H1N1亚型流感病毒鸡胚增殖参数的优化     

徐银兰  王三虎  董永军  张鹏飞  杨猛 《中国畜牧兽医》2016,43(3):805-813

为了研究最佳的H1N1亚型流感病毒鸡胚增殖参数,本试验进行了孵化前种蛋的选择与保存、鸡胚孵化中各参数设定等因素对H1N1亚型流感病毒产毒量影响的研究。其中种蛋的选择与保存,主要考察了蛋重、蛋形指数、保存期、消毒时间及方法等因素,结果显示,蛋重为55~65 g,蛋形指数为1.30~1.35,种蛋保存期为1~4 d,保存温度为16~18 ℃,保存湿度为70%~80%,保存期种蛋的甲醛熏蒸消毒时间为30 min时,可以为H1N1亚型流感疫苗生产提供最佳的种蛋。孵化过程中孵化参数对H1N1亚型流感病毒产毒量的影响,本试验主要将孵化温度、湿度、翻蛋、通风等参数作为研究对象,结果显示在生产H1N1亚型流感疫苗时,最佳孵化参数设定为:温度1~7 d为38.2 ℃、8~9 d为38.0 ℃、10 d为37.8 ℃,湿度1~10 d为65%~70%,翻蛋频率为1次/2 h,前后倾角各为45°,通风风门设定为1~5 d为4、6~10 d为5。本试验结果为H1N1亚型流感疫苗生产提供优质的鸡胚孵化技术,确保鸡胚尿囊液的质量和收获量。  相似文献   

新城疫病毒F48E9株F1基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达     

赵坤  李敬玺  王选年  王三虎 《山西农业大学学报(自然科学版)》2008,28(3):311-315

根据GenBank中新城疫病毒(NDV)F48E9株F1基因序列和原核表达载体pET-28a的克隆位点,设计1对引物,通过PCR方法获得了F1基因;将F1双酶切产物插入原核表达载体pET-28a,得到的重组子命名为pET-F1。用IPTG进行诱导将其在大肠杆菌Rosetta(DE3)中进行了表达,收集菌液进行SDS-PAGE和Western-blot分析,结果表明,NDV F1在pET-F1中获得了高效融合表达,其表达蛋白的分子质量约为31 ku。表达的重组蛋白为进一步研究NDV的免疫特性和分子生物学功能奠定了基础。  相似文献   

一株新城疫病毒F基因的克隆及其遗传进化分析     

徐萍  徐小博  TATIANA Fotina  王三虎  赵坤 《湖北农业科学》2019,58(15)

从新乡市某养鸡场的疑似新城疫病鸡群中分离到1株新城疫病毒,并对该病毒分离株进行F基因的扩增、序列测定和遗传进化分析。结果表明,该新城疫病毒分离株的F基因全长为1 662 bp,F蛋白裂解位点区的氨基酸序列为112R-R-Q-K-R-F117,具备强毒株的特征;同源性分析表明,该新城疫病毒分离株与国内外流行的基因Ⅶ型强毒株之间的同源性较高,为87.5%～97.7%,其中与国内流行的基因Ⅶd型的参考毒株同源性最高,为95.4%～97.7%,而与现用疫苗株La Sota、Clone-30、B1、Mukteswar等同源性较低,84.2%～86.6%;系统进化树分析表明,该新城疫病毒分离株与基因Ⅶd型参考毒株FJ882014、FJ608335和GU227738处在同一个进化分支上,亲缘关系最近。  相似文献   

荧光定量PCR方法的原理及其在研究病毒在动物体内分布规律的应用   总被引：3，自引：2，他引：1  

高均伟  郭延锋  王三虎  潘耀谦  王丽荣  朱国坡  刘兴友 《中国畜牧兽医》2010,37(4):63-65

研究病毒在动物体内的分布情况,主要是为了掌握病毒在动物体内的生长繁殖规律,找到病毒的靶细胞和靶器官,为进一步研究其致病机理和防制技术提供试验依据。荧光定量PCR法具有定量准确、特异性强、自动化程度高等特点,是研究病毒分布规律的主要方法之一,作者综述了此方法的原理及应用。  相似文献   

