一步法 RT-PCR 快速检测猪流行性腹泻病毒     

于新友  ;李天芝  ;王金良  ;李峰  ;沈志强 《养猪》2014,(5):118-120

对猪流行性腹泻病毒N基因保守序列设计了1对引物,建立了检测猪流行性腹泻病毒一步法反转录-聚合酶链（RT-PCR）方法,并对其特异性、敏感性进行了研究。该一步法RT-PCR对猪流行性腹泻病毒（PEDV）扩增结果为阳性,对照毒株扩增结果均为阴性;对猪流行性腹泻病毒检测的灵敏性为100 pg总RNA量。以上结果表明,该一步法RT-PCR特异性强、敏感性高、简便、快速,可用于猪流行性腹泻的早期确诊和病毒鉴定。  相似文献   

猪圆环病毒2型Cap蛋白的原核表达及其抗原性分析          下载免费PDF全文

董林  王艳萍  王金良  沈志强  谢金文 《安徽农业大学学报》2011,38(1):55-58

根据GenBank中登录的PCV-2序列,设计1对特异性引物,PCR扩增PCV-2去除核定位信号(nuclear localization signal,NLS)的Cap蛋白基因,经Bam HI和Xho I双酶切后将其插入到表达载体pEGX-4T-1多克隆位点,并转化到表达菌株Rossetta(DM3)中,采用IPTG进行诱导表达,采用SDS-PAGE薄层灰度分析表达情况,收集菌体,使用GST-Protein Purification Kit亲和层析纯化方法对表达的GST-Cap融合蛋白蛋白进行纯化,SDS-PAGE电泳检测纯化效果,Western blot分析纯化后的重组Cap蛋白(rCap)免疫学活性。结果表明,成功克隆了大小为579 bp去除核定位信号的ORF2基因,成功诱导表达出预期大小45.3 ku相一致的rCap蛋白,表达量占总菌体的25%,纯化后的rCap蛋白SDS-PAGE电泳分析纯度达到90%以上,Western blot分析表明纯化的rCap蛋白能与PCV-2阳性血清发生特异性反应,具有良好的免疫学活性。  相似文献   

SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测猪细小病毒方法的建立及初步应用     

沈志强  王金良  郭显坡  王晓虎  汪明  赵德明 《中国兽医学报》2011,31(1)

根据GenBank登录的猪细小病毒株NADL-2(NC001718)的VP2基因序列设计1对特异性引物,经PCR扩增出431bp的目的片段。回收产物与pMD18-T vector连接后转化到基因工程菌DH5α中,提取重组质粒,经PCR及测序鉴定后,作为标准模板建立SYBR GreenⅠ荧光定量PCR标准曲线,并进行敏感性试验、特异性试验和重复性试验。结果表明,标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,R2=0.997 6,产物Tm为82.3～82.9℃,检测灵敏度为72.1拷贝/μL,特异性和重复性良好。本试验所建立的检测PPV VP2基因的SYBR GreenⅠ实时定量PCR方法,为该病毒的致病机制研究、临床早期诊断及定量分析PPV感染程度奠定了基础。  相似文献   

鸡球虫疫苗研究现状   总被引：2，自引：0，他引：2  

赵蕾  于新友  王金良  李坤林 《动物医学进展》2011,(8):98-103

鸡球虫病是危害养禽业的一类重要的寄生虫病,鸡球虫疫苗包括活疫苗、亚单位疫苗、基因工程亚单位疫苗、核酸疫苗及活载体疫苗等,论文对目前鸡球虫疫苗的研究与应用现状进行了综述.  相似文献   

秦川牛保种情况的分析：I 群体规模 年龄结构与迁移     

王金良  杜建昌 《中国牛业科学》1992,18(4):8-12

  相似文献   

水稻螟虫防治技术的改进与应用     

王金良 《中国稻米》1997,(3):31-31

随着农村种植业结构调整，耕作制度改变，海盐县螟虫发生规律变化很大，危害越来越严重，常规治螟技术已难以奏效。本县又是稻、桑混栽地区，使用杀虫双治螟已成习惯，桑蚕中毒严重。1996年我们从测报方法、防治策略、使用农药、防治方法等方面全面系统地改进了螟虫防治技术，通过狠抓下列五项技术措施，战胜了螟虫灾害，同时遏制了桑蚕中毒扩大势头。全县1．3万公顷早稻，第一代螟虫防治效果91．5％，螟害率从37．65％下降到3．2％，与观察区比较，减少损失20％；晚稻1．79万公顷，第二代蝗虫防效95％，第三代蝗虫防效90％，晚稻的螟害率从…  相似文献   

