红色荧光示踪狂犬病病毒ERA株病毒粒子方法的建立     

单博文  王金良  刘仁强  帅磊  王喜军  葛金英  温志远  夏咸柱  步志高 《中国预防兽医学报》2018,(2)

为建立一种狂犬病病毒(RABV)荧光标记方法,便于有效地观察研究RABV侵入细胞及脱壳的过程,本研究采用CY5-NHS酯红色荧光染料标记氨基的方法将纯化的RABV ERA株进行CY5-NHS酯荧光染料标记;采用亲脂性羰花青荧光染料将细胞膜染成绿色;采用DNA荧光染料将细胞核染成亮蓝色;在3D活细胞激光共聚焦分析成像系统下成像,动态观察病毒吸附细胞并内吞的过程。与传统的染色方法相比,本研究建立的病毒标记方法更适合在3D活细胞激光共聚焦分析成像系统下观察和拍摄RABV感染细胞的过程,为RABV感染机制的研究提供了一种有效研究方法,对于其它弹状病毒科病毒标记方法的建立也具有一定的参考意义。  相似文献   

大棚设施葡萄土壤退化的生物修复技术试验     

王金良  黄文峰  温世君  陈哲  吕芬华  董元华  王小琴 《河北林业科技》2014,(5):19-23

海盐县地处长三角中心地区，由于高强度使用化肥，大棚设施葡萄土壤退化，功能性障碍严重。研发高活性酵素有机肥、葡萄酵素配方专用肥、中微量元素性叶面肥，制定葡萄绿色生态施肥技术方案。用酵素有机肥调节土壤生物功能，化肥与有机肥结合，平衡施肥调节化学过程，中微量元素叶面追肥促进作物健康，消除土壤养分失衡、“富营养化”、土壤酸化、次生盐渍化等各种功能障碍，从而实现集约化退化土壤的快速修复与可持续利用。  相似文献   

畜禽保种的若干基本问题     

王金良 《甘肃畜牧兽医》1993,23(4):26-28

畜禽品种是畜牧业的重要生产资料,不断地改良品种,是持续发展畜牧生产的重要保障。畜禽品种的改良,除利用少数新突变基因外,主要还是通过现有基因的重组。无论是采用传统育种方法还是利用前景诱人的基因工程,都必须以包含于现有品种之中的基因作为重组的原始材料。然而,随着商品畜牧业的发展和极少数良种的普及推广,使得大量的生产水平不高的地方品种被淘汰而灭绝或濒于灭绝,种类繁多的基因从地球上消失,人类面临着畜禽遗传资源枯竭的危险。如何妥善保存现有的畜禽品种资源,防止混杂与丢失,已成为一项紧迫任务。本文拟就国内有关保种文献极少涉及的关于畜禽保种理论与实践的若干基本问题做一阐述,供参考。  相似文献   

畜禽保种最小群体规模的确定   总被引：4，自引：0，他引：4  

王金良  邱怀 《中国牛业科学》1993,19(3):63-64

本文详细论述了目前家畜品种资源保存的重要性和实践中常用的两种保种策略研究进展,并针对不同的保种方法提出了确定家畜保种最小群体规模的理论依据。  相似文献   

确定家畜数量性状适宜度量次数的探讨     

王金良 《青海畜牧兽医杂志》1989,(6):28-30

本文在推导家畜数量性状多次度量准确度增量(△)计算公式和分析△随性状重复力(t)和度量次数(K)变化规律的基础上,提出了两种确定数量性状适宜度量次数的标准;给出了各标准下适宜度量次数的计算公式,并列表例示了各标准若干具体要求下不同重复力性状的适宜度量次数;最后就本研究所探讨的方法及得出的结果在实际育种工作中的应用作了简要的讨论。  相似文献   

全同胞家系选择固定家畜多个显性性状的研究     

王金良 《畜牧兽医学报》1996,27(5):405-411

提出了固家家畜多个不相连锁显性性状的“全同胞交配：全同胞家系选择：育种体系，并推导出其育种进度公式。该体系比随机交配下的全同胞家系选择列为有效；当家系较大时，其充种进度与“多元测交”相当，且简单易行，育种成本低，世代间隔缩短。本文最后讨论了该育种体系成家畜育种中的应用。  相似文献   

山楂不同实生类型种子萌芽状况     

王金良 《落叶果树》1985,(1)

