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猪鼻支原体是猪场感染率极高的一种支原体,可引起多发性浆膜炎、关节炎等症状。目前尚未建立标准的猪鼻支原体发病模型,也缺乏标准强毒株。本研究从某猪场发病猪的关节液中分离得到一株支原体,通过PCR检测、菌落形态观察、菌体形态电镜分析、菌株MLST分型等方法对其进行了鉴定,确认其为猪鼻支原体。为评价菌株致病性,将该分离株接种1月龄自然分娩不吃初乳猪（SF-pCD猪）,试验猪在感染后出现关节肿胀、跛行等临床症状,日增重显著低于对照组,并出现部分死亡。剖检结果显示感染组出现胸膜炎、腹膜炎、心包炎及关节炎,肺部组织病理分析显示为间质增宽,无虾肉样病变。从发病猪的扁桃体、肺、心及关节积液中可再次分离到攻毒株。综上,本研究分离获得一株猪鼻支原体,人工感染猪后可出现典型的发病症状,猪鼻支原体发病模型的建立为致病机制及疫苗研究奠定了重要的基础。 相似文献
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利用原核表达载体pET-28a(+)构建猪鼻支原体(Mycoplasma hyorhinis, Mhr)的3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)重组表达菌,研究GAPDH黏附宿主细胞的功能。结果表明:成功构建了表达rMhr-GAPDH的重组工程菌,利用IPTG诱导蛋白表达,镍柱亲和层析纯化,成功获得高纯度的rMhr-GAPDH重组蛋白。用重组蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,对Mhr液体培养物和固体菌落进行免疫杂交,均可检测到GAPDH,提示其可表达于菌体表面。将rMhr-GAPDH蛋白与人气道上皮细胞NCI-H292共孵育,利用间接免疫荧光试验可检测到黏附在细胞上的重组蛋白,利用微孔板黏附试验进一步证明rMhr-GAPDH蛋白与细胞膜蛋白的结合具有剂量依赖性,并可为其抗体所抑制。该研究构建表达和纯化了Mhr的GAPDH重组蛋白,检测到其在菌体表面的表达,并证明其具有黏附细胞能力,这有助于进一步研究Mhr黏附感染的致病机制。 相似文献
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滑液支原体(Mycoplasma synoviae,MS)是一种重要的禽病病原,严重危害我国养禽业。本研究旨在分析MS烯醇化酶(enolase, Eno)参与病原致病和诱导感染宿主免疫相关的功能。对MS的Eno蛋白进行种内和种间同源性和进化树分析,并预测Eno的蛋白结合位点和B细胞表位。MS Eno在不同MS菌株间同源性较高,且有别于其他物种。B细胞表位广泛分布在Eno蛋白的各个部分,且大都与预测的蛋白结合位点有重合。进行Eno原核表达和纯化,制备兔抗Eno多克隆抗血清。利用Western blot分析Eno在MS感染鸡或灭活苗免疫鸡中的反应原性。结果显示,MS Eno与兔抗Eno多克隆抗血清、兔抗MS多克隆抗血清、灭活疫苗(HN01株或YBF-MS1株)高免鸡血清、HN01强毒攻毒后阳性鸡血清、3个不同地方来源的临床阳性鸡血清均能发生反应,说明其在疫苗免疫和病原感染鸡中均表现有反应原性。利用菌落印迹和双荧光检测分析并证实Eno为外膜蛋白。利用间接免疫荧光和ELISA板结合试验分析Eno对鸡滑膜鞘细胞(synovial sheath cells, SSCs)是否具有黏附素作用。试验证实... 相似文献
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为了比较研究3种猪肺炎支原体(Mhp)的检测方法,利用已建立的显色原位杂交(CISH)和量子点荧光原位杂交(QD-FISH),并结合PCR方法,检测人工感染Mhp的试验猪、自然感染Mhp的试验猪和疑似感染Mhp的临床样品.结果显示,3种检测方法对人工感染组和自然感染组的检测率均为100％;对临床样品,PCR的检测率为90％,CISH的检测率为70％,QD-FISH的检测率为75％.结果表明,用于检测Mhp感染,PCR是最佳检测方法,但CISH和QD-FISH在Mhp检测和致病机理研究方面具有一定的应用价值. 相似文献
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猪肺炎支原体(Mhp)是猪气喘病的主要病原体。利用Mhp NJ株的DnaK基因通过SOE-PC(splicing withoverlap extension PCR)R扩增和突变,获得了目的片段并插入表达载体pET-28a(+)中,然后转入宿主菌BL21(DE3)。重组质粒经1 mmol/L IPTG在37°C温度下诱导5 h,目的蛋白可达到总蛋白的14.1%。Western Blotting证明表达的重组蛋白具有猪肺炎支原体反应原性,用该重组蛋白建立的ELISA方法可检测到猪肺炎支原体抗体。此为该病基因工程疫苗抗原的筛选和ELISA诊断试剂盒的研制奠定基础。 相似文献
