

湖南湘西地区外观健康犬携带狂犬病病毒的调查研究   总被引：3，自引：0，他引：3  

刘浩  江禹  王莉莉  余兴龙  涂长春 《中国动物检疫》2007,24(9):17-19

为了解湖南湘西地区外观健康犬携带狂犬病病毒的情况,我们于2005年9月从湘西狂犬病疫点采集38份扑杀的外观健康的犬脑组织,并于2006年1月在湘西农贸市场采集了168份外观健康的犬脑组织。RT-PCR和直接荧光抗体试验(FAT)检测表明共有5份犬脑标本为阳性,并用乳鼠脑内接种的方法分离得到了5株狂犬病病毒毒株,分子流行病学分析表明这5株病毒均为野毒。在这5份阳性标本,疫点有4份,检出率为10.5%,市场1份,检出率为0.59%。我们的调查结果表明疫点的外观健康犬携带狂犬病病毒的检出率与国内的其它报道接近,而从市场采集的标本的检出率却要低很多。  相似文献   

应用多联PCR对引发猪繁殖障碍有关病毒的检测Ⅰ.JEV、PPV、PRRSV、PRV多联PCR引物设计   总被引：13，自引：2，他引：11  

孙明  涂长春  李红卫  高显明  何旭玉  白晓鸿  余兴龙  殷震 《中国兽医学报》2000,20(1):10-14

首先在ＧinＢank查出日本乙型脑炎病毒（ＪＥＶ）、伪狂犬病病毒（ＰＲＶ）、猪繁殖与 呼吸系统综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）和猪细小病毒（ＰＰＶ）基因组的所有已知序列,对各病毒基因区域进行同源性分析,结果各病毒基因组的结构特点,发现并确定了ＰＲＶ的gＨ基因区、ＪＥＶ的多聚蛋白基因区、ＰＲＲＳＶ的结构蛋白区和ＰＰＶ的ＶＰ２基因区为各自病毒保守序列。利用Ｇoldkey软件对上述保守的特殊序列进行引物设计,要求Ｇ＋Ｃ含量  相似文献   

抗猪瘟病毒E2蛋白单抗9A4H4的鉴定     

米士江  包菲  涂长春  李红卫  龚文杰 《吉林农业大学学报》2020,42(2):198-206

为鉴定抗猪瘟病毒E2蛋白单克隆抗体9A4H4与不同猪瘟病毒(CSFV)株的反应性,将其与猪瘟病毒石门株、猪瘟兔化弱毒疫苗株和前期分离获得的106株猪瘟流行毒株进行IFA验证。在此基础上,利用昆虫杆状病毒系统表达的基因1型、2型和3型代表性毒株的E2蛋白进行了Western blot验证。试验还利用含有或不含β-巯基乙醇的SDS上样缓冲液对真核表达和原核表达的石门株E2蛋白进行处理,并与单抗9A4H4进行反应,初步鉴定了该单抗所识别抗原表位的类型,并利用石门株进行中和试验验证该抗体对CSFV的中和能力。间接免疫荧光试验结果表明:单抗9A4H4能与石门株、猪瘟兔化弱毒疫苗株、基因1型以及大多数的基因2.1b亚亚型、2.2、2.3基因亚型的毒株反应,与绝大多数的2.1a、2.1c、2.1g和2.1h基因亚亚型的毒株不反应,该结果与单抗和病毒E2蛋白的反应结果完全一致。Western blot结果表明:单抗9A4H4只与真核表达的非还原型石门株E2蛋白反应,与真核表达的还原型E2蛋白以及原核表达的石门E2蛋白不反应,表明该抗体识别的抗原表位为构象表位。中和试验结果表明,单抗9A4H4对CSFV石门株没有中和能力。  相似文献   

猪瘟病毒EO、E2蛋白抗原表位的研究进展     

肖昌  涂长春 《畜牧兽医科技信息》2002,18(9):19-21

猪瘟(classical swine fever CSF或hog cholera HC)是严重危害我国和世界各国养猪业的烈性传染病,国际兽役局将其列为A类6种法定传染病之一.根据粮农组织-国际兽疫局-世界卫生组织(FAO-OIE-WHO)<动物卫生年鉴>(1992年)公布的资料,全世界仍有44个国家存在猪瘟.近年来,该病在美洲、亚洲、欧洲等国家和地区呈现广泛流行的趋势,一些宣布已消灭了猪瘟的国家如法国、荷兰、德国、比利时等又见猪瘟复发的报道[1].  相似文献   

SV40LT抗原介导的蝙蝠胎儿肾细胞永生化     

张思春  杨凡力  余乐  何彪  涂长春 《中国预防兽医学报》2014,(5):363-366

蝙蝠是许多新发人兽共患病病毒的自然储存宿主,由于缺乏蝙蝠细胞系,只能利用其他哺乳动物细胞系来分离蝙蝠病毒,因此成功分离的几率较低。为建立稳定的蝙蝠细胞系,本研究利用胰酶消化法培养东亚水鼠耳蝠(Myotis petax)的胎儿原代肾细胞。利用重组逆转录病毒转导法将SV40 LT抗原基因转导入蝙蝠胎儿原代肾细胞,经嘌呤霉素筛选获得LT基因整合和表达的阳性细胞,并进行连续传代培养。RT-PCR和western blot检测表明转导的细胞中有SV40 LT基因的整合和表达。转导细胞在软琼脂中培养不能够形成克隆,表明其未发生癌性转化。对第33代的转导细胞进行单细胞克隆,获得了3个衍生的细胞系,其中Mp-Ki03细胞系已培养至第60代。病毒感染试验表明蝙蝠西江病毒和蝙蝠轮状病毒均可以感染该转导细胞系。本研究通过SV40 LT抗原建立了永生化的蝙蝠胎儿肾细胞系,并且该细胞系对蝙蝠病毒易感,对分离与鉴定蝙蝠病毒以及研究病毒感染蝙蝠细胞的机制具有重要的作用。  相似文献   

猪瘟病毒保护性抗原E2蛋白单抗的制备及其抗原表位的初步分析   总被引：22，自引：3，他引：22  

马刚  李作生  余兴龙  刘思国  涂长春 《中国兽医学报》2002,22(2):121-124

应用大肠杆菌表达的猪瘟病毒主要保护性 E2抗原决定簇蛋白和全长 E2基因构建的 DNA疫苗免疫 BAL B/c小鼠。取免疫小鼠脾细胞与 SP2 /0骨髓瘤细胞进行融合 ,经克隆和间接 EL ISA筛选 ,获得了 A11、B2、E3、H6、D5、D86株稳定分泌抗猪瘟病毒 E2蛋白单克隆抗体 (Mc Ab)的杂交瘤细胞株。它们的腹水效价在 1∶ 80 0～ 1∶ 2 10 0 0 0之间。抗体类型鉴定结果表明 ,A11、E3、H6、D5和 D8为 Ig M类型 ,B2为 Ig G类型。随后用蛋白 A凝胶层析法和 PEG沉淀法分别纯化了 Ig G和 Ig M单抗。对纯化单抗进行的抗原识别表位研究结果初步表明 ,6株单抗可能识别 3种不同的E2抗原表位。  相似文献