犬猫3种冠状病毒基因克隆的构建与芯片检测技术     

李健  熊炜  陈沁  王权  王巧全  张建武  胡永强  李树清 《中国兽医学报》2008,28(11)

蔗糖密度梯度离心纯化浓缩犬冠状病毒(CCV)、猫冠状病毒(FCV)和猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)的细胞培养物,分别设计7、17、11对引物,对病毒RNA进行反转录和PCR扩增,回收PCR产物连接pGEM-T载体并转化大肠杆菌TGI,构建35个基因片段的克隆。煮沸裂解法制备质粒DNA,回收PCR扩增产物,点制冠状病毒基因芯片。抽提病毒总RNA,利用Cy3-dCTP随机渗入反转录PCR标记,与芯片进行杂交检测,淘汰交叉的克隆片段,每种病毒只选择其4对引物克隆的基因片段。将特异克隆扩增片段重新点制基因芯片,与病毒样品PCR扩增产物杂交,未发现交叉现象。基因芯片检测比传统PCR敏感1000倍,可有效应用于3种病毒的检测与区分。  相似文献   

犬瘟热RT-PCR快速诊断方法的建立   总被引：1，自引：0，他引：1  

熊炜  王权  李健  邱璐  蒋静  李春阳  黄忠荣  胡永强 《中国动物检疫》2009,26(3):38-40

本研究建立了快速诊断犬瘟热感染的RT-PCR方法,并应用该方法对犬瘟热病死犬的脏器及感染犬体表采集样品进行了检测。为确定犬瘟热最佳的隔离检疫周期及采样部位,本研究对一例CDV攻毒犬感染病程收集的口鼻液、粪便、尿液样品进行了对比检测,结果证实粪便、口鼻液等易于获取的样品中CDV病毒滴度较高,并可在发病全程检测到,因此,它们可作为理想的受试样品。  相似文献   

巴音布鲁克高寒草地几种公害物综合安全的研究     

熊炜  兰芳  尼满  王日克  买热木尼莎 《草原与草坪》2009,(6):28-32

采用综合安全评估法,对巴音布鲁克高寒草地六六六、敌敌畏、铅和砷的综合安全予以评估,结果表明：巴音布鲁克高寒草地土壤、地表水、饲草和肉羊中,六六六、敌敌畏和砷的生态、经济和社会综合安全率均为100%,其综合安全居于高级安全状态水平,铅的生态、经济和社会综合安全率均为94.70%,其综合安全居于中级偏上安全状态;六六六、敌敌畏、铅和砷总综合安全率达98.57%,总综合安全居于中级偏上安全水平。  相似文献   

基因芯片检测5种动物冠状病毒的初步研究     

李健  谢爱织  陈沁  王巧全  熊炜  张建武  王权  胡永强 《畜牧与兽医》2010,42(12)

采用蔗糖密度梯度离心,纯化浓缩犬冠状病毒(CCV)、猫冠状病毒(FCV)、猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪呼吸道冠状病毒(PRCV)的细胞培养物,分别设计7,17,11,10和4对引物,构建了49个基因片段的克隆。煮沸裂解法制备质粒DNA,回收PCR扩增产物,点制冠状病毒基因芯片。抽提病毒总RNA,利用Cy3-dCTP随机渗入反转录PCR标记,与芯片进行杂交检测,淘汰交叉的克隆片段。结果表明:克隆CCV1,CCV2,CCV5和CCV7可特异诊断CCV,克隆FCV6,FCV7,FCV8和FCV9可特异诊断FCV,克隆FIPV2,FIPV7,FIPV8和FIPV9可特异诊断FIPV,克隆PRCV1,PRCV2和PRCV3可特异诊断PRCV,克隆TGEV3,TGEV4,TGEV5和TGEV6可特异诊断TGEV。将这些特异克隆扩增片段重新点制基因芯片,与病毒PCR产物杂交,未发现交叉现象。基因芯片检测比传统PCR敏感1000倍,可有效应用于这5种动物冠状病毒的检测与区分。  相似文献   