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猪肺炎支原体人工感染引起易感猪各肺叶病变差异的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
为研究猪肺炎支原体对易感猪肺脏及各肺叶部位的损伤差异性,选二元猪(大白×二花脸)和三元猪(杜洛克×长白×大白) 2个品系,共6批次的猪肺炎支原体(Mhp)阴性猪,经人工"气管定位注射"途径感染猪肺炎支原体,于感染后28 d剖检,通过肉眼观察,运用"猪支原体肺炎的肺病变28分制评分法"对肺脏及各个肺叶部位所显示的病变情况进行测算、评分、统计和分析,并对所收集的肺泡灌洗液(BAFL)中猪肺炎支原体病原进行PCR检测。结果表明:猪肺炎支原体能引起肺脏各个肺叶产生特异性"虾肉样"病变,该病变主要呈现在心叶和尖叶部位。不同肺叶所呈现的病变程度存在一定的差异,其中猪肺炎支原体对心叶造成病变最严重,且右心叶比左心叶严重。猪肺炎支原体引起的右肺的病变程度高于左肺,推测其在右肺部位的定植水平可能高于左肺。通过猪肺炎支原体人工感染引起易感猪各肺叶病变差异的研究,为丰富猪支原体肺炎的临床诊断方法和致病机制、疫苗免疫效果评价研究提供了参考依据。 相似文献
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猪肺炎支原体P216基因片段的表达及黏附活性研究 总被引：1，自引：0，他引：1
本研究旨在研究猪肺炎支原体P216蛋白的黏附活性并初步建立猪肺炎支原体蛋白黏附模型。根据软件分析和文献报道从P216全基因中选取亲水性、抗原性、黏附性较好的目的片段,利用PCR从Mhp NJ株扩增P216基因片段,克隆到表达载体pET-32a(+)中,获得重组质粒pET-32a(+)/P216,经IPTG诱导获得重组蛋白,通过Western blot和间接免疫荧光试验检测重组蛋白的免疫原性及黏附活性。结果表明,PCR扩增的目的基因大小为l 636bp;SDS-PAGE检测重组蛋白相对分子质量为80.1ku;Western blot检测表明重组蛋白能与Mhp阳性血清发生特异性反应;间接免疫荧光试验表明该蛋白对猪肺炎支原体黏附SJPL细胞产生占位抑制作用。结果提示,P216蛋白具有良好的黏附活性,能黏附SJPL细胞,从而为猪肺炎支原体其他黏附因子的研究奠定基础。 相似文献
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检验猪肺炎支原体强毒株与弱毒株感染后呼吸道sIgA抗体活性,并比较其抗体分泌规律差异。分别使用猪肺炎支原体强毒JS株和弱毒168株接种实验猪,同时设置健康猪为对照组,按时采集鼻拭子样本。通过ELISA检测0,2,4,7,14,21,28,35,42,49和56d特异性sIgA抗体滴度,比较两组抗体分泌规律。结果显示,在接种4~7d之间,强毒组已出现阳性猪,14d时所有猪呈感染阳性。而弱毒组在14~21d之间开始逐渐出现阳性猪,35d时80%左右的猪呈阳性感染,随后下降。并且强毒组抗体平均滴度高于弱毒组。结果显示,强毒转阳更早,抗体滴度更高,持续时间更长;弱毒为猪支原体肺炎弱毒疫苗株,该菌株同样保持了良好的免疫原性,可刺激呼吸道黏膜产生特异的sIgA,但黏膜抗体转阳时间较晚,滴度较低。强弱毒株在黏膜抗体分泌方面的差异有助于临床上对猪肺炎支原体的感染以及活疫苗免疫进行区别鉴定。 相似文献
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本研究通过滴鼻免疫新途径免疫猪支原体肺炎活疫苗168株,与肺内免疫组及对照组进行比较,来确定滴鼻免疫猪支原体肺炎活疫苗(168株)的免疫保护力。将20只猪随机分为肺内免疫组、滴鼻免疫组、健康对照组和攻毒对照组。定期观察和检测各组猪免疫后的临床症状。结果表明:滴鼻免疫组免疫后,猪群体温正常,无免疫引起的局部或全身不良反应,免疫途径安全可行;滴鼻免疫组和肺内免疫组与健康对照组相比,SIgA水平显著升高,差异极显著(P0.01),但滴鼻免疫组与肺内免疫组相比,差异不显著。流式细胞仪检测显示CD4+数值未发生显著性变化。肺脏剖检评分显示滴鼻免疫组的肺脏的病变水平与攻毒对照组相比呈极显著降低(P0.01),保护率达到60%,相对低于肺内免疫组100%的保护率。猪支原体肺炎活疫苗(168株)通过滴鼻免疫方式,可以产生较好的免疫保护力。 相似文献