猪圆环病毒2型PCR检测方法的建立及应用     

郑玉姝  赵朴  刘俊伟  陈金山  姚四新  赵坤  李任峰  王三虎  刘兴友  张智勇 《中国畜牧兽医》2010,37(8):66-68

根据GenBank登录的PCV2的保守序列,设计1对引物,建立了PCV2的PCR检测方法。试验结果表明,该PCR方法敏感、特异,适于临床样品检测,为PCV2的临床诊断和流行病学调查奠定了基础。  相似文献   

1株天然抗菌肽的纯化及活性检测     

胡建和  王青  杭柏林  宋涛  刘兴友  王三虎 《贵州农业科学》2010,38(7)

从牛血液中制备血红蛋白粗提物,运用离子交换层析和反相高压液相色谱法纯化抗菌肽,用琼脂糖弥散法测定其抗菌活性.结果表明:通过离子交换层析获得的阳离子峰具有抗菌活性,通过反相高效液相色谱对阳离子峰进行分离,获得6个峰,其中F1、F2、F4和F6峰对大肠杆菌具有活性,F1、F2和F6对金黄色葡萄球菌具有活性,仅F2对白色念珠菌具有活性,表明F2抗菌肽具有较为广谱的抗菌活性.  相似文献   

来航鸡FOXL2基因的克隆与原核表达     

徐萍  李任峰  赵坤  鲁毅  王三虎 《中国兽医学报》2013,33(4)

根据GenBank已发表的红色原鸡FOXL2基因序列(登录号NM_001012612.1)设计引物,以来航鸡全血为模板,PCR扩增出其基因全长编码区,经BamHⅠ-HindⅢ双酶切后定向克隆于pET28a原核表达载体,获得pET28a-FOXL2重组原核表达载体.将携带有重组原核表达载体的大肠杆菌BL21(DE3)通过0.5 mmol/L IPTG进行诱导表达,经过SDS-PAGE电泳检测,显示诱导表达蛋白大小大约为37 000,与预期表达蛋白大小一致.Western blotting检测显示该蛋白为His融合蛋白,表明重组原核表达载体在大肠杆菌中成功表达出了目的融合蛋白.为进一步探索该基因的生物学功能奠定了基础.  相似文献   

中药制剂对仔猪大肠杆菌性腹泻的治疗效果   总被引：10，自引：0，他引：10  

赵坤  刘兴友  李培庆  王三虎  李军民  刘丽艳  梁美兰 《安徽农业科学》2006,34(11):2408-2409

根据中兽医学理论和中医药理论在现代医学上的应用,以石膏、滑石、白头翁、苍术等组方制成中药制剂,药敏试验结果表明:该制剂对所分离大肠杆菌高度敏感(100%);对比及区域性治疗试验结果表明:其对仔猪黄白痢最高治愈率达96.3%,平均为94.6%。  相似文献   

抗堆型艾美耳球虫子孢子单链抗体的构建及表达   总被引：1，自引：0，他引：1  

王承民  初冬  秦建华  刘丽艳  魏刚才  谢红兵  齐永华  王三虎  吴艳云  何宏轩 《河南农业大学学报》2007,41(2):207-211

应用RT-PCR技术,从稳定分泌抗堆型艾美耳球虫子孢子抗原的单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞Easp-3G3中扩增出抗体VH和VL基因,通过在VH和VL可变区基因之间引入连接肽(Gly4Ser)3,体外构建抗堆型艾美耳球虫的单链抗体基因,并将其克隆至表达载体pET28a( )载体中进行表达,用Ni-NTA的金属亲和层析法进行纯化,通过SDS-PAGE和ELISA测定其纯度和生物学活性.电泳结果分析表明重组蛋白的相对分子量为32kDa,纯度为94%;ELISA反应结果证明该单链抗体保持了单克隆抗体的生物学特性,并能与堆型艾美耳球虫子孢子抗原发生特异性反应.  相似文献   

猪繁殖与呼吸综合征油乳剂灭活疫苗的研制   总被引：6，自引：0，他引：6  

赵坤  王三虎  李敬玺  姜金庆  赵恒章  李军民 《河南农业大学学报》2006,40(4):379-382

利用PRRSV河南分离株研制了细胞毒油乳剂灭活疫苗(简称灭活疫苗),健康猪首免后,第5 d可检到抗体,第35 d抗体达到高峰,第63 d抗体仍维持较高的水平.试验结果表明,灭活疫苗对健康猪均能产生较强的保护力,猪免疫后20~35 d出现抗体高峰,并可持续3个月以上.应用试验结果显示,灭活疫苗免疫保护率均达92%以上.  相似文献