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猪干扰素α在昆虫细胞中分泌表达及其抗病毒活性检测 总被引:3,自引:1,他引:2
【目的】为获得重组猪干扰素α。【方法】本研究应用Bac-to-Bac杆状病毒/昆虫细胞表达系统,将编码成熟猪干扰素α基因插入供体质粒pFastBacⅠ多克隆位点,置于pH启动子控制下,昆虫可识别的蜂素信号肽(honeybee melittin signal peptide,HBM)取代猪干扰素α原有信号肽以实现分泌型表达,并在C端融合6个组氨酸标签以利于纯化。将构建质粒转化DH10感受态细胞进行同源重组,经抗性和蓝白斑筛选,获得重组穿梭质粒Bacmid,转染对数生长期的Sf9昆虫细胞获得重组杆状病毒。【结果】重组蛋白通过间接免疫荧光、Western-blot证明重组蛋白在重组杆状病毒感染的昆虫细胞中获得分泌表达。通过在猪肾细胞(PK-15)上抑制水泡性口炎病毒(VSV)致病变作用检测重组蛋白的抗病毒活性,结果表明:昆虫细胞上清的抗病毒效价达到1.07×105 U?ml-1,昆虫细胞裂解液的抗病毒效价为3.15×104 U?ml-1。【结论】应用蜂素信号肽实现猪干扰素α在昆虫细胞上分泌表达,为临床上防治猪病毒性疫病奠定了基础。 相似文献
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目前,利用居家阳台及室内空闲面积种植长生菜已成为时尚.它不但能美化环境、净化空气、吃到方便放心的新鲜蔬菜,而且减少家庭支出,可谓足不出户的创业平台.该品种有下列特性. 相似文献
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参照GenBank上已发表的鸡白细胞介素2序列设计引物,运用RT-PCR技术,从经conA诱导的20~35日龄固始鸡脾细胞总RNA中扩增出基因片段.将其连接到克隆质粒pGEM-T,转化JM109,选择培养基筛选,酶切和测序鉴定,证明克隆基因为鸡白细胞介素2基因.与已公布的崇仁麻鸡、印度肉鸡、丝毛鸡、来杭鸡、仙居鸡、肖山鸡品种IL-2基因序列比较,在ORF内有2个核苷酸发生变异,其核苷酸序列同源性分别为:99.3%,99.1%,98.4%,99.3%,98.6%,99.5%;其编码的氨基酸序列同源性分别为:97.9%,97.9%,95.8%,97.9%,96.5%,98.6%. 相似文献
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