转基因植物检测方法及标准化概述     

张晓磊  章秋艳  熊炜  沈平 《中国农业大学学报》2020,25(9):1-12

针对如何更加科学精准地检测转基因植物的问题,采用比较研究的方法,对国内外转基因植物的检测方法及其标准化进行研究。结果表明:1)转基因植物及其产品的检测,主要包括转基因植物的产品成分检测、环境安全检测、食用安全检测3个方面;2)目前国内外转基因植物检测方法均处于先进水平,但随着不断涌现的转基因植物及产品,检测技术仍需更新换代;3)转基因植物检测技术研发必须与其标准化及安全管理协调进行,从而保证转基因植物及其产品在我国长期有效的安全监管。综上,转基因植物检测技术及其标准化仍需要不断开发和创新,为国家对转基因产品的安全监管提供更有力的技术保障。  相似文献   

可视化2型猪链球菌LAMP检测方法的建立     

熊炜  魏晓锋  王艳  林颖峥  张强  李春阳  黄忠荣  胡建华  李健 《中国动物检疫》2016,33(12):75-77

由2型猪链球菌(Streptococcus suis serotype 2)引起的猪链球菌病(Swine streptococosis)是一种重要的人兽共患疾病,具有高感染率、高死亡率的特点。为加强口岸动物源性产品中2型猪链球菌的现场查验力度,建立了2型猪链球菌LAMP检测方法,并对方法的特异性、敏感性和稳定性进行了测试。通过在LAMP反应产物中加入显色液,提高了对检测结果肉眼判定的准确性,实现了结果判定可视化的目标,有助于在出入境口岸货物查验现场及猪场等一线实验室使用。  相似文献   

上海自贸区生物材料检验检疫管理创新点分析     

王艳  于翔  许思佳  张磊萍  张强  熊炜 《中国动物检疫》2019,36(6):32-35

为了满足生物医药产业增效及降低成本等需求,上海海关在自贸区积极推进生物材料检验检疫改革,通过推行分类管理,调整准入制度,改革审批制度,创新查验模式等措施,取得了一定成效,使得生物材料相关产品的审批时限大大缩短,并使其进出口增速明显。上海海关将继续改革创新,完善生物材料监管措施,进一步简政放权及放开生物材料进口准入,进而建设更加符合我国国情和产业发展需求的进出境生物材料检疫监管模式。  相似文献   

湖南探索免费单招培养职业农民的新模式   总被引：2，自引：0，他引：2  

王青立  王衍亮  林祥明  熊炜 《高等农业教育》2012,(2):13-14

湖南生物机电职业技术学院在当地农业和教育行政部门及地方政府的大力支持下,探索出“自主考试、免费就读、弹性学制、定向使用”的职业农民教育培养之路。  相似文献   

退化草坪绿地恢复与重建的研究     

周艺  熊炜  聂焱  王新  刘艳 《牧草与饲料》2007,1(2):49-50

首次提出了退化草坪绿地恢复与重建的概念和经济技术要点。对塔指生活基地轻度退化草坪绿化施用恢复性生态技术后，整体草坪比退化时的质量提高了一个档次，投入恢复成本0．54元／m^2·年，仅占养护费的4．2％。对中、重度退化草坪施用一套重建生态工程技术后，重建草坪60天成坪，其质量水平比退化时提高了2-3个档次，重建投入成本6．88元／m^2，占原建设成本的40．7％。  相似文献   

五种重要犬病毒微流控芯片检测方法的建立及应用     

熊炜  林颖峥  薛俊欣  蒋静  王巧全  张强  李健 《中国动物检疫》2021,38(5):104-107

狂犬病毒、伪狂犬病毒、犬瘟热病毒、犬细小病毒和犬冠状病毒是引起犬科动物重要传染病的5种病毒,严重威胁着犬科动物的健康,是出入境犬科动物重点筛查的致病因子。为提升口岸进出境犬科动物检疫工作效率,建立了上述5种病毒微流控芯片检测方法。在建立5种病毒环等温扩增检测技术(loop mediated isothermal amplification,LAMP)的基础上,将这些LAMP检测体系固化在同一块塑料芯片上,制备了同步高通量快速检测微流控芯片,并将其应用于临床检测。结果显示:微流控芯片检测方法具有良好的特异性,含有目的基因的阳性样本仅在芯片上相应病毒反应槽出现显著扩增,而其他病毒反应槽未出现扩增,彼此无交叉反应;微流控芯片的敏感性与LAMP方法一致;通过检测不同时期收集的感染犬瘟热病毒、犬细小病毒和犬冠状病毒临床样本,证实建立的微流控芯片检测方法具有良好的稳定性和可靠性。与现有核酸检测方法相比,微流控芯片可以在受试核酸上样40 min内完成上述5种犬病毒的快速筛查,从而满足进出境犬科动物快速检疫的需求。  相似文献