我国道路运输市场的发展趋势     

王化平  王金良  孙忠耀 《农机化研究》2002,(3):36-37

道路运输作为国民经济的基础产业,在整个经济建设中发挥着不可替代的作用,是关系到国民经济能否持续、快速、健康发展的重要因素之一。为此,阐述了在市场经济规律下道路运输业的发展趋势。  相似文献   

PCV2a/2b灭活疫苗与PCV2b亚单位疫苗免疫效力比较试验   总被引：1，自引：0，他引：1  

董林  王艳萍  唐娜  王金良  沈志强 《畜牧与兽医》2015,(4):116-119

比较猪圆环病毒(PCV)2a、PCV2b基因型全病毒灭活疫苗和PCV2b亚单位疫苗对PCV2b基因型强毒株免疫攻毒保护效力。取3种类型PCV2疫苗,分2次免疫PCV2抗原和特异性抗体阴性的BALB/c小鼠和14日龄仔猪,间隔21d,分别于免疫后14、21和35 d进行PCV2特异性ELISA抗体测定。使用临床分离鉴定的PCV2b基因型强毒株进行攻毒,通过攻毒前后临床观察、体温变化、平均相对日增重及PCV2核酸载量检测等对疫苗免疫效果进行评价。结果:不同类型PCV2疫苗免疫BALB/c小鼠后14 d能检测到PCV2特异性抗体,在35 d时抗体水平持续升高,其中PCV2b亚单位疫苗产生抗体水平高于全病毒灭活疫苗;不同类型疫苗均能刺激仔猪产生较好的免疫应答,其中PCV2b亚单位疫苗刺激机体免疫应答强于灭活疫苗;仔猪免疫攻毒试验表明,3种类型疫苗均可刺激机体产生抵御PCV2强毒攻击的特异性免疫应答,免疫组体温变化、相对日增重及PCV2核酸载量检测均与攻毒对照组间存在显著性差异,3种类型疫苗之间差异不显著。试验表明:3种类型PCV2疫苗免疫小鼠和仔猪后均能诱导产生抵御PCV2b基因型强毒攻击的特异性免疫应答反应,有效抵抗PCV2感染和提高猪的生长性能。  相似文献   

猪圆环病毒2型和猪细小病毒双重PCR检测方法的建立及应用     

于新友  李天芝  李峰  王金良  沈志强 《养猪》2015,(4)

根椐Gen Bank中登录的猪圆环病毒2型(PCV2)和猪细小病毒(PPV)核苷酸序列,分别设计2对引物,在建立各病毒单项PCR技术的基础上,优化双重PCR反应条件,建立了2种病毒的双重PCR检测方法,用这2对引物对同一样品中的PCV2和PPV核酸模板进行双重PCR扩增,结果可同时扩增PCV2的245 bp、PPV的475 bp的特异性片段,而对其他4种病原的PCR扩增结果均为阴性。敏感性测定结果表明,该双重PCR技术能检出1 pg的PCV2和1 pg的PPV模板。用105份临床病料对本研究双重PCR技术和单项PCR技术进行对比验证,结果显示,两者的总符合率为100%。表明建立的双重PCR检测方法具有特异、快速、准确的特点,可用于对这两种病毒的同时检测和鉴别诊断。  相似文献   

猪圆环病毒2型分子生物学检测方法的研究进展     

于新友  李天芝  王金良  李峰  沈志强 《广东畜牧兽医科技》2015,40(2):5-8

本文综述了猪圆环病毒2型分子生物学检测方法,主要包括常规PCR、套式PCR、多重PCR、PCR-RFLP、荧光定量PCR和环介导等温扩增等6种方法,对猪圆环病毒2型的监测与相关疾病的诊断有一定的参考价值。  相似文献