我县自1981年以来采用山楂实生种子育苗,两年来,采种2万余斤,育苗8──余亩,出苗4──余万株。这些苗当年加强管理,嫁接苗率均能达到75%以上。 但是。我县山楂资源丰富,实生类型较多,立地条件复杂,来种处理之后,萌芽状况各有差异,为了真正从我县现有的类型中,选出山楂出种量大,含仁率高,萌芽率高的类型,为利用山楂种子育苗提供可靠依据。我们于1982年8月上旬采集了全县量较大的七个山楂实生类型的种子,并及时进行了处理,于1983年3月播前鉴定了萌芽情况,现将其试验结果简结如下: 一、试材选择及种子处理 为了尽力使其试验有代表性,我们选择试…  相似文献   

猪伪狂犬病毒分子生物学检测方法研究进展     

于新友  李天芝  高鹏  王金良 《猪业科学》2016,(1):42-44

通过综述猪伪狂犬病病毒分子生物学检测方法,主要包括核酸探针、常规PCR方法、套式PCR方法、多重PCR方法、荧光定量PCR方法、环介导等温扩增等6种方法,希望对猪狂犬病病毒病防控有一定的参考价值。  相似文献   

牛乳腺炎无乳链球菌PI-2a菌毛岛辅助蛋白AP1、AP2主要抗原域串联表达及其免疫活性鉴定     

布日额  王金良  吴金花  孙立杰  锡林高娃  董林 《中国兽医学报》2018,(3)

利用DNAStar Protean功能筛选AP1和AP2主要抗原结构域,引入15位柔性多肽,通过重叠延伸PCR技术串联融合AP1、AP2主要抗原域基因,PCR扩增串联体基因片段,将其克隆至pET-30a(+)载体,转化BL21(DM3)细胞,进行高效表达,目的蛋白经亲和层析纯化后进行Western blot鉴定。PCR扩增出320bp的AP1和759bp的AP2主要抗原域,经重叠延伸PCR获得了1 065bp的AP1、AP2串联体基因片段,DNA测序结果表明,无碱基的缺失、突变和移码。构建的重组表达载体经诱导能够可溶性表达,目的蛋白相对分子质量大小约46 000,纯化后重组蛋白的纯度96%,Western blot分析重组融合蛋白结果表明,能够被兔源抗无乳链球菌阳性血清所识别。重叠延伸PCR获得了AP1、AP2主要抗原域串联体,构建了pET-30a(+)/AP1+AP2重组表达载体,诱导目的蛋白呈可溶性表达,表达产物具有良好的免疫反应原性,为进一步研究基于AP1、AP2蛋白的致病机制,检测制剂及疫苗奠定了试验基础。  相似文献   

基于奶牛乳腺炎无乳链球菌PI-2a菌毛岛屿rAP1-BP-AP2重组蛋白的间接ELISA方法的建立     

朝洛蒙  王金良  布日额  吴金花  孙立杰  锡林高娃  陈金龙 《中国预防兽医学报》2018,(7)

为建立一种快速准确高效的检测奶牛乳腺炎无乳链球菌PI-2a菌毛岛屿抗原相应抗体的检测方法,本研究以牛乳腺炎无乳链球菌Ia型PI-2a菌毛岛屿辅助蛋白AP1、AP2及骨架蛋白BP 3基因串联表达的重组蛋白为ELISA包被抗原,通过方阵滴定法优化反应条件,建立了奶牛乳腺炎无乳链球菌抗体的间接ELISA检测方法。优化后抗原的最佳包被量为5.0μg/孔,血清样品最佳稀释倍数为1∶40,酶标二抗最佳稀释倍数为1∶5 000。对S.agalactiae、S.pyogens、E.coli、S.aureus、S.epidermidis阳性血清进行检测结果显示,后4种阳性对照血清未出现阳性反应,表明该方法具有良好的特异性;对已知牛无乳链球菌阳性血清倍比稀释后进行检测时,当稀释倍数达到1:12 800时仍出现阳性结果,表明该方法具有较高的敏感度;重复性试验显示批内变异系数为2.41%~8.89%,批间试验变异系数为7.53%~10.46%;用该方法对426份临床样品进行奶牛无乳链球菌抗体检测,结果显示,其样品阳性检出率为45.07%。本研究首次基于乳腺炎无乳链球菌PI-2a菌毛岛屿三联重组蛋白建立的间接ELISA方法为奶牛无乳链球菌的快速检测提供了一种准确、可靠的检测方法。  相似文献