抗猪附红细胞体单克隆抗体的制备   总被引：1，自引：0，他引：1  

张浩  吴晓东  张守富  单虎  吴延功  王志亮  刘佩兰  朱绍辉 《中国预防兽医学报》2007,29(10):814-816

以纯化的猪附红细胞体免疫BALB/c小鼠,运用淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合,并用间接ELISA方法进行筛选,经过间接ELISA方法、免疫印迹和间接免疫荧光试验进行鉴定,共获得5株分泌抗猪附红细胞体单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为1H1、1H2、3A5、5B1和7E11,其单抗亚类鉴定分别属于IgG2b、IgG1、IgG2b、IgG2b和IgG2b。这5株McAb均能与猪附红细胞体全菌蛋白发生特异性反应,而不与猪肺炎支原体、猪链球菌、大肠杆菌和猪繁殖与呼吸综合征病毒发生反应,并且1H1、3A5和5B1能识别同一抗原位点,1H2和7E11识别另一抗原位点。  相似文献   

美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒荧光RT-PCR检测方法的建立   总被引：10，自引：1，他引：10  

范忠军  柴虹  陈继明  吴延功  孙承英  王志亮 《中国预防兽医学报》2007,29(2):134-137

参照美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）M基因序列，设计引物和探针，并建立其荧光RT-PCR检测方法，以检测严重危害我国养猪业的此型PRRSV。该法能检测到1 TCID50的PRRSV。用此法检测猪瘟病毒、乙脑病毒、伪狂犬病毒、马动脉炎病毒、圆环病毒Ⅱ型和MARC145细胞的RNA，结果均为阴性。对126份临床样品进行检测应用，检测结果（7份阳性，119份阴性）与病毒分离完全符合。此法中的阳性对照为体外转录的dsRNA，具有高度的稳定性，解决了此类检测方法所用的RNA阳性对照所普遍存在的易于降解的难题。  相似文献   

一株小反刍兽疫病毒的分离鉴定与生长曲线测定     

张永强  吴晓东  邹艳丽  包静月  王筱真  王志亮 《中国动物检疫》2015,32(10):76-79

将含高滴度小反刍兽疫病毒的新鲜病料研磨后接种VERO DS细胞系进行病毒分离,出现细胞病变后连续传代,取3代以上培养物,进行RT-PCR和间接免疫荧光试验及生长曲线测定。生长曲线测定分别以0.01和0.1 MOI接种VERO DS细胞,每隔12h测定病毒滴度,连续培养168h,绘制病毒生长曲线,分析生长特性。结果显示,病料接种细胞72h后,出现细胞病变,经RT-PCR和间接免疫荧光试验鉴定为小反刍兽疫病毒?;生长特性研究显示,0.01和0.1 MOI两种病毒接种量,病毒滴度最高均为106 TCID50左右,但峰值出现时间和下降速度存在差异,0.01 MOI接种量出现峰值晚,但是维持高滴度时间较长。本文成功分离一株小反刍兽疫病毒,并对两种接毒量的生长特性差异进行了初步分析,为探索该病毒培养方法和收毒时间提供了借鉴。  相似文献   

新型兽医服务体系建设要素     

王华  吴晓东  王志亮 《动物医学进展》2015,(1):114-116

兽医服务体系对畜牧业持续建康发展,动物重大疫病防控,保障公共卫生安全等起着十分重要的作用。论文结合国家对"三农"工作的发展要求,从兽医服务体系改革思路、构建新型体制机制、提升兽医专业技能水平、政策支持,建立有效的财政保障运行机制、推广普及和新技术应用、完善兽医法律体系建设和兽医信息化建设等方面进行了论述,以期为人类和社会提供更好的服务。  相似文献   

我国小反刍兽疫疫情现状与防控策略   总被引：1，自引：0，他引：1  

王华  吴晓东  包静月  王清华  刘春菊  王淑娟  李林  邹艳丽  王志亮 《动物医学进展》2015,36(6)

小反刍兽疫作为重要的跨境动物疫病之一,已经传入我国并广泛流行。对我国养羊业、民生和经济发展造成沉重的打击。为有效防控该病,从小反刍兽疫的病原学、宿主范围,传播特点、传播因素和综合防控的策略等方面进行了概述,重点从制度保障和防控要素方面进行分析,旨在为我国小反刍兽疫的防控提供理论支持。  相似文献   

