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为建立一种定量检测禽呼肠孤病毒δC和δNS基因的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR方法,针对δC、δNS基因分别设计了1对特异性引物,同时选择了1对内参基因β-actin引物,将常规PCR扩增的片段分别连接到pMD18-T载体上构建重组质粒,经筛选、鉴定纯化后,梯度倍比稀释作为标准品,用于构建SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR检测δC、δNS基因及内参基因β-actin的标准曲线.结果表明,建立的标准曲线具有良好的线性关系,R2均在0.99以上;最小检出量为10拷贝/μL的阳性标准品,且具有良好的重复性,能够校正抽提样品中细胞数量不均带来的差异.可见,SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR方法能满足检测微量样品中禽呼肠孤病毒δC和δNS基因表达的要求,具有快速、敏感性高、重复性好等特点. 相似文献
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为掌握猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)血清抗体消长规律,分别对PRRSV免疫A场和PRRSV非免疫B场近2年的PRRSV抗体监测数据进行分析。结果显示:免疫A场稳定的重要指标是S/P平均值约为2.0、离散度≤40%和≥2.5比例为0;非免疫B场稳定的重要指标是逐渐降低的抗体阳性率和≥2.5比例为0。结合生产情况,追溯猪场出现抗体大波动的时间点,发现每当从外场引种就会造成猪群不稳定,说明外来后备猪驯化是防控PRRS的重点。本研究为调查猪场调整PRRS防控措施提供科学依据,为临床上解读猪场PRRSV抗体监测数据提供参考。 相似文献