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为分析和比较不同品种犬的表皮生长因子(canine epidermal growth factor,cEGF)基因的分子特征及其差异,收集11个常见不同品种犬的血样,提取基因组,采用PCR方法分别扩增出编码cEGF的N端和C端结构域的犬32号染色体20和21号外显子,纯化后与pMDTM18-T Vector连接构建重组子并转化大肠杆菌DH5α感受态,PCR鉴定阳性克隆后送样测序,用20和21号外显子序列拼接出cEGF全长,采用BLAST和DNAStar软件分析序列相互关系特征。结果:成功扩增出11种不同品种犬EGF编码基因,全长为156 bp,编码52个氨基酸,犬EGF基因序列同源性在97.4%～100%之间。根据cEGF编码基因推导氨基酸序列同源性为98.1%～100%,除了杜宾犬(Doberman Pinscher)EGF氨基酸在52位点处R→F,其余的氨基酸序列都一致。cEGF氨基酸序列与几种其他动物及人EGF相比较发现:cEGF与家猫EGF(Felis catus EGF)同源性很高,达到94.2%。表明不同品种犬的EGF编码基因有很高的同源性且非常保守,并与家猫EGF也有很高的同源性。 相似文献
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根据禽致病性大肠杆菌IMT5155毒力相关基因E9的序列,设计并合成了1对特异性引物,以IMT5155菌株的基因组DNA为模板扩增了E9基因所在ORF的部分序列。将PCR产物进行了T/A克隆,转化大肠杆菌,鉴定成功获得目的片段后,将其定向亚克隆到pET-28a(+)载体中,构建了原核表达质粒pET-28a-E9,并将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,经1 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导和SDS-PAGE分析,出现了与预期目的蛋白一致的外源蛋白带(32.2 ku)。Western-blot分析表明,该融合蛋白具有免疫反应性。对重组蛋白进行纯化后免疫动物进行抗体效价测定,进一步分析重组蛋白的相关生物学功能,分别进行了细胞毒性试验、动物试验、细胞黏附与黏附影响试验。结果表明,该蛋白没有细胞毒性,对小鼠亦无毒性,有一定的黏附作用。 相似文献
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为了建立鸭先天免疫受体核苷酸寡域1(NOD1)的荧光定量RT-PCR检测方法,依据GenBank中鸡NOD1序列设计特异性引物,克隆获得鸭NOD1序列,设计鸭NOD1、凋亡相关碱性蛋白(ARBP)荧光定量RT-PCR特异性引物,以鸭脾脏mRNA反转录后的cDNA为模板,通过构建质粒阳性标准品,建立检测鸭先天免疫受体NOD1转录水平的荧光定量RT-PCR方法。结果显示,建立的荧光定量RT-PCR方法对NOD1 mRNA的最低检测量为102拷贝,在1012~102拷贝范围内线性关系很好,R2≥0.999。该方法具有良好的特异性和重复性。应用于感染鸭疫里默氏杆菌Yb2株樱桃谷鸭脾脏中NOD1转录水平的检测,表明该方法可用于临床检测且适用性良好。 相似文献
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社区垃圾分类管理是一个系统性的工程,其是城市公共管理的重要组成部分。以上海市X村为个案,探究了该社区存在的垃圾分类管理问题,在此基础上,进行了社区垃圾分类管理能力优化的研究,探索了多方协同管理垃圾分类的新格局,力求破解社区垃圾分类难的困境。提出了政府应进一步细化法规、引入市场、加强教育宣传;企业要发挥市场作用,形成垃圾分类产业链条;整合社会力量,发挥社会组织优势;社区要加强人员配备,组建志愿者队伍;公民要树立分类观念,落实分类行动。社区垃圾分类管理能力优化要进一步明晰政府、市场、社区、公民和社会之间的关系,以探索出真正符合中国国情的社区垃圾分类管理模式。 相似文献
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为建立一种快速鉴定O8、O9和O89血清型大肠杆菌的三重PCR方法，根据GenBank登录的3种血清型大肠杆菌O抗原合成基因簇序列，设计3对检测引物，通过优化反应条件建立三重PCR方法。结果：经条件优化后的三重PCR方法可有效鉴别O8、O9和O89血清型的大肠杆菌，具有良好的特异性，对其他肉羊养殖场常见血清型的大肠杆菌和致病菌无特异扩增条带；敏感性检测显示，三重PCR方法对O8和O89血清型的最小检出量为10 pg/μL,对O9血清型的最小检出量为100 pg/μL;采用该方法对临床分离的大肠杆菌进行检测，结果与传统血清凝集方法一致。综上，本研究建立的三重PCR方法可快速、准确、特异地对O8、O9和O89血清型大肠杆菌进行检测，为养殖及肉品加工环节大肠杆菌的流行病学研究提供了更加快捷的检测手段。 相似文献