施马伦贝格病毒病焦磷酸测序检测方法的建立     

张永强  吴晓东  赵永刚  王志亮 《畜牧兽医学报》2015,(1):174-178

拟建立施马伦贝格病毒(SBV)S基因焦磷酸测序检测方法,用于施马伦贝格病毒病的快速检测和确诊。通过对公开发表的SBVS基因序列与布尼病毒科其他11种病毒S基因进行比对,找出不同病毒变异区域集中且变异区域两侧保守的序列片段,基因合成,体外转录,作为基因扩增模板。在特异性变异序列两端的保守区域设计扩增引物,进行RT-PCR扩增。在保守区域设计双向测序引物,对RT-PCR产物进行双向焦磷酸测序。通过比对测序结果,确定是否为SBV核酸序列;优化条件,确定检测方法的敏感性、特异性和重复性,建立SBVS基因焦磷酸测序检测方法。结果:建立的施马伦贝格病毒病焦磷酸测序检测方法扩增基因片段长度为166bp;敏感性为可检测到104个拷贝;每一条测序引物可准确测出50bp左右核酸序列,双向测序可准确测出100bp左右核酸序列,具有较好特异性,完全满足施马伦贝格病毒病确诊要求;重复测序3次,均能准确测出100bp左右核酸序列。本研究建立的施马伦贝格病毒病焦磷酸测序检测方法,可用于施马伦贝格病毒病的检测和确诊,整个检测过程可在1d内完成,大大缩短了确诊时间。  相似文献   

新疆小反刍兽疫疫情诊断     

王清华  刘春菊  吴晓东  王华  王明国  王永生  田建龙  盛卓君  林汉亮  马伟  李林  任炜杰  王淑娟  赵文年  包静月  王志亮 《中国动物检疫》2014,31(1):72-75

2013年12月新疆伊犁州霍城县发生不明山羊疫情,根据临床症状和剖检变化怀疑为小反刍兽疫感染。对3只病死山羊病料、8只患病山羊分泌物棉拭子样品和6只患病山羊血清样品分别进行病原学和血清学检测。利用竞争ELISA试剂盒对6份血清样本进行抗体检测,结果全部为阳性。利用抗原捕获ELISA试剂盒,在11只病羊样品中都检测到小反刍兽疫抗原。利用能特异性检测小反刍兽疫病毒的荧光定量RT-PCR方法,在11只病羊样品中检测到小反刍兽疫病毒核酸。利用特异引物进行PPRV N基因片段RT-PCR反应,从11只病羊样品中检测到PPRV核酸。针对2号样本病原核酸N基因和F基因片段进行序列同源性比较,结果该毒株与西藏流行株序列片段相似性分别为96.5%和97.5%。遗传进化分析,该病原属于谱系4,与巴基斯坦等国流行毒株遗传关系最近。  相似文献   

非洲猪瘟流行病学及其风险因素分析     

杨公立  张志诚  赵继军  吴晓东  王志亮 《猪业科学》2014,(5):24-27

非洲猪瘟是一种高死亡率和高传染率的疾病,现有全球蔓延的趋势;其传播是一个典型的复杂系统,各个传播因素(猪、野猪、蜱虫等)之间相互影响;其传播能力和存活能力极强,也导致了其控制难度更大。当前由于国际间贸易和交流日益频繁,加之气候变化等多个风险因素的存在,非洲猪瘟对我国食品安全和经济发展产生了越来越现实的潜在威胁。为进一步量化非洲猪瘟风险输入的传播模型,通过科技文献查阅对目前非洲猪瘟流行病学和风险因素的现状进行了归纳和总结,以期为风险分析模型提供思路。  相似文献   

CpG二核苷酸在DNA疫苗中的作用     

王志亮 《国外兽医学(畜禽传染病)》1998,18(3):42-44

  相似文献   

苜蓿植株再生及PPRV-F基因转化条件的研究     

杨国锋  刘霞  孙娟  王志亮 《青岛农业大学学报(自然科学版)》2010,27(3):237-240

以苜蓿品种甘农1号下胚轴为外植体,研究不同培养基对苜蓿愈伤组织、体细胞胚形成的影响,通过体细胞胚发生途径建立再生体系,在此基础上,摸索农杆菌介导小反刍兽疫病毒F基因的转化条件。结果表明:所选培养基愈伤组织诱导率均为100%,UM+0.1mg/L NAA+0.5mg/L KT为诱导体细胞胚的最佳培养基。农杆菌介导的苜蓿遗传转化条件为:下胚轴预培养3d,农杆菌菌液侵染15min,然后在培养基上铺一层灭菌滤纸共培养3d后清洗,选择压为卡那霉素(Km)75mg/L,抑菌浓度为头孢霉素(Cef)300mg/L。本研究为制备防治小反刍兽疫转基因植物疫苗奠定了基础。  相似文献