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【目的】奶牛乳房炎是奶牛养殖业中最为常见,同时也是带来经济损失最为严重的疾病之一,其主要病因是细菌感染。奶牛乳腺的固有免疫是抵抗病原菌入侵的第一道防线。NOD2是机体固有免疫模式识别受体核苷酸结合寡聚域(nucleotide-binding oligomerization domain,NOD)蛋白家族中的重要一员,通过识别其特异性配体胞壁酰二肽(muramyl dipeptide,MDP)——一种广泛存在于革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌细胞壁中的成分,而参与抵抗多种病原菌入侵。奶牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cells,BMEC)除泌乳以外,还是奶牛乳腺的免疫屏障。本试验欲探究MDP对BMEC体外生长状态及胞内NOD2表达量的影响。【方法】选取健康泌乳中期荷斯坦奶牛乳腺腺泡为组织原材料,采用胶原酶Ⅰ消化法结合梯度浓度胰蛋白酶纯化法分离BMEC;使用上皮细胞特异性表达的角蛋白-18(cytokeratin-18,CK-18)及成纤维细胞特异性表达的波形蛋白(Vimentin)抗体,通过免疫荧光技术对纯化后获得的细胞进行鉴定;将BMEC设为6个处理组,分别添加浓度为0(空白对照组)、1、5、10、15及20μg·mL~(-1)的MDP,24 h后显微镜下观察细胞状态,同时提取细胞RNA并反转录为cDNA,采用实时荧光定量PCR方法检测BMEC中NOD2的表达量。【结果】(1)胶原酶Ⅰ消化法结合梯度浓度胰蛋白酶纯化法分离得到的细胞CK-18免疫荧光结果为阳性,而Vimentin反应为阴性;细胞生长状态良好。(2)空白对照组、1、5及10μg·mL~(-1) MDP刺激组的BMEC生长状态良好,无任何肉眼可见变化;15μg·mL~(-1) MDP刺激组可见少量的BMEC脱落;而20μg·mL~(-1)MDP刺激组可见大量BMEC脱落,漂浮,且即使仍贴壁的细胞,其形态也发生了变化。(3)与空白对照组相比,各刺激组细胞NOD2 mRNA的表达量与MDP的刺激浓度呈正相关,即刺激时间为24 h时,随着MDP浓度的增加,BMEC中NOD2受体mRNA的表达量逐渐增加(P0.05)。【结论】成功获得了纯度较好的BMEC,该细胞生长状态良好,可以用于后续试验;虽然BMEC中NOD2受体mRNA的表达量与MDP的刺激浓度呈正相关,但在保持BMEC生长状态正常的前提下,MDP体外刺激浓度应控制在10μg·mL~(-1)以下。这些结果提示我们:当病原菌入侵乳腺时,BMEC可以通过NOD2受体途径参与免疫防御反应,但这种防御能力受细菌数量或毒力强度的影响。即在一定的细菌数量或毒力范围内,随着细菌数量的增加或毒力的增强,奶牛乳腺的免疫防御反应也增强,进而清除外来病原菌;而当细菌数量或毒力强度超过一定范围时,乳腺组织受到严重损伤,免疫防御屏障也随之崩溃,奶牛乳腺局部甚至全身将呈现出明显的临床症状。 相似文献
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为分析硒与奶牛免疫能力的关系,试验随机选取年龄、胎次、体况相近的泌乳奶牛50头。根据血清硒水平高低分为对照组和试验组,通过双抗体夹心法检测每组实验动物血液中的IL-2、IL-6、TNF-α含量。结果显示,试验组奶牛血清中的IL-2均低于对照组,但差异不显著(P>0.05),奶牛血清中硒水平与IL-2呈正相关(R=+0.133,P=0.356);试验组奶牛血清中的IL-6均高于对照组,但差异不显著(P>0.05),奶牛血清中硒水平与IL-6呈显著负相关(R=-0.28,P=0.049);试验组奶牛血清中的TNF-α均低于对照组,差异显著(P<0.05),奶牛血清硒水平与TNF-α呈显著正相关(R=+0.311,P=0.028)。该试验表明适当补充硒,可以提升奶牛机体免疫能力。 相似文献
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2009年4月27日,甲型H1N1流感肆虐全球,给世界各国的人民健康带来了严重危害。2009年5月4日,加拿大也在猪身上检测出了甲型H1N1流感病毒,为此笔者特翻译并改编了辉瑞制药猪流感病毒H3N2/H1N1二价灭活疫苗的相关信息.希望能对控制猪流感病毒的传播贡献微薄之力。 相似文献
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随着奶牛产奶水平的提高。一些高产奶牛易患病,发病的比例也不断升高。奶牛跛行就是这样一类疾病。奶牛跛行不仅影响奶牛正常生长,还会导致奶牛生产性能明显下降,淘汰率增加,给奶牛养殖业造成相当大的经济损失。据美国农业部(USDA)2007年公布的数据显示,全美奶牛跛行的发病率由1996年的10.5%上升到2002年的11.6%,而统计的2006年1-10月份的数据显示。